水质细菌总数测定作业指导书.docx

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1、文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质 细菌总数测定作业指导书第1页共 5页水质 细菌总数测定作业指导书1 含义及执行标准1.1 含义细菌总数是指 1mL 水样在养分琼脂培育基中，于 37培育 24 小时后，所生长细菌菌落的总数。1.2 方法原理平板计数法是测定水中需氧菌、兼性厌氧菌和异养菌密度的方法。由于细菌在水中能以 单独个体、成双成对、链状、成簇等形式存在，而且没有任何单独一种培育基或一套物理、化学条件能满足一个水样中全部细菌的生理要求。所以，由此法所得的菌落数可能要低于真 正存在的活细菌的总数。1.3 水环境质量标准表 1-1细菌总数地下

2、水质量分类指标 GB/T 14848-93类 别类类类类类标准值个/mL10010010010001000表 1-2细菌总数生活饮用水卫生标准 GB 5749-2023类 别饮用水农村小型集中式供水和分散式供水标准值个/mL1005002 分析方法2.1 方法名称、方法来源和适用范围方法名称：平板计数法方法来源：水和废水监测分析方法(第四版)国家环保总局 2023 年 第五篇 其次章 四方法适用范围：此法主要作为判定饮用水、水源水、地表水等污染程度的标志。2.2 仪器高压蒸汽灭菌器电热枯燥箱恒温培育箱冰箱解剖镜。采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿直径 9cm、刻度吸管等器皿 12120min高压1文

3、件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质 细菌总数测定作业指导书第2页共 5页蒸汽灭菌后于电热枯燥箱中烘干。2.3 培育基养分琼脂培育基：市售养分琼脂培育基，按说明配制，装于三角烧瓶中，经121高压蒸汽灭菌 15min，经无菌性检验和标准菌株检验后，贮存于暗处备用。2.4 分析步骤2.4.1 选择稀释度稀释度要选择适宜，以期在平皿上的菌落总数介于30300 之间。大多数饮用水水样，未经稀释直接接种1mL，所得的菌落总数可适于计数。2.4.2 水样的稀释方法将水样用力振摇 2025 次，使可能存在的细菌凝团成分散状。以无菌操作方法吸取 1mL 充分混匀

4、的水样，注入盛有 9mL 灭菌水的试管中，混匀成 1：100 稀释液。按同法依次稀释成 1：1000、1：10000 稀释液稀释倍数按水样污浊程度而定。留意：吸取不同浓度的稀释液时，必需更换吸管。2.4.3 操作方法以无菌操作方法用 1mL 灭菌吸管吸取充分混匀的水样或 23 个适宜浓度的稀释水样 1mL，注入灭菌平皿中，倾注约 15mL 已溶化并冷却到 45左右的养分琼脂培育基，并马上旋摇平皿，使水样与培育基充分混匀。每个水样应倾注两个平皿。待琼脂冷却凝固后，翻转平皿，使底面对上，置于37恒温箱内培育 24h，进展菌落计数。2.4.4 菌落计数培育之后，马上进展平皿菌落计数。假设计数必需暂缓

5、进展，平皿需存放于 510 冰箱内，且不得超过 24h。但是不行以使这种做法成为常规的操作方式。作平皿菌落计数时，可用解剖镜检查，以防遗漏，在登记各平皿的菌落数后，应求出 同稀释度的平均菌落数。在求同稀释度的平均数时，假设其中一个平皿有较大片状菌落生长 时，则不宜承受，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的菌落数。假设片状菌落不到平 皿的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘以2 代表全皿菌落数， 然后再求该稀释度的平均菌落数。假设由于稀释等过程中有杂菌污染，或者比照平皿显示出 培育基或其他材料染有杂菌，以致平皿无法计数，则应报告“试验事故”。对那些看来相像，距离相近但是却

6、不相触的菌落，只要它们之间的距离不小于最小菌 落的直径，便应一一予以计数。那些严密接触而外观例如形态或颜色相异的菌落，也应当一一予以计数。2.4.5 计算细菌总数是以每个平皿菌落的总数或平均数例如同一稀释度两个重复平皿的平均数 乘以稀释倍数而得来的。各种不同状况的计算方法如下：2文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质 细菌总数测定作业指导书第3页共 5页首先选择平均菌落在 30300 之间者进展计算，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平均菌落数乘其稀释倍数报告见表3 例 1。假设有两个稀释度，其平均菌落数均在 30300 之间，则应

