欧蒙过敏原总IgE说明书.docx

《欧蒙过敏原总IgE说明书.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《欧蒙过敏原总IgE说明书.docx（10页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、总IgE检测试剂盒（酶联免疫法）说明书产品名称 通用名称 总IgE检测试剂盒(酶联免疫法)英文名称 Total IgE ELISA 包装规格 订货号靶抗原基质规格EV 3840-9601E人IgE包被抗体的微孔板9601(96)预期用途 用于体外定量检测人血清或血浆中总IgE。适应症：过敏性疾病 、蠕虫病、湿疹性或非湿疹性皮炎、IgE骨髓瘤等。临床意义：1） 过敏反应和特应性疾病的诊断：除了皮肤和激发实验、检测特异性IgE外，变态反应性疾病的诊断还包括检测总IgE水平。但是，过敏反应并不总伴有总IgE水平的升高（成人100 IU/ml）。相反，低水平的IgE（成人25 IU/ml）也不能排除患

2、有特应性过敏反应。通过长期脱敏治疗和远离过敏原，总IgE滴度通常会下降。通过测定总IgE水平可以区分过敏性哮喘和内源性哮喘，过敏性鼻炎和血管舒缩性鼻炎以及婴儿特应性皮炎和脂溢性皮炎。在特应性皮炎患者中可见极高浓度的IgE（数千IU/ml）。其他过敏性（和高IgE水平）的疾病包括急性复发性或慢性荨麻疹、复发性Quincke水肿（血管神经性水肿）、胃肠道不耐受和不明原因的疹病。检测总IgE也可用于鉴别诊断肺部嗜酸性粒细胞浸润、变态反应性曲霉病、外源性变态反应性肺泡炎（农夫肺和养鸽者肺）和Churg-Strau 综合征。2） 其他疾病中的IgE：高IgE水平的非变态反应性疾病包括多种形式的蠕虫病，如

3、弓蛔虫病、蛔虫病、血吸虫病、钩虫病、利什曼原虫病、毛线虫病。然而，在绦虫病和蛲虫病中未见有IgE水平升高。对于大多数病例，经有效治疗后，IgE水平可降至正常值范围内。在下列疾病中可检测出高浓度的IgE： 湿疹性或非湿疹性皮炎； IgE骨髓瘤； 急性系统性红斑狼疮（SLE）； 移植物抗宿主反应； T细胞缺陷（Wiskott-Aldrich 综合征）； 2度或3度烧伤； 耳鼻喉肿瘤； 肝病（尤其与酒精滥用有关）； AIDS晚期阶段（CD4+ T细胞明显下降）。在下列疾病中可有IgE缺陷： X-染色体相关低丙种球蛋白血症； 严重的联合免疫缺陷（SCID）； 毛细管扩张性运动失调； 肺纤维化疾病； 极

4、少数的健康人。10 / 10检验原理 试剂盒中每个微孔板条有8个可拆分的包被有抗人IgE多克隆抗体的微孔。第一次温育时，稀释后的样本在微孔中反应。如果样本阳性，特异性IgE与抗体结合。为了检测结合的IgE，加入能发生颜色反应的酶标抗人IgE抗体（酶结合物）进行第二次温育。然后加入酶底物，发生颜色反应。通过标准品1-4绘制的标准曲线来确定IgE浓度。主要组成成分 成分颜色规格标识1. 微孔板：包被有抗原的微孔12条，每条有8个可拆分的微孔，直接使用 -128STRIPS2. 标准品1：500 IU/ml（IgE， 人），直接使用 红色，颜色随抗体浓度的降低而变浅12.0mlCAL1 3. 标准品

5、2：100 IU/ml（IgE， 人），直接使用 12.0mlCAL24. 标准品3：10 IU/ml（IgE， 人），直接使用 12.0mlCAL35. 标准品4： 0 IU/ml（IgE， 人），直接使用 12.0mlCAL46. 阳性对照1：（高浓度IgE，人），直接使用 深蓝12.0mlPOS CONTROL17. 阳性对照2：（低浓度IgE，人），直接使用 浅蓝12.0mlPOS CONTROL28. 酶结合物：过氧化物酶标记的抗人IgE（小鼠），直接使用紫色112mlCONJUGATE9. 样本缓冲液：直接使用橙色1100mlSAMPLEBUFFER10. 清洗缓冲液：10倍浓缩无

6、色1100mlWASHBUFFER 1011. 色原/底物液：TMB/H2O2，直接使用无色112mlSUBSTRATE12. 终止液：0.5M硫酸，直接使用无色112mlSTOP SOLUTION13. 产品说明书-1份14. 质控表-1张LOT 产品批号储存温度IVD 体外检测未开封可稳定至1不同批号试剂盒内的酶结合物、样本缓冲液、清洗缓冲液、色原/底物液和终止液可互换。2定标：采用国际参考品NIBSC 75/502 (National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, England) 定标，采用

