肾功能检查方法评价PPT课件.ppt

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1、关于肾功能检查的方法评价第一张，PPT共三十页，创作于2022年6月1一、概述一、概述肾病常用实验室检查肾病常用实验室检查尿液检查尿液检查肾活检病理检查肾活检病理检查肾功能检查肾功能检查 肾小球滤过功能肾小球滤过功能 肾小管功能肾小管功能第二张，PPT共三十页，创作于2022年6月2肾小球功能检查肾小球功能检查内生肌酐清除率内生肌酐清除率血清肌酐测定血清肌酐测定血清尿素测定血清尿素测定GFR测定测定血血2-微球蛋白测定微球蛋白测定肾小球功能检查肾小球功能检查第三张，PPT共三十页，创作于2022年6月3肾小管功能检查肾小管功能检查近端肾小管近端肾小管功能检测：功能检测：尿尿 2、1微微球蛋白球

2、蛋白肾小管功能肾小管功能远端肾小管功能检测远端肾小管功能检测昼夜尿比密昼夜尿比密尿渗量尿渗量自由水清除值（自由水清除值（CH2O）尿尿 N-乙酰乙酰-D-氨基葡萄糖苷酶氨基葡萄糖苷酶（NAG）第四张，PPT共三十页，创作于2022年6月4测定血液中非蛋白氮成份是衡量肾功能测定血液中非蛋白氮成份是衡量肾功能的重要指标。的重要指标。血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的低血液非蛋白成份：指除了蛋白以外的低分子量含氮化合物的总称，主要是分子量含氮化合物的总称，主要是尿素尿素，约占约占50%左右，其它尚有左右，其它尚有尿酸尿酸（UA）、）、肌酐肌酐（Cr）、）、氨基酸氨基酸(aa)、核苷酸、肽、核苷酸、肽类

3、及氨等。它们由蛋白分解而来，主要类及氨等。它们由蛋白分解而来，主要由肾脏排出。由肾脏排出。第五张，PPT共三十页，创作于2022年6月5方法方法过去是测定过去是测定NPN（非蛋白氮，（非蛋白氮，non-protein nitrogen）的量，操作繁琐、结果分析复杂。）的量，操作繁琐、结果分析复杂。现在是测定尿素、现在是测定尿素、Cr等肾功指标。等肾功指标。第六张，PPT共三十页，创作于2022年6月6二、血清尿素（二、血清尿素（Urea）的测定）的测定1、早期的生化方法测定尿素是用氮定量的方法，、早期的生化方法测定尿素是用氮定量的方法，故临床上仍习惯将尿素测定称为尿素氮测定。每故临床上仍习惯将

4、尿素测定称为尿素氮测定。每60克尿素含氮克尿素含氮28克克,1mmol/LBUN=1/2mmol/LUrea。2、尿素来源尿素来源：是体内氨基酸分解的终产物之一，：是体内氨基酸分解的终产物之一，由氨基酸生成由氨基酸生成NH3和和CO2,主要在肝脏经鸟氨酸循主要在肝脏经鸟氨酸循环的代谢过程而逐步合成，经血液运输至肾、由环的代谢过程而逐步合成，经血液运输至肾、由尿液排出体外。全血值较血清值低，临床上常测尿液排出体外。全血值较血清值低，临床上常测血清标本血清标本。3、单位单位：WHO推荐用推荐用mmol/LUrea表示浓度。表示浓度。第七张，PPT共三十页，创作于2022年6月7血清尿素（血清尿素（

5、Urea）测定的方法）测定的方法直接法直接法-二乙酰一肟法：二乙酰一肟法：WHO推荐的常规方法推荐的常规方法间接法间接法-尿素酶法（参考方法）尿素酶法（参考方法）决定性方法决定性方法-ID-MS第八张，PPT共三十页，创作于2022年6月8（一）二乙酰一肟法（一）二乙酰一肟法1、原理原理：尿素与二乙酰一肟在强酸溶液，经加热生成红色二：尿素与二乙酰一肟在强酸溶液，经加热生成红色二嗪衍生物，称为嗪衍生物，称为Fearon氏反应，在氏反应，在540nm比色。比色。二乙酰一肟二乙酰一肟+H2O+H+双乙酰双乙酰+羟胺羟胺双乙酰双乙酰+尿素尿素+H+红色二嗪衍生物红色二嗪衍生物+2H2O加热加热第九张，

