华南师范大学实验报告.doc

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1、- 1 -华 南 师 范 大 学 实 验 报 告学生姓名学生姓名 林 鸿 锦 学学 号号 20070004002 专专 业业 综合理科二班 年级、班级年级、班级 07 级 课程名称课程名称 生物化学实验 实验项目实验项目 维生素 C 的定量测定 实验类型实验类型 验证验证 设计设计 综合综合 试验时间试验时间 2008 年年 11 月月 3 日日实验指导老师实验指导老师 陈 文 利 实验评分实验评分 一、目的掌握 2，6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素 C 的原理和方法。二、原理维生素 C 是人类营养中最重要的维生素之一，缺少它时会产生坏血病，因此又称为抗坏血酸（ascorbic acid） 。它

2、对物质代谢的调节具有重要的作用。近年来，发现它还有增强机体对肿瘤的抵抗力，并具有化学致癌物的阻断作用。维生素 C 是具有 L 系糖构型的不饱和多羟基物，属于水溶性维生素。它分布很广，植物的绿色部分及许多水果、蔬菜中的含量更为丰富。- 2 -维生素 C 具有很强的还原性。还原型抗坏血酸能还原染料 2,6-二氯酚靛酚（DCIP） ，本身则氧化为脱氢型。在酸性溶液中，2,6-二氯酚靛酚呈红色，还原后变为无色。因此，当用此染料滴定含有维生素 C 的酸性溶液时，维生素 C 尚未全部被氧化前，则滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素 C 已全部被氧化时，则滴下的染料立即使溶液变成粉红色。所以，当溶

3、液从无色变成微红色时即表示溶液中的维生素 C 刚刚全部被氧化，此时即为滴定终点。如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含还原型抗坏血酸量成正比。三、材料、试剂与器具（一）（一） 材料材料新鲜花椰菜（二）（二） 试剂试剂（实验室已备）1、 标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）2、 2%草酸溶液3、 1%草酸溶液4、 0.01% 2，6-二氯酚靛酚溶液（三）（三） 器具器具1、 锥形瓶（50-100mL）2、 移液管（1mL，10mL）3、 容量瓶（100mL）4、 微量滴定管（3mL）5、 漏斗四、实验过程（一）（一） 提取提取水洗净新鲜的花椰菜，称取 1.5g1.5g 剪碎，

4、置研钵中加 5mL2%草酸，研磨成浆，倒入100mL 的容量瓶中，用 2%草酸洗涤研 3 次，洗液一并倒入容量瓶，最后定容至刻度，充分混匀后过滤（弃去最初几个 mL 滤液） 。（二）（二） 滴定滴定1、 标定 2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度取标准维生素 C 溶液 1mL，和 9mL1%草酸一齐加入 50mL 锥形瓶中，同时量取 10mL 草酸加入另一个 50mL 锥形瓶中作空白对照。用 0.01% 2，6-二氯酚靛酚溶液分别滴定至粉红色- 3 -出现，15s 不退色。记录见下表。溶液始末刻度（始-末） （mL）用去染料体积（mL）维 C+草酸0.29-2.63，0.31-1.01（中途补充）3.

5、04草酸0.09-0.270.18根据所用 mL 数，计算每 mL2，6-二氯酚靛酚所能氧化维生素 C 的 mg 数（K K）：0.1/（3.04-0.18）=0.0352、 样品的测定取 50mL 锥形瓶 2 个，分别加入滤液 10mL，用已标定的 2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点，以粉红色能保持 15s 不退色为止。同时用 10mL2%草酸作空白对照。记录见下表。溶液始末刻度（始-末） （mL）用去染料体积（mL）平均值（mL）第一次0.00-2.762.76 样品 第二次0.00-2.762.76V V1 1=2.76草酸0.98-1.09V V2 2=0.11-（三）（三） 结果计算结

6、果计算根据实验数据计算出每 100g 样品的维生素 C 含量：维生素 C（mg/100g 样品）=（V1-V2）KV100/（WV3）式中：V1为滴定样品所用去的染料体积（mL） ；V2为滴定空白所用去的染料体积（mL） ；V3为样品测定时所用滤液体积（10mL） ；V 为样品提取液的总体积（100mL） ；K 为 1mL 染料氧化维生素 C 的量（mg） ；W 为称取样品重量（g） 。将数据代入上式：（2.76-0.11）0.035100100/（1.510）=61.8（mg/100g 样品）五、实验讨论（一）（一） 注意事项注意事项1、某些水果、蔬菜（如橘子、西红柿等）浆状物泡沫太多，可加