7、国际单位(IU)。NIBSC 75/502血清中抗体浓度为5000 IU/ml。储存条件及有效期 2-8C保存，不要冰冻。未开封前，试剂盒中各成分在有效期前均稳定有效。1. 包被有抗原的微孔板：自第一次开封后，抗原包被的微孔板在干燥的2-8C的环境中保存4个月。2. 清洗缓冲液：稀释后的缓冲液于2-8C最多可稳定4周。样本要求 样本：人血清或EDTA、肝素、柠檬酸盐抗凝的血浆。稳定性：待测患者样本于2-8C可储存14天，稀释后的样本需在同一个工作日检测。样本稀释：患者样本用样本缓冲液1:10稀释。例如，可取100l血清用900l样本缓冲液稀释并使用混匀器混匀(加样枪不适合于混匀）。注意：标准品

8、和对照品已经稀释，直接使用，勿需再稀释！ 检验方法 试剂的准备和稳定性注意：所有试剂在使用前均应在室温（18-25C）平衡约30分钟。试剂首次开封后，在无污染的情况下，于2-8C保存，可稳定至所标示的有效期。- 抗原包被的微孔：直接使用。在外包装密封线咬合部的上端剪开保护袋，为防止板条受潮，只有当微孔板平衡到室温后才可打开包装。剩余板孔应立即放回保护袋并封好（保留干燥剂）。从第一次打开保护袋起，抗原包被的微孔可在干燥的2-8C的环境中保存4个月。- 标准品和对照血清：直接使用，使用前应充分混匀。- 酶结合物：直接使用，使用前应充分混匀。- 样本缓冲液：直接使用。- 清洗缓冲液：10倍浓缩。如果

9、浓缩清洗缓冲液中出现结晶，稀释前应加热到37C并充分混 匀溶解。用干净吸管从瓶中吸取需要量的浓缩清洗缓冲液用蒸馏水1:10稀释（1份浓缩清洗缓冲液加9份蒸馏水）。如：需清洗一条微孔板条，则可取5ml浓缩清洗缓冲液用45ml蒸馏水稀释。稀释后的缓冲液如处理得当放置于2- 8C可稳定4周。- 色原/底物液：直接使用。因内容物对光敏感，使用后应立即盖好瓶盖。色原/底物液应为无色 澄清，如果变蓝则不要使用。- 终止液：直接使用。操作流程（部分）手工操作样本温育：（第一步）按加样方案向相应微孔分别加100l标准品、阳性对照、阴性对照或稀释后的样本，室温（18-25C）温育30分钟。清洗：手工：倒掉微孔板

10、内液体，用稀释后的清洗缓冲液洗3次，每次300l。自动：用稀释后的清洗缓冲液清洗3次，每次450L程序设定：如TECAN洗板机可设为“Overflow Modus”） 。每次清洗时缓冲液在微孔中至少保留30-60秒，然后再倒掉。清洗后（包括手工或自动）应将微孔板倒置在吸水纸上拍打，以去除残存的清洗液。注意：清洗后遗留在微孔中的残液（10l）可干扰底物反应而导致吸光度值偏低。 清洗不充分（如清洗少于3次、清洗液太少或清洗时间太短）可能导致吸光度值偏高。酶结合物温育：（第二步）滴加100l酶结合物至每一微孔，室温（18-25C）温育30分钟。清洗：倒掉微孔板内液体，如上述步骤清洗。底物温育：（第三

11、步）滴加100l色原/底物液至每一微孔，室温（18-25C）避光温育15分钟。终止反应：以与加色原/底物液相同的速度和顺序滴加100l终止液至每一微孔。比色：450nm比色，参考波长620-650nm，加完终止液后30分钟之内比色，比色前轻轻振动微孔板以使液体扩散均匀。 采用全自动分析仪完成实验使用分析仪可实现样本稀释和实验操作的全自动化。欧蒙公司授权的相关软件中的温育条件可能和ELISA 试剂盒说明书中的条件有轻微偏离。不过，欧蒙 Analyzer I，Analyzer I-2P 或Dynex 公司DSX 的实验条件与欧蒙ELISA 产品组合的有效性已经得到验证，可索取验证文件。也可以使用其