6、PPT共三十页，创作于2022年6月92、注意事项、注意事项羟胺是干扰物质羟胺是干扰物质，要用氧化剂除去，如过，要用氧化剂除去，如过硫酸盐、砷酸、过氯酸、氯胺硫酸盐、砷酸、过氯酸、氯胺T以及一些阳以及一些阳离子。现在磷酸即做酸介质又作氧化剂。离子。现在磷酸即做酸介质又作氧化剂。加入氨基硫脲和加入氨基硫脲和Fe3+（有氧化作用可以消（有氧化作用可以消除羟胺的干扰）或除羟胺的干扰）或Cd2+（镉离子）可增加（镉离子）可增加呈色的稳定性，提高反应灵敏度。呈色的稳定性，提高反应灵敏度。在呈色反应时，在呈色反应时，A要逐渐降低，要逐渐降低，30分钟内分钟内降低降低6%，1h降低降低12%，2h降低降低1

7、5%，所以，所以宜宜在在30分钟内比色分钟内比色。第十张，PPT共三十页，创作于2022年6月103、评价、评价优点优点WHO推荐的常规方法推荐的常规方法，简便快速精确，简便快速精确550nm波长比色最灵敏，且可摒除蛋白干波长比色最灵敏，且可摒除蛋白干扰，故标本无需作去蛋白处理扰，故标本无需作去蛋白处理线性范围宽线性范围宽，达，达140mol/L干扰因素少干扰因素少：黄疸、溶血、：黄疸、溶血、BIL一般无影响一般无影响特异性较好特异性较好：少量鸟氨酸循环的中间产物：少量鸟氨酸循环的中间产物（瓜氨酸）等要干扰反应，但含量甚微，可（瓜氨酸）等要干扰反应，但含量甚微，可认为无影响认为无影响第十一张，

8、PPT共三十页，创作于2022年6月11缺点缺点特异性不如酶法特异性不如酶法强酸有刺激性、腐蚀性强酸有刺激性、腐蚀性反应期间有臭味反应期间有臭味第十二张，PPT共三十页，创作于2022年6月12（二）尿素酶法（脲酶法）（二）尿素酶法（脲酶法）1、原理：先用尿素酶特异性地水解尿素，生、原理：先用尿素酶特异性地水解尿素，生成氨和成氨和CO2，再用一些方法来定量。，再用一些方法来定量。尿素尿素+H2O2NH3+CO2进一步可用以下方法定量：进一步可用以下方法定量：尿素酶尿素酶第十三张，PPT共三十页，创作于2022年6月13Berthelot氏反应（尿素酶氏反应（尿素酶-靛酚显色法、酚靛酚显色法、酚

9、-次氯次氯酸显色法、酸显色法、脲酶波氏比色法脲酶波氏比色法）：原理：原理：NH4+NaClO+2酚吲哚酚酚吲哚酚+5NaCl+5H2O吲哚酚：蓝色解离型（吲哚酚：蓝色解离型（630nm）催化剂：亚硝基铁氰化钠催化剂：亚硝基铁氰化钠评价评价：简便，专一性好灵敏度高、结果准确，批：简便，专一性好灵敏度高、结果准确，批内内CV2.7-3.9%，血清用量少（，血清用量少（10l即可），最终即可），最终稀释度大，故不需要去蛋白。稀释度大，故不需要去蛋白。参考值：参考值：2.86-8.2mmol/LOH-第十四张，PPT共三十页，创作于2022年6月14尿素酶尿素酶-纳氏试剂显色法纳氏试剂显色法碳酸铵碳酸

10、铵+纳氏试剂纳氏试剂+8NaOH 2Hg2ONH2I棕黄色沉淀棕黄色沉淀+8KI+6NaI+NaCO3+6H2O尿素酶尿素酶-谷氨酸脱氢酶法谷氨酸脱氢酶法:-酮戊二酸酮戊二酸+NH4+NAD(P)H+H+反应要消耗反应要消耗NAD(P)H，340nm测测A的减少，用终点法或速率的减少，用终点法或速率法。法。电化学方法电化学方法尿素由非离子化状态尿素由非离子化状态NH4+，可用自动化电导仪测定导电率变化；，可用自动化电导仪测定导电率变化；或用或用NH4+ISE来测定电位变化。来测定电位变化。谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶NAD(P)+H2O+谷氨酸谷氨酸第十五张，PPT共三十页，创作于2022年6月1

