小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究.pdf

《小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《小干扰RNA沉默MAT1基因治疗胰腺癌的实验研究.pdf（5页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、生望匿芏垂直2业!生!Q日!旦筮!堂墨塑捆型型丛鲤些磐，Q!些!。!壁盟：!巫!，盟生塑小干扰RNA沉默MATl基因治疗胰腺癌的实验研究刘建平袁世珍张世能【摘要】 目的了解体外转录法合成的小干扰RNA(siRNA)沉默mTl基因对胰腺癌的体内体外抗癌效应。方法用s-PORT一脂质体(1啦d)中性阳离子脂质体转染由体外转录法合成、白3荧光标记的双链正RNA人胰腺癌BxPc3细胞，观察对胰腺癌细胞生长和细胞周期曲线的影响，检测MAn基因被划wA沉默后mRNA和蛋白质的表达水平。在棵鼠胰腺癌皮下移植瘤瘤体内直接注射siRNA观察抑瘤效应。结果合成的4条MATl-面RNA序列中有一半可显著抑制BxPc

2、3细胞的生长。体外转染MATl一目iRNA 72 h后，BxPc3细胞生长抑制率达349(P001)；839的BxPc3细胞滞留于GoGl期，而空白对照组仅5986(尸O，01)。体外转染MATl-8iRNA 48 h后MATl-mRNA水平下调了8012，72 h后MATl蛋白质水平下调了5旺12，与各对照组相比差异均有统计学意义(均P旺oj)。MATI一日iRNA注射组裸鼠移植瘤重量和体积均明显低于对照组(均尸n 05)，抑瘤率达4253。结论s-IA介导的MATl基因沉默在体外实验中显著抑制了胰腺癌细胞的生长，在体内实验中对裸鼠胰腺癌皮下移植瘤产生明显的抑瘤效应。【关键词】胰腺肿瘤；RN

3、A；MATl；基因治疗B【per-衄ental shldy 0f MAll龄呻蝴e畦i吨me山ated by蝴圳A in p如cr蜘岫c咖r U且m一面蟛，咒心舶i矗魄，昼H峪鼎乒嘴脚氍酣矿G鲇加蛳蝴弛z毋r，白佣暨锄胁衍A麒耐PokE Hosp毗skndmI 5j8029Chhm【Abs州】 0bj删vero in删目gbe tIIe lnhlbitory d咕d of gene Bilencing mediated by MATl一s删A咖曲州in“hD tran商pbfhpanerdc c蚰cer in vivo蛐d ill vitr0M劬。由 21呲d讪le8哑ld自讧A tal删ng

4、 MATl辨ne wc唧仃Ilcted叩d labeled埘th Cv3 nuo蝌啪nti“g碍i日entHu咖pan唧6c咖c盯cells0f tlIe h眦BxPc3聊Ie cIIltur甜and di“ded into 4胛u坤：MATl缸RNA址ls胁ed gmup，negaljve siRNA c忸I柚group，bPid oor血Dl g呻up，and bl趴k c0tml gmupThe mte ofceU duplic幽n w聃drined by c岫6nE the ceUB for tIlreenBec曲ve daysCecycle p圳we即dctenn矗Ied by no

5、w e螂me竹， semi-日【tantive mtaivsis 0f出e Ieve王M。ATlmRNA expfession懈卵rfo珊ed瑚iIlg血e RTPCR thq哪1k le靶I。f MATl prdkin唧feB8i叩们B a加lyzed by We8啪blottin艮18 mlde mke we托iniected subcut柚eou耐y witl-Bdc3 oelb 10 esabl面h m饥衅t11mor modeb，andtlI朗di“ded啪doly lIo 3 equ且l卿：MATl一BiRNA gr0“p岫d8r90i“g inj即non of MATl一时RNA

6、di删yimo the tumo鹞2 dma week f撕4帆eb，bl明k c帆tml刚p，丑rd n。gative MATl-自iRNA孕“up4 wk8 kr【he叫e were killed t0 d珀erve岫wei吐l and Bize 0f t岫盯“t0 calculate d坤norinlljbion嘶R嘲db Tho 0f tlIe 4 d船i印ed MATl一siRN舢鲥鲥6阻ndy 8uppr葛Bed the剐，Wtll 0f theBxPc3 cel】B72 h如r胁6叫tlle ceU du pllcati叩w柚iIlllibited h 349in the MAT

