血清尿素UREA测定.doc

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1、血清尿素UREA测定1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。2 实验原理 在下述反应中，NAD+生成速率与样本中尿素（尿素氮）的浓度成正比。通过在340 nm处测定固定时间间隔内吸光度的下降速率，即可测得样本中尿素（尿素氮）的浓度。 尿素酶 尿素 + 2H2O 2 NH4 + 2 HCO3 谷氨酸脱氢酶 NH4+-酮戊二酸+NADH+H+ L-谷氨酸+NAD+H2O3 标本：3.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24小时尿样。3.2 类型：血清、血浆（不可使用肝素铵）、新鲜尿液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA和肝素钠

2、。用新鲜尿液作样品时，用蒸馏水作1:100稀释。3.3标本存放：血清或血浆稳定性：425保存可稳定7天；-20保存可稳定1年。尿液稳定性：2025保存可稳定2天；48保存可稳定7天；-20保存可稳定1个月。3.4 标本运输：常温条件下保存运输。3.5. 标本拒收标准：细菌污染的标本。4 实验材料4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司UREA试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成试剂1（R1）： -酮戊二酸 7.5mmol/L 谷氨酸脱氢酶 800U/L NADH 0.35mmol/L 二磷酸腺苷 1.5mmol/L

3、Tris缓冲液 115mmol/L试剂2（R2）： Tris缓冲液 115mmol/L 尿素酶 40000 U/L -酮戊二酸 7mmol/L4.1.2 试剂准备：试剂为即用式。4.1.3 试剂稳定性与贮存：在28避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月。4.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。4.1.5 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的UREA校准品对自动分析

4、仪进行校准。4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。5 仪器 AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪6 操作步骤6.1 样品的准备：将标好号的样品离心后放到仪器规定的位置。6.2 试剂的检测：仪器开机后，检查各种试剂的位置，体积等确认无误后方可进行测定。6.3 项目基本参数：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪项目测定参数。6.4仪器操作步骤：参见生化检验AU2700生化分析仪，罗氏P800生化分析仪, 西门子ADVIA

5、-2400生化分析仪，东芝TBA-120生化分析仪操作规程。7 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。8 计算方法：以UREA复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。9 参考值范围 成人2.5-6.4 mmol/L（注：各实验室应有自己的参考范围。） 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 我室参考值2.5-6.6 mmol/L10 临床意义 尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。高尿素

6、血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。鉴别肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。因脱水、蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度较小。发生肾病时，肾小球滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200 g/天都会导致尿素浓度升高。尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢紊乱。尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。它通过肝脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾小球从血液中过滤尿素到尿中，是消除体内多余氮的主要方法。血液尿素氮（BUN）水平是肾功能以及肾前状态和肾

7、后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN的升高包括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾，肾纤维化和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的肾后因素1。肾小球清除尿素和肌酸酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸酐却不会。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同时用于肾功能的不同诊断中。11 操作性能11.1试剂空白：a) 试剂空白吸光度：应不小于1.65b) 试剂空白吸光度变化率（A/min）：应不大于0.001。 11.2分析灵敏度：1.00mmol/L样本的吸光度变化率（A/min）应不小于0.011。 11.3

8、线性范围：试剂（盒）线性范围应覆盖040mmol/L。a) 线性相关系数（r）应不小于0.990；b) 010 mmol/L范围内的绝对偏差应不超过2mmol/L；1140mmol/L范围内的相对偏差应不超过10。 11.4准确度：相对偏差（B）应不大于10%。 11.5精密度：(1)重复性：变异系数（CV）应不大于5%；(2)批间差：相对极差（R）应不大于5%。12 超出范围结果处理 本法线性上限血清/血浆为40mmol/L、尿液为5mol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%的氯化钠溶液作1:4稀释，重新测定，结果乘以5。13 病危报警值的处理 当尿素氮测定值30mmol/L时，

9、在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。14 方法局限性14.1测定结果的准确性依赖于对所使用分析仪器校准、测定温度和测定时间的控制。 14.2在样本加入后的30秒钟前或120秒钟后读取吸A/min所测定的结果均不准确。 14.3有关可能干扰本测定的药物或物质，请参阅参考文献16.3。 14.4试剂启用后，在210避光的条件下可稳定14天。若试剂混浊，或以水为空白在波长340nm处的吸光度值低于1.0A，则不能使用。15 补救措施 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。16 参考文献 16.1叶应妩，王毓山，申子瑜主编全国临床检验操作规程中华人民共和国卫生部医政司编(第四版)16.2钱士匀主编.临床生物化学及生物化学检验实验指导.人民卫生出版社，2012年第5版。16.3府伟灵,徐克前主编.临床生物化学检验.北京.人民卫生出版社,2012年第5版16.4试剂说明书