11、52、评价、评价优点：特异性强、灵敏度高、准确性好优点：特异性强、灵敏度高、准确性好要求：要求：尿素酶是蛋白，故酸、碱、重金属均会破尿素酶是蛋白，故酸、碱、重金属均会破坏或影响其活性。坏或影响其活性。pH、温度、时间要严格掌握、温度、时间要严格掌握防止环境中的防止环境中的NH3污染。污染。(为酶促反应的特点为酶促反应的特点)第十六张，PPT共三十页，创作于2022年6月16三、肌酐三、肌酐(Cr)的测定的测定肌酐是肌酸的代谢产物，由肾脏排出。血液中也有少量的肌酐是肌酸的代谢产物，由肾脏排出。血液中也有少量的肌酐，一般与肌酐，一般与BUN同时测定，用以了解肾功，两者比值同时测定，用以了解肾功，两

12、者比值(血清血清BUN mg/dl:血清血清Cr mg/ml)在正常情况下为在正常情况下为1220，计算比值可粗略判断肾性或肾外因素所致的氮质血症，计算比值可粗略判断肾性或肾外因素所致的氮质血症，还可测血与尿中肌酐，以计算肾小球滤过率。还可测血与尿中肌酐，以计算肾小球滤过率。方法：方法：决定法方法决定法方法ID-MS、离子交换层析法，、离子交换层析法，参考方法：参考方法：HPLC 常规方法常规方法：去蛋白苦味酸显色去蛋白苦味酸显色(Jaffe反应反应)法、法、不去蛋白不去蛋白Jaffe拟一级动力学法拟一级动力学法(速率法速率法)酶法酶法第十七张，PPT共三十页，创作于2022年6月17(一一)

13、、苦味酸法、苦味酸法(Jaffe氏反应氏反应)1、原理：、原理：Jaffe于于1886年报告的。肌酐与苦味酸在碱年报告的。肌酐与苦味酸在碱性介质中生成橙红色性介质中生成橙红色(510nm)的苦味酸肌酐复合物。的苦味酸肌酐复合物。2、消除假肌酐干扰的方法：消除假肌酐干扰的方法：假肌酐假肌酐：血浆中的葡萄糖、：血浆中的葡萄糖、VitC、丙酮酸、蛋白质、丙酮酸、蛋白质、乙酰乙酸、丙酮等均能与碱性苦味酸作用，生成红色乙酰乙酸、丙酮等均能与碱性苦味酸作用，生成红色化合物。在化合物。在Jaffe氏反应中，约占总量的氏反应中，约占总量的1/4，RBC内内更高，故测定肌酐时一般用血浆或血清标本。更高，故测定肌

14、酐时一般用血浆或血清标本。消除假干扰的方法：消除假干扰的方法：第十八张，PPT共三十页，创作于2022年6月18制备无蛋白血滤液制备无蛋白血滤液或在反应体系中加入或在反应体系中加入十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠(SDS)，与蛋白形成不与，与蛋白形成不与苦味酸起反应的复合物，加入硼砂与葡萄苦味酸起反应的复合物，加入硼砂与葡萄糖、糖、VitC形成非反应的复合物。形成非反应的复合物。二次比色法二次比色法：特异性高，可用血清直接：特异性高，可用血清直接测定。测定。Jaffe氏反应后先进行第一次比色，氏反应后先进行第一次比色，测得真假肌酐的总测得真假肌酐的总A，再在反应体系中加，再在反应体系中加入肌酐酶或

15、入肌酐酶或6N的醋酸，以分解真肌酐，再的醋酸，以分解真肌酐，再进行一次比色测假肌酐，二次进行一次比色测假肌酐，二次A值之差即值之差即为真肌酐的为真肌酐的A值值第十九张，PPT共三十页，创作于2022年6月19用硅酸铝土或阳离子交换树脂等用硅酸铝土或阳离子交换树脂等吸附吸附真肌酐，再洗真肌酐，再洗脱、脱、Jaffe氏反应。方法繁杂、准确度受影响。氏反应。方法繁杂、准确度受影响。用用控制控制pH值值的方法来消除干扰：的方法来消除干扰：在在pH12时，假肌酐的干扰很小。时，假肌酐的干扰很小。在在pH10时，作一个血清蛋白，减去空白和蛋白干扰时，作一个血清蛋白，减去空白和蛋白干扰纠正常数纠正常数速率法

16、速率法：特异、快速，用于自动化分析仪：特异、快速，用于自动化分析仪在在Jaffe氏反应中，乙酰乙酸在最初氏反应中，乙酰乙酸在最初20秒与苦味酸形秒与苦味酸形成复合物较快，在成复合物较快，在2080秒间则主要是真肌酐起起反秒间则主要是真肌酐起起反应，应，80秒以后是其他干扰物。于是测定反应后秒以后是其他干扰物。于是测定反应后2060秒秒间间A第二十张，PPT共三十页，创作于2022年6月20(二二)、酶法、酶法评价：特异性高、快速、操作简便。但酶评价：特异性高、快速、操作简便。但酶试剂来源较困难、操作中温度、试剂来源较困难、操作中温度、pH值、保值、保温时间均要控制。温时间均要控制。方法：方法：

