菌落总数测定作业指导书.pdf

《菌落总数测定作业指导书.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《菌落总数测定作业指导书.pdf（5页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、菌落总数测定作业指导书1.0 目的规定菌落总数的测定方法。2.0 范围适用于产品、原辅材料、流程卫生中菌落总数的检测。3.0 术语3.1 菌落总数食品检样经过处理 , 在一定条件下 ( 如培养基、培养温度和培养时间等) 培养后 , 所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。4.0 作业流程图见附录 A 5.0 内容及要求5.1 设备和材料除微生物实验室常规无菌及培养设备外，其他设备和材料如下：5.1.1 恒温培养箱： 361、3015.1.2 恒温水浴锅： 4615.1.3 天平：感量 0.1g 5.1.4 均质器5.1.5 无菌吸管： 1mL(具 0.01mL 刻度) 、10mL(具 0.

2、1mL 刻度)或微量移液器及吸头。5.1.6 无菌锥形瓶：容量250ml、500ml 5.1.7 无菌培养皿：直径90mm 5.1.8 菌落计数器5.1.9 无菌玻璃珠：直径约5mm 5.1.10 无菌试管： 18mm 180mm 5.2 培养基和试剂5.2.1 平板计数琼脂培养基。5.2.2 75% 乙醇溶液。5.2.3 无菌生理盐水：称取8.5g 氯化钠溶于 1000ml 蒸馏水中 121高压灭菌 15min。5.3 操作步骤5.3.1 样品的稀释5.3.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min 2 min

3、，制成 1:10 的样品匀液。5.3.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有 225 mL 生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。5.3.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于盛有 9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。5.3.1.4 按5.3.1.3 操作程序，制备 10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。5.3.1.5 根据对样

4、品污染状况的估计，选择2 个3 个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行 10 倍递增稀释时，吸取 1 mL 样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL 空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。5.3.1.6 及时将 15 mL20 mL 冷却至 46 的平板计数琼脂培养基（可放置于46 1 恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。5.3.2 培养5.3.2.1 待琼脂凝固后将平板翻转，361 培养 48 h2 。5.3.2.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4 mL），凝固后翻转

5、平板，按 5.3.2.1 条件进行培养。5.3.3 菌落计数5.3.3.1 可用肉眼观察，必要时用菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（ colony-forming units，CFU ）表示。5.3.3.2 选取菌落数在 30 CFU 300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。5.3.3.3 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分

6、布又很均匀，即可计算半个平板后乘以 2，代表一个平板菌落数。5.3.3.4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。5.3.4 结果与报告5.3.4.1 菌落总数的计算方法5.3.4.1.1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL ）样品中菌落总数结果。5.3.4.1.2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式（1）计算： N= C/（n1+0.1n2）d,（1）式中：N样品中菌落数；C 平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和；n1第一稀释度（低稀释倍数）平板个数

7、；n2第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d稀释因子（第一稀释度）。示例：稀释度1:100（第一稀释度）1:1000（第二稀释度）菌落数232，244 33，35 N= C/（n1+0.1n2）d =（232+244+33+35 ）/ （2+0.12）10-2 =544/0.022 =24727 上述数据按 5.3.4.2.2 数字修约后，表示为 25000或2.5 104。5.3.4.1.3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU ，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。5.3.4.1.4 若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CF

8、U ，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.3.4.1.5 若所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，则以小于1 乘以最低稀释倍数计算。5.3.4.1.6 若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU 300 CFU 之间，其中一部分小于 30 CFU 或大于 300CFU 时，则以最接近 30 CFU 或300 CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。5.3.4.2 菌落总数的报告5.3.4.2.1 菌落数小于 100 CFU 时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。5.3.4.2.2 菌落数大于或等于 100 CFU 时，第 3 位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2 位

9、数字，后面用 0 代替位数；也可用 10 的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。5.3.4.2.3 若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。5.3.4.2.4 若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。5.3.4.2.5 称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以CFU/mL 为单位报告。附录 A：菌落总数检验程序参照： GB4789.22016 检样25g（或 25ml）样品 +225ml 稀释液，均质10 倍系列稀释选择 23个适宜样品匀液，各取1ml分别加入无菌培养皿内每皿中加入15ml20ml 平板计数琼脂培养基，混匀培养361 48h2h计算各平板菌落数计算菌落总数报告