血清尿素氮BUN谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书.doc

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1、血清尿素氮血清尿素氮 BUNBUN 谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书谷氨酸脱氢酶测定法作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 脲酶-谷氨酸脱氢酶（ Urease-GLDH）连续监测法。 尿素被脲酶水解产氨。在NADH 的存在下，氨和 - 酮戊二酸反应生成谷氨酸，NADH 同时被氧化成 NAD。NADH 的减少和样品中尿素浓度成正比。本法是 连续监测法。 脲酶 尿素 + 2H2O 2 NH4 + 2 HCO3 谷氨酸脱氢酶 NH4+-酮戊二酸 +NADH L-谷氨酸 +NAD+H2O 2 2 标标本本： 2.1 病人准备：血清无特殊要求。要留取24 小时尿 样。 2.2 类型：血清、血浆（不可使

2、用肝素铵） 、新鲜尿 液。无溶血和凝块的血清，如果必须使用血浆，建议使 用无铵离子的抗凝血剂，如EDTA 和肝素钠。用新鲜尿 液作样品时，用蒸馏水作1:100 稀释。 3 3. . 标标本本存存放放： 血清或血浆稳定性： 425保存可稳 定 7 天；-20保存可稳定 1 年。尿液稳定性： 2025保存可稳定 2 天；48保存可稳定 7 天； -20保存可稳定 1 个月。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材材料料 6.1 试剂：申能尿素测定试剂盒（142 3107170 1 试 剂 1： 6

3、64ml试剂 2： 616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1： Tris 缓冲液 pH7.8 120mmol/L -酮戊二酸 7mmol/L ADP 0.6mmol/L 谷氨酸脱氢酶 1000U/L 脲酶 6000U/L 试剂 2： NADH 0.25mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于 225，若无污染，可稳定至失效期。 试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞 下有害。保护剂为叠氮钠

4、，避免接触皮肤及粘膜，与下 水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的 叠氮钠，如果排向下水道请用大量的水冲洗。应采取必 要的预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000 生化分析仪项目测定参数 .SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1

5、000 生化分析仪操作规程 .SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品尿素氮校准值 校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告 可靠的检测结果，以mmol/L 报告。将尿素量乘以系数 2.8 可以换算成尿素氮量；将尿素氮量乘以系数 0.357 可以换算

6、成尿素量。手工测定计算方法为： Au 尿素氮浓度（ mmol/L） 校准液浓度 As 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 血清/血浆 1 成人（ mmol/L） 全球 2.87.2 女性50 岁 3.57.5 男性50 岁 3.09.2 儿童 13 岁 1.86.0 413 岁 2.56.0 1419 岁 2.97.5 尿素/肌酐比率 1 2540(mmol/L)/(mmol/L) 尿液 2 0.430.72mol/d （注：各实验室应有自己的参考范围。 ）参考值因 性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的 实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。 1 13 3. . 临临床床

7、意意义义： 尿素是蛋白质分解代谢的含氮终产物。 高尿素血症或氮血症表现为血液中尿素水平升高。鉴别 肾前和肾后氮血症时可以同时检测尿素和肌酐。因脱水、 蛋白质代谢增加、皮质醇治疗或肾脏灌注减少等引起的 肾前氮血症，表现为尿素水平升高而肌酐水平正常。由 泌尿管道阻塞引起的肾后氮血症，表现为尿素和肌酐水 平都升高，但肌酐升高程度较小。发生肾病时，肾小球 滤过作用明显下降或蛋白质摄入量大于200 g/天都 会导致尿素浓度升高。 尿素氮的检测用于诊断和治疗某些肾脏疾病和代谢 紊乱。 尿素氮大约占血液中非蛋白氮的75%。它通过肝 脏中的氨进行合成，是蛋白质脱氨作用的产物。通过肾 小球从血液中过滤尿素到尿中

8、，是消除体内多余氮的主 要方法。 血液尿素氮（ BUN）水平是肾功能以及肾前状态和 肾后状态的度量标准，肾前因素引起的BUN 的升高包 括心脏代偿失调，缺水或增加的蛋白质分解代谢。水平 增加的肾脏因素有急性肾小球肾炎，慢性肾炎，多囊肾， 肾纤维化和肾小管坏死。任何类型的泌尿道的梗塞受阻 是 BUN 水平升高的肾后因素 1。肾小球清除尿素和肌酸 酐，但是，尿素随后部分地被肾小管重吸收，然而肌酸 酐却不会。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐测定经常同 时用于肾功能的不同诊断中。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 0.350mmol/L 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCC

9、LS 推荐的标 准方法， AU1000 批内不精密度小于3%，总不精密度 小于 5%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV (%) 天间精密 度 n=20 x (mmol/L ) s (mmol/L ) CV (%) 样品 1 4.960.275.41 样品 1 5.230.305.79 样品 2 8.770.273.13 样品 2 8.770.343.87 样品 3 19.480.251.27 样品 3 19.480.552.86 14.3 方法学比较：本公司的试剂(y)与某商品化试剂 (x

10、)，同时对 68 个样品进行 Urea 检测，将检测结果作 方法学比较，其统计结果如下： y=0.99x+0.176mmol/L；r=0.999。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为0.3mmol/L。 14.5 病人结果可报告范围： 0.350mmol/L 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法线性上限血清 /血浆为 50mmol/L、尿液为 5mol/L。如样品测定值超过上限时， 应将样品用 0.9%的氯化钠溶液作 1:2 稀释，重新测定， 结果乘以 3。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 当尿素氮测定值 36mmol/L 时，在经过复查等确认手

11、段处理后应及时向临床主管医 生汇报。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法线性上限血清 /血浆为 50mmol/L、尿液为 5mol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%的 氯化钠溶液作 1:2 稀释，重新测定，结果乘以3。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋白浓 度5.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察 到干扰。铵离子会影响检测结果，因此收集血浆时勿用 肝素铵抗凝！ 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参

12、参考考文文献献 1.Thomas L, editor. Clinical laboratory diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.374-7. 2.Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.p.1838. 3. Talk H, Schubert GE. Enzymatische Harstoff bestimmung in Blut und Serum im optischen Test nach Warburg (Enzymatic determination of urea in blood and serum with the optical test according to Warburg). Klin Wschr 1965;43:174- 5. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。