7、当按二者之比值来打算。假设其比值小于 2 应报告两者的平均数，假设大于 2 则报告其中较小的数值见表 3 例 2、例 3。假设全部的稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释倍数最大的平均菌落数乘以稀释倍数报告见表 3 例 4。假设全部稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释倍数最小的平均菌落数乘以稀释倍数报告见表 3 例 5。假设全部稀释度的平均菌落数均不在30300 之间，则以最接近 300 或 30 的平均菌落数乘稀释倍数报告见表 3 例 6。例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释 菌落总数报告方式备注270 或 2.710231000 或 3.1104的原则取舍表 3稀释度选择及菌落总数

8、报告方式10-110-210-3度菌落数之比个/ml个/ml11365164201640016000 或 1.6104两位以后22760295461.63775038000 或 3.8104的数字采32890271602.22710027000 或 2.7104取四舍六4无法计数1650513513000510000 或 5.1105入五单双5271152706无法计数30512305003 质量把握要求3.1 比照把握承受无菌水作全过程比照把握，当有明显杂菌污染时，说明测定过程某环节无菌性失控，应重检验；每次检验时，另用两个平皿只倾注养分琼脂培育基，并且翻开平皿10min 作试验室比照把握，

9、当有明显杂菌污染时，说明测定过程试验环境无菌性失控，应重检验3.2 准确度3同一试验人员所作前 15 个阳性水样平行双样结果为X、X X 、X 0，i1，2，15，则准确度推断值 3.27 R 。1i2i1i2i R = (15R ) /，15R= logX-logXii1i2i当分析所得 R =i=1 logX1-logX2 3.27 R 表示周密度已失控；否则平行双样的差距可以承受。3.3 最正确计数量细菌总数的测定无标准物质可用，为提高检验分析的准确性，除要尽量消退系统误差、文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质 细菌总数测定作业指导书第4

10、页共 5页人为误差的影响外，还应尽量降低随机误差的影响。增加计数量可削减随机误差的影响，考虑到工作量等因素，细菌总数测定每一平皿的最正确菌落数为30300 个，因此，应尽量选取菌落数在这一范围的平皿计数。4 数据处理4.1 数据审核分析结果填写原始记录表与样品送检单，应经科室内部校对、审核后，方可上交。4.2 数据填报菌落计数报告时，菌落数在 100 以内按实有数据报告；大于 100 承受二位有效数字报告， 有效数字后面的数值以四舍五入方法计算，为缩短数字后面的零数可用10 的指数形式表示如报告 16，000 或 1.6104。在报告菌落数为“无法计数”时，应注明水样的稀释倍数。5 样品采集5

11、.1 采样瓶应经高压或干热灭菌处理前方可使用；5.2 样品含有余氯时采样瓶灭菌前应加脱氯剂，即于 500mL 采样瓶中参加 0.3mL10%硫代硫酸钠溶液；5.3 样品含铜锌等重金属较高时采样瓶灭菌前应加螯合剂，即于 500mL 采样瓶中参加21.0mL15%乙二胺四乙酸二钠EDTA-Na 溶液；5.4 同一地点同时采多瓶水样时，细菌学检验水样先采；5.5 采样时，采样瓶不得用水样荡洗；5.6 采样后，样品应 2 小时内检验，否则，应 10以下保存且不超过 6 小时。6 期间核查6.1 人员素养首先要参与省上岗证理论考试，理论考试合格前方能上岗。同时站内进展操作技能考 核、培训，考核合格前方能

12、持证上岗，承但本项分析。按国家和省环境监测中心的要求，必要进展五年换证的理论考试、操作技能考核。6.2 仪器设备臭氧杀菌效果、高压锅压力表指示、恒温培育箱温控状况每年由站质管中心组织持证人员检验、校正，玻璃量具每三年由站质管中心组织持证人员校正。7 分析环境条件把握7.1 仪器设备保持试验室环境干净，定期检查，避开恒温培育箱温控失控，做好仪器设备使用和保养记录。7.2 无菌室定期承受消毒剂清洁无菌室，定期检查臭氧杀菌效果，保证无菌室微生物试验条件的满足。4文件编号：WJES/QZ-0017-2023常州市武进区环境监测站作业指导书名称：水质 细菌总数测定作业指导书第5页共 5页7.3 分析环境条件检查和记录每次分析样品时，作无菌室空气细菌培育比照，保证无菌室空气微生物学质量，并做好记录。8 附件1、水和废水监测分析方法(第四版)国家环保总局 2023 年 第五篇 其次章 四5 审批：修订记录：日期： 日期： 日期：