薄层色谱基本知识及斑点异常.ppt

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1、1,薄层色谱基础知识,Zhuhaikangabc,及斑点异常的原因和克服,2,薄层色谱,结果判定,显色,展开,点样,薄层板,3,薄层板的制备,什么是固定相？,固定相,4,薄层板的制备,常用固定相,1、聚酰胺,2、硅胶,3、硅澡土,4、氧化铝,5、纤维素,6、其他,5,薄层板的制备,聚酰胺,1、什么是聚酰胺？,2、聚酰胺适合那些化合物的分离？,适用于多元酚类化合物分离，如黄酮，醌类，酚酸，含羰基的化合物等,6,薄层板的制备,硅胶,1、什么是硅胶,2、硅胶适合酸性和碱性等化合物的分离,7,薄层板的制备,3、实验室硅胶有哪些型号,硅胶S,8,硅胶G和硅胶S,薄层板的制备,1.硅胶G是指硅胶粉+15%

2、煅石膏。,2.硅胶S是指硅胶粉+15%淀粉。,9,硅胶H或硅胶N,薄层板的制备,是指纯硅胶粉，没有添加任何粘合剂,10,硅胶H和硅胶G的应用,薄层板的制备,1物质是有色的，在日光看 2物质没有颜色但可以利用显色剂显色 3.可以荧光显色,11,硅胶HF254和硅胶GF254,薄层板的制备,1.是指添加了荧光剂，如硫化镉等。,2.应用范围：物质有荧光，在254波长紫外下看其荧光；物质没荧光，在254波长紫外下看暗斑（荧光淬灭）,12,薄层板的制备,无黏合剂,自制板,含黏合剂,13,薄层板的制备,黏合剂,cmc-na溶液的配制,先将称好的CMC-Na加入所需水量的8/10,让其充分溶涨后,再加热煮沸

3、,然后将剩余水慢慢加入.这样在煮沸过程中不易形成颗粒,煮沸时间短.,14,薄层板的制备,黏合剂,cmc-na溶液的浓度,溶液的浓度0.3-0.7%比较合适，实际操作中0.40.5最为实用，浓度高了将来显色时如果有加热过程稍不小心板子容易发黑，浓度低了铺出来的板子不结实，不好保存,15,薄层板的制备,黏合剂,cmc-na溶液的存放,注意放置时间太长的CMC-Na溶液可能会发黄，而且可能有霉菌出现，最好不要使用。,16,薄层板的制备,操作：除另有规定外，是指将1份固定相和3份水溶液，研磨混合，置玻璃板上使涂布均匀，平台上于室温下晾干，活化后，置有干燥器中备用。,制板,17,注意点,1.沿同一方向研

4、磨混合，避免产生气泡 2.厚度为0.20.3mm，涂层薄，点样容易过载；涂层厚，显色不那么明显 3.室温下在水平位置放置，待薄层发白近干,薄层板的制备,18,注意点,5.研磨时间 6.铺板用的匀浆不宜过稠或过稀：过稠，板容易出现拖动或停顿造成的层纹；过稀，水蒸发后，板表面较粗糙。匀浆配比一般是硅胶G:水=1：23，硅胶G:羧甲基纤维素钠水溶液=1:2。匀浆的稀稠除影响板的平滑外，也影响板涂层的厚度，进一步影响上样量 。,薄层板的制备,19,活化,2.在105110度活化30分钟。 3.一般检识水溶性成分或一些极性大的成分时，所用薄层板只在空气中自然干燥，不经活化即可贮存备用 。,薄层板的制备,

5、1.薄层板为何要进行“活化”？,20,薄层色谱的点样,点样器,21,薄层色谱的点样,洁净 、干燥,点样环境,22,薄层色谱的点样,点样的形状,1、圆点,2、条带状,23,薄层色谱的点样,点样的距离,1015mm,810mm,5mm,直径不大于2mm,宽度48mm,高效板,24,薄层色谱的点样,点样的注意点,1.不要弄破薄层板 2.点样量大时，少量多次， 3.点好样的薄层板用电吹风吹干或放入干燥器里晾干,25,薄层色谱的展开,展开,将点好样品的薄层板放入展开缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距原点5mm为宜，密封,26,薄层色谱的展开,展开剂配制,2.混合展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用,如需

6、分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用,1.把各组成溶剂移入分液漏斗，强烈振摇使混合液充分混匀，放置，如果分层，取用体积大的一层作为展开剂。最好不要把各组成溶液倒入展开缸，振摇展开缸来配制展开剂。,27,薄层色谱的展开,预饱和、预平衡,展开缸如需预先用展开剂预平衡，可在缸中加入适量的展开剂，密闭，一般保持1530分钟,28,薄层色谱的展开,展开距离,展开至规定距离（一般为815cm）,29,薄层色谱的显色,显色与检视,1.供试品含有可见光下有颜色的成分可直接在日光下检视，也可用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色，或加热显色，在日光下检视。2.有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的