12、他品牌开放式的全自动分析仪，但是组合的有效性需要用户自行确认。加样方案123456789101112AC1P3P11P19BC2P4P12P20CC3P5P13P21DC4P6P14P22EPos1P7P15P23FPos2P8P16P24GP1P9P17HP2P10P18标准品（C1到C4）、阳性对照1和2（pos 1和pos2）和患者样本各在一孔中温育。每份样本复孔检测可提高实验的可靠性。每一微孔可从板条上取下，这样可根据样本的数量选择试剂的用量，减少了试剂浪费。阳性和阴性对照为实验可靠性的内部对照，每次实验都必须做。参考范围 非过敏人群中IgE浓度正常范围上限为100 IU/ml（Tho

13、mas，1992）。用本检测系统检测250份献血者血清，结果几乎呈正态分布，与文献报道一致（Klink 等，1990）。检测结果的解释定量检测：分别以4份标准血清的浓度和吸光度为横、纵坐标点对点作标准曲线(线性/线性)，根据此标准曲线求出样本中IgE的浓度。下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算样本中抗体的浓度。如果采用自动方法判断结果，我们推荐使用三次函数插入法（cubic spline interpolation）以获得与实际曲线最接近的结果（判断软件：TECAN：EASYBase，MICROTEK: Microwin）。如果使用其他软件，三次函数插入法可能会产生问题。在这种情况下

14、，可使用Akima插入法（TECAN：easyWIN fitting ）或二次多项式。如果采用点对点线性推断法，则必须考虑到：当IgE浓度大于100IU/ml时，测量值可能会产生微小的偏差。 下图仅为一典型标准曲线的示例，请不要用它来计算患者样本中抗体的浓度。如果患者样本的吸光度超出了标准品1（500 IU/ml），可报告为“500 IU/ml”。建议将样本1:40稀释后重新测定，从标准曲线计算出的数据再乘以4即为样本中抗体的浓度。IgE在妊娠第11周开始形成，其浓度随着年龄的增加而持续升高，在6-14周岁时达到最高值，随后开始随着年龄的增加而下降。IgE浓度因个体、是否患过敏性疾病而变化很大

15、，且受多种因素（年龄、性别、遗传背景、种族、吸烟）的影响。下表是文献报导的IgE正常值范围，仅作为参考。每个国家、每个实验室应建立自己的不同年龄组的IgE正常范围。年龄正常值上限新生儿1.2 IU/ml1-6月7.2 IU/ml7-12月12.7IU/ml1-5岁60 IU/ml6-9岁155 IU/ml10-15岁199 IU/ml16岁以上100 IU/ml产品性能指标定标：采用国际参考品NIBSC 75/502 (National Institute for Biological Standards and Control, Hertfordshire, England) 定标，采用国际

16、单位(IU)。NIBSC 75/502血清中抗体浓度为5000 IU/ml。每一组实验，标准血清的吸光度以及阳性对照和阴性对照血清的国际单位必须处在相应批号试剂的参考范围内，试剂盒内质控表中标示参考值。如果对照血清的实验结果超出了靶值范围，则结果不准确，必须重做。所用酶的活性与温度有关，如果不用恒温器，吸光度值会不同。底物温育时室内温度(+18C 至+25C)越高，吸光度值越高。温育时间不同会引起同样的差异。但因标准品会受到同样的影响，这种差异在计算结果时会在很大程度上得到补偿。线性范围：通过检测系列稀释的高抗体浓度血清来研究该试剂的线性范围。本检测系统的线性范围为34-449IU/ml。检出

17、限：最低检出限的定义为所能检出的IgE 抗体的最小滴度。本检测系统的最低检出限为1.2 IU/ml。重复性：通过检测3份不同抗体浓度的血清计算批内和批间的变异系数（CV）以确定该试剂的重复性。批内检测的CV基于20次检测的结果，而批间检测的CV则基于不同6天、每天4次检测的结果。批内重复性，n=20批间重复性，n=46血清均值（IU/ml）CV（%）血清均值（IU/ml）CV（%）15010.41477.921504.121565.334696.333495.5交叉反应：检测系统（夹心法）的设计和所用抗体的高特异性确保了整个反应体系的高特异性。干扰：血红蛋白浓度为10 mg/ml的溶血、甘油三

18、脂浓度为20 mg/ml的脂血、胆红素浓度为0.4 mg/ml的黄疸对检测结果没有干扰。特异性和灵敏度：分别用欧蒙IgE-ELISA检测系统和Pharmacia CAP系统检测63份血清样本。欧蒙检测系统的特异性和灵敏度为100%。 注意事项警示：(1) 本检测试剂仅用于体外诊断。(2) 标准品和对照品的HBsAg、抗HCV、HIV-1和HIV-2抗体均为阴性。但是，试剂盒中所有组分都应被视作潜在传染源小心处理。其中部分试剂含有毒性的叠氮钠，应避免接触皮肤。废物处理：患者标本、标准品、对照品和温育过的微孔板条必须作为潜在传染源处理，试剂盒中所有试剂的处理必须遵循官方规定。参考文献1. Barb