17、部分酶法部分酶法:Jaffe氏反应后肌酐酶二次比氏反应后肌酐酶二次比色法、肌酐酶法色法、肌酐酶法 全酶法：全酶法：第二十一张，PPT共三十页，创作于2022年6月211、肌酐亚氨基水解酶、肌酐亚氨基水解酶(肌酐酶肌酐酶)法法肌酐肌酐+H2ONH4+N-甲基乙内酰脲甲基乙内酰脲再对再对NH4+进行定量进行定量，方法如下：，方法如下：NH4+离子选择电极法离子选择电极法用指示剂用指示剂(溴酚蓝溴酚蓝)与铵染色定量与铵染色定量偶联谷氨酸脱氢酶法偶联谷氨酸脱氢酶法：-酮戊二酸酮戊二酸+NH4+NAD(P)H+H+NAD(P)+H2O+谷氨酸谷氨酸(340nm测定测定A值变化值变化)注：以上方法测注：以

18、上方法测NH4+要防止内源性氨、环境氨的污染要防止内源性氨、环境氨的污染肌酐酶肌酐酶谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶第二十二张，PPT共三十页，创作于2022年6月222、肌酐酰氨基水解酶法、肌酐酰氨基水解酶法(全酶法全酶法)谷氨酸脱氢酶谷氨酸脱氢酶肌酸肌酸肌酐肌酐+H2O评价：特异性高、可用终点法或速率法评价：特异性高、可用终点法或速率法肌酸激酶肌酸激酶磷酸肌酸磷酸肌酸ATPADP丙酮酸激丙酮酸激酶酶丙酮酸丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸NAD(P)H+H+NAD+LDH测定测定340nmA值的变化值的变化第二十三张，PPT共三十页，创作于2022年6月233、HPLC：参考方法：参考方法应用

19、离子对技术，反向柱，于应用离子对技术，反向柱，于200nm波长定量波长定量评价：高度特异性，但要一定的技术条件评价：高度特异性，但要一定的技术条件第二十四张，PPT共三十页，创作于2022年6月24内生肌酐清除率测定(Ccr)外源性肌酐外源性肌酐肌酐肌酐内生性肌酐内生性肌酐 大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，排泌大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，排泌量很少，其清除率基本代表量很少，其清除率基本代表GFRGFR。第二十五张，PPT共三十页，创作于2022年6月25试验操作方法：试验操作方法：1.1.低蛋白饮食、禁肉食、避免剧烈运动低蛋白饮食、禁肉食、避免剧烈运动3 3天。天。2.2.收集

20、收集24h24h或或4h4h尿液（甲苯防腐），同时取血尿液（甲苯防腐），同时取血23ml23ml3.3.测定血、尿中肌酐浓度、记录尿量测定血、尿中肌酐浓度、记录尿量4.4.计算计算参考范围：参考范围：8080120ml/min120ml/min（成人）（成人）第二十六张，PPT共三十页，创作于2022年6月26临床意义临床意义：判断肾小球损害的敏感指标判断肾小球损害的敏感指标评估肾功能损害程度评估肾功能损害程度指导临床治疗指导临床治疗第二十七张，PPT共三十页，创作于2022年6月27四、血清尿酸四、血清尿酸(UA)测定测定尿酸是核酸中嘌呤分解尿酸是核酸中嘌呤分解代谢的终产物，是血浆代谢的终产

21、物，是血浆中中NPN成份之一，且有成份之一，且有酸性和还原性酸性和还原性决定性方法：决定性方法：ID-MS参考方法：尿酸酶法参考方法：尿酸酶法(紫紫外法外法)磷钨酸还原法：已淘汰磷钨酸还原法：已淘汰第二十八张，PPT共三十页，创作于2022年6月28(一一)氧化还原法氧化还原法1、磷钨酸法、磷钨酸法(已淘汰，干扰多已淘汰，干扰多)尿酸尿酸+磷钨酸磷钨酸尿素尿素+CO2+钨蓝钨蓝2、杂菲铁法、杂菲铁法(快速简便，快速简便，VitC干扰干扰)UA+Fe3+H+UA氧化产物氧化产物+Fe2+Fe2+1,10-二氮杂菲二氮杂菲505nm比色比色第二十九张，PPT共三十页，创作于2022年6月29感感谢谢大大家家观观看看第三十张，PPT共三十页，创作于2022年6月