7、物质可在356nm紫外光灯下观察荧光色谱。3.对于可见光下无色，但在紫外光下有吸收的成分可用带有荧光剂的硅胶板（如GF254板），在254nm紫外光灯下观察荧光板面上的荧光猝灭物质形成的色谱,30,1、拖尾现象,2、边缘效应,3、S形及波形斑点,4、念珠状斑点,5、斑点与对照品对不上,薄层色谱中斑点的异常,异常现象,6、其它,31,拖尾原因,斑点异常,1.点样量过载,2.点样圆点未重合,3.展开剂,4.薄层析,5.其他,32,拖尾,斑点异常与克服,1.点样量过载,任何吸附剂，它们的负载化合物的能力是有一定限度的，因此点样过量而超载后，过剩的化合物被抛在后面，形成拖尾现象,克服方法：A.点样时可

8、以点成条带状 B.选用稍厚一点的板,33,拖尾,斑点异常与克服,2.点样圆心未重合,样点虽然在同一垂直线上但样点上下圆心没有重合，致使样点呈近椭圆形，也是形成拖现象的原因之一,克服方法：点样位置要准确，预先设计好点样的位置，然后用铅笔作好标记，每次点样对准圆点,34,拖尾,斑点异常与克服,3.展开剂的配制,35,拖尾,斑点异常与克服,4.薄层板,为了提高样品的分离度和减少斑点的拖尾，铺板时在硅胶中加入某些酸（如硼酸，草酸），碱（如氢氧化钠），盐（如磷酸二氢钠，磷酸氢二钠）等将硅胶板改性,克服方法：硅胶预制板可用浸板的办法改性,36,边缘效应,2、薄层板,3、展开剂未预饱和,斑点异常,1、点样边

9、距,4、其他,37,边缘效应,斑点异常与克服,1.点样边距,38,边缘效应,斑点异常与克服,2.薄层板,薄层板厚薄不均匀，两边厚或者两边薄都是形成边边缘效应的原因之一,克服方法：选用符合要求的薄层板。（符合要求的薄层板应该在反射光下板面平滑均匀，无气泡，灰尘或颗粒，透射光下薄层纹理均匀细腻）,39,边缘效应,斑点异常与克服,3.预饱和,在薄层板上一般是边缘上的展开剂较容易挥发,如果这几个有机溶剂的挥发性能差异比较大,那么就会造成薄层板上边缘和中间展开剂比例的差异而产生展开速度不一致的现象,克服方法：展开前要充分饱和,40,波形斑点,S形斑点,斑点异常,S形及波形斑点,41,S形斑点,斑点异常,

10、S形斑点是指含多咱成分的样品层析时，其斑点不是顺次分布于原点至展开前沿的垂直线上，而是呈S形分布于垂直线两侧。,42,波形斑点,斑点异常,波形斑点：是指某些含多种成分的样品液，顺次点于同一起始线上，展开后，这些成分相同的斑点不吃不开直线状平行于起始线，而是呈波浪形。,43,S形及波形斑点,斑点异常,2.为避免上述现象的出现，应选用厚薄均匀的薄层板,1.产生原因：多数是因为薄层板厚薄不匀。,44,念珠状斑点,斑点异常,念珠状斑点是指化合物斑点之间距离小，相互连接呈念珠状,45,念珠状,斑点异常与克服,产生原因及克服方法,1.样品中成分过多，在下定长度的薄层板上，排布不开，彼此重叠。可适当增加层析

11、板长度，使斑点距离加大或采用双向层析，使所含成分向两个方向展开可以避免念珠状斑点的出现。,2.多次点样时，点样中心不重合，形成复斑。应以适当浓度供试液一次点样，若多次点样，点样中心必须重合。,46,Rf值不稳定,斑点异常,1.温度 2.湿度 3.手工制板 4.溶剂质量,47,Rf值不稳定,斑点异常与克服,1.温度,温湿度对薄层影响都很大。不冻结的前提下，通常温度越低分离越好，较难的分离需在低温下分离，例如人参皂苷。,48,Rf值不稳定,斑点异常与克服,2.湿度,49,Rf值不稳定,斑点异常与克服,2.湿度,湿度的影响，主要是影响薄层板的吸附能力，导致选择性（容量因子）的变化，湿度应根据实际情况确定。温度控制使用空调器或冰柜，湿度控制是通过在另一展开槽放置相应浓度的硫酸,50,Rf值不稳定,斑点异常与克服,湿度的控制,51,Rf值不稳定,斑点异常与克服,手工制板,由于手工制的板的技巧不同，所制备的薄层板的质量不同造成重现性差,52,样品斑点与对照品斑点不在水平线上,斑点异常,1.点样时间的差异，导致各点之间所含水分不一所引起的 2.也可能是由于点样操作不当，如使用吹风机加热，导致样品变为固态后被强烈地吸附在吸附剂的颗粒上，造成样品部分在原点滞留或形成拖尾3.样品中含多种成分，相互影响吸附及洗脱过程。4.各斑点浓度差异造成。（可通过实验，点上一系列浓度的点以排除原因,53,谢谢！,