19、ee RA, Halonen M, Kaltenborn W, Lebowitz M, Burrows B. A longitudinal study of serum IgE in a community cohort: Correlations with age, sex, smoking, and atopic status. J Allergy Clin Immunol; 79: 919-927 (1987)2. Burrows B, Halonen M, Lebowitz MD, Knudson RJ, Barbee RA. The relationship of serum imm

20、unoglobulin E, allergy skin tests, and smoking to respiratory disorders. J Allergy Clin Immunol; 70: 199-204 (1982)3. Elkayam O, Tamir R, Pick AI, Wysenbeek A. Serum IgE concentrations, disease activity, and atopic disorders in systemic lupus erythematosus. Allergy; 50: 94-96 (1995)4. Gordon RR, War

21、d AM, Noble DA, Allen R. Immunoglobulin E and the eczema-asthma syndrome in early childhood. The Lancet; January: 9 (1982)5. Kay AB, Moqbel R, Durham SR, Mac Donald AJ, Walsh GM, Shaw RJ, Cromwell O, Mackay J. Leucocyte activation initiated by IgE-dependent mechanisms in relation to helminthic paras

22、itic diesease and clinical models of asthma. Int Archs Allergy Appl Immun; 77: 69-72 (1985)6. Klink M, Cline MG, Halonen M, Burrows B. Problems in definig normal limits for serum IgE. J Allergy Clin Immunol; 85: 440-444 (1990)7. Kerkhof M, Droste JHJ, de Monchy JGR, Schouten JP, Rijcken B. Distribut

23、ion of total serum IgE and specific IgE to common aeroallergens by sex and age, and their relationship to each other in a random sample of the Duch general population aged 20-70 years. Allergy; 51: 770-776 (1996)8. Kerstjens HAM, Schouten JP, Brand PLP, Schoonbrood DFME, Sterk PJ, Postma DS. Importa

24、nce of total serum IgE for improvement in airways hyperresponsiveness with inhaled corticosteroids in asthma and chronic obstructive pulmonary disease. Am J Respir Crit Care Med; 151: 360-368 (1995)9. Omenaas E, Bakke P, Elsayed S, Hanoa R, Gulsvik A. Total and specific serum IgE levels in adults: r

25、elationship to sex, age and environmental factors. Clin Exp Allergy; 24: 530-539 (1994)10. Secord EA, Kleiner GI, Auci Dl, Smith-Norowitz T, Chice S, Finkielstein A, Nowakowski M, Fikrig S, Durkin H.G. IgE against HIV proteins in clinically healthy children with HIV disease. J Allergy Clin Immunol;

26、98: 979-984 (1996)11. Sigurs N, Hattevig G, Kjellman B, Kjellman M, Nilsson L, Bjrkstn B. Appearance of atopic disease in relation to serum IgE antibodies in children followed up from birth for 4 to 15 years. J Allergy Clin Immunol; 94: 757-763 (1994)12. Thomas L. Labor und Diagnose. 4. Auflage, Med

27、izinische Verlagsgesellschaft, Marburg 199213. Vidal C, Quintela AG, Milln I, Gude F, Cuervas-Mons V. Serum IgE levels in liver cirrhosis. Contrasting results in alcoholic and non-alcoholic patients. Clin Exp Allergy; 24: 540-548 (1994)14. Yates VM, Kerr REI, Frier K, Cobb SJ, MacKie RM. Early diagn

28、osis of infantile seborrhoeic dermatitis and atopic dermatits total and specific IgE levels. British Journal of Dermatology; 108: 639-645 (1982)生产企业生产企业名称：欧蒙医学实验诊断股份公司Manufactures name: EUROIMMUN Medizinische Labordiagnostika AG地址：德国，吕贝克，D-23560，Seekamp 31Address: D-23560, Lbeck, Seekamp 31, Germany电话(Tel)：0451-5855-0传真(Fax)：0451-5855-591E-Mail: 网址: 售后服务单位名称：欧蒙医学诊断(中国)有限公司 地址: 北京市朝阳区北辰东路8号院1号楼1908-1910室 邮政编码：100101电话： 传真： E-Mail： 网址： 医疗器械注册证书编号 国食药监械（进）字2013第3402216号产品标准编号 YZB/GER 1895-2013说明书批准及修改日期版本号：EV_3840E_A_CN_C05批准日期：2013年6月8日修改日期：2014年7月2日