7、数滴丁醇或辛醇。2、整个操作过程要迅速，防止还原型抗坏血酸被氧化。滴定过程一般不超过 2min。滴定所用的染料不应小于 1mL 或多于 4mL，如果样品含维生素 C 太高或太低时，可酌情增- 4 -减样液用量或改变提取液稀释倍数。3、本实验必须在酸性条件下进行。在此条件下，干扰物反应进行得很慢。4、2%草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而 1%草酸无此作用。5、草酸不应置于日光下，以免产生过氧化物，当有催化剂存在时，过氧化物会破坏维生素 C。46、干扰滴定因素及解决办法：（1）若提取液中色素很多时，滴定不易看出颜色变化，可用白陶土脱色，或加 1mL 氯仿，到达终点时，氯仿层呈现淡红色。（2）Fe

8、2可还原二氯酚靛酚。对含有大量 Fe2的样品可用 8%乙酸溶液代替草酸溶液提取，此时 Fe2不会很快与染料起作用。（3）样品中可能有其它杂质还原二氯酚靛酚，但反应速度均较抗坏血酸慢，因而滴定开始时，染料要迅速加入，而后尽可能一点一点地加入，并要不断地摇动三角瓶直至呈粉红色，于 15 秒内不消退为终点。（二）（二） 遇到有色提取液怎么办？遇到有色提取液怎么办？本实验中，我们采用的材料是花椰菜。它的提取液几乎是透明无色的，便于我们观察实验现象。可是若是我们遇到了一种有色提取液，那该怎么办呢？课本给我们的提示是可以加白陶土，可是，这种方法不仅会对实验结果造成一定影响，而且有些提取液用这种方法也根本无

9、法去色。其实很简单，只要把提取液和染料的地位反过来就行了。这种方法称为反滴定法2。具体操作：1、标定 2，6-二氯酚靛酚溶液的浓度，方法同本实验，得到每 mL2，6-二氯酚靛酚所能氧化维生素 C 的 mg 数。2、准确吸取 5.00mL 2,6-二氯酚靛酚溶液放人 50mL 锥形瓶中，加人 30mL 蒸馏水稀释，用制备好的样品溶液滴定，直至将 2,6-二氯酚靛酚的深蓝色还原为无色，此时溶液只表现浸提液的残留色。3、计算，维生素 C（mg/100g 样品）=V1KV2100/（WV3）式中：V1为滴定样品所用去的染料体积（mL） ；V2为样品提取液的总体积（mL） ；V3为样品测定时所用滤液体积

10、（mL） ；K 为 1mL 染料氧化维生素 C 的量（mg） ；W 为称取样品重量（g） 。- 5 -实验证明，反滴定法终点灵敏，容易判定，克服因有色溶液影响终点判定而带来的误差。此法准确性高，测定结果可靠，方便快捷。（三）（三） 怎样更准确的测量？怎样更准确的测量？本实验采用滴定的方法，虽然操作较简单，但由于试剂、滴定操作等因素，有可能使实验的误差较大。有没有更准确的方法呢？我们可以用前面的实验已经用过的分光光度计。首先，查资料得知，维生素 C 在 pH=6 时于 267nm 处有一个最大吸收峰3。根据这一点，可设计实验如下：1、配制维生素 C 标准溶液（25.00g/mL）：称取 0.25

11、00gVC,溶于蒸馏水中，定量转移至 100mL 容量瓶中，稀释至标线，摇匀。用吸量管吸取 10.00 mL 定量转移入 1000mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻线，摇匀，因为 VC 水溶液最容易受氧化，要求现配现用。2、配制标准系列溶液：分别吸取上述溶液 0.00,2.00,4.00,6.00,8.00,10.00mL 于 6个洁净且干燥的 50mL 容量瓶中，用蒸馏水稀释至标线，摇匀。3、绘制标准曲线：以蒸馏水为参比，分别取上述配置的含 VC 标准溶液，在 267nm 处测 OD 值，以含 VC 质量为横坐标，OD 值为纵坐标，绘制标准曲线。4、测样品 OD267值，与标准曲线比较，可得结

12、果。（四）（四） 维生素维生素 C C 的生理意义的生理意义51、促进骨胶原的生物合成。利于组织创伤口的更快愈合；2、促进氨基酸中酪氨酸和色氨酸的代谢，延长肌体寿命。3、改善铁、钙和叶酸的利用。4、改善脂肪和类脂特别是胆固醇的代谢，预防心血管病。5、促进牙齿和骨骼的生长，防止牙床出血。 ；6、增强肌体对外界环境的抗应激能力和免疫力。【参考文献】1许秀珍，梁山.生物化学与分子生物学实验指导M.广州：暨南大学出版社，2003.76-782张丙春等. 水果、蔬菜有色浸提液中 Vc 的测定反滴定法J.食品研究与开发，2001，22（3）：54-553于晓萍. 分光光度法快速测定蔬菜水果中 VC 的含量J.河北化工，- 6 -2007，30（11）4钱菊珍. 剌梨汁 VC 的测定J.冷饮与速冻食品工业，1995（2）：215http:/