7、l-8lRNA台飘B叩gro雎珏e cec)rcle口ro拙毒ho副839oftlleMATlsiRNA k娜沁led c地黼in船G0G1 plI蛳，a r砒e 8ignincdy higI盱d啪tIIatintIe bIank c加呻I group(5986，P001)48 hla时tlle con咖n 0f Mn一RNA 0f tlle MATl蚍RNA岫胁ed eell蛊w曲8i柚call曲reduoed by 8012，蛐d 72 h a陆r the响n妇如n tlle content 0f MATl p眦ein w鹕reduced by 50，12，a舳日i印m啪dylljgher

8、Ill加tI憾e of d他2唧咖l刚p8(bo出PO01)11le谢gIn aI-d阳111吐le 0ftIeharl8p1朋t t11o珥iIl 11Ie MATlslRNA ini耐ed nude mice were 8i神c衄dy reduced洲pa陀证tItlle唧吐ve BiRNAinjeeted ctrol nude mice蚰d blaIlk cond nude mice(bot量l PO05)11IeiI“bjd伽眦e哪8 4253o蛐dI两蚰 MATl gene sIlencl”g哪di肚ed by BiRNA Bi印击咖山叫ppr朗Bthe娜柚。f parIcr曲&ea

9、nr oes ift vm，and缸印击candv aellieves硼曲6tumDf e扛硗t on the日ubcu咖籼ly砷瑚pIantedp明cI枷c m”r m vlvo，【Key珊rds】P如cr即6c鹏叩1且日皿； RNA； MATl；G删dle哪基金项目：广东省自I；!；科学基金资助项目(200013弱)作者单位：518029探圳，广东省边防总趴医院消化内科(刘建平)；中山大学附属第二医院消化内科(袁世珍、张世能)2719基础研究万方数据z720 主生医堂盈盍2Q盟至!Q旦堕旦筮!鲞筮塑朔型些丛型!i坠：旦!熊壁!，!盟：!，理璺盟RNA干扰(RNAi)技术目前被认为是最有前景

10、和最可行的肿瘤基因治疗工具，而胰腺癌是预后很差的恶性肿瘤之一，手术和化、放疗等传统治疗方法疗效差，开展胰腺癌的RN Ai研究将为胰腺癌的基因治疗迈出新的步伐。既往实验发现：作为调控细胞周期循环的关键基因之一，人类MATl基因在胰腺癌组织中表达增强，而且这种表达的增强可能与胰腺癌的发生相关”。，转染反义MATl基因可使胰腺癌细胞出现明显的G。期阻滞”o。基于此，本研究用体外转录法合成MATl基因的小干扰RNA(siRNA)，通过体内和体外实验观察转染MATl-siRNA对胰腺癌的治疗效应，探讨siRNA沉默MATl基因用于胰腺癌基因治疗的可行性。材料与方法一、材科MATl羊抗人多克隆一抗、cDK

11、7和B一肌动蛋白等鼠抗人单克隆一抗、羊抗鼠和兔抗羊等单克隆二抗购自美国santa Cmz生物技术公司，O砸MEMI Reducedsemm Medium购自美国CIBCOBRL公司，siIencer“siRNA合成试剂盒(内含标准参照GAPDH-siRNA)、silencerl“8iRNA转染试剂盒和silencer“siRNA标记试剂盒(cy3)均购自美国Albion公司，电化学发光(EcL)westem印迹检测试剂购白美国AIner8ham公司，Reven Aid删F岫tstrand cDNA分析试剂购自美国Fementas公司。人胰腺癌细胞株BxPc3从美国加州大学引进。B8lbe纯系裸

12、小鼠(sPF级)由中山大学医学院实验动物中心提供，46周龄，每只体重1820 g，雌雄兼用。二、方法1细胞培养及免疫细胞化学：BxPC3细胞于含lO的胎牛血清的RPMIl640培养基中培养。按免疫细胞化学常规步骤检测BxPc3细胞中MATl蛋白的表达(MATl一抗稀释I：100)，用PBs和无关抗体设立阴性对照。当细胞胞质或细胞核出现棕黄色染色判定为MATl蛋白阳性染色(DAB染色)。2体外转录合成法合成双链猷RNA：参照zamore等41的关于哺乳动物细胞RNAi的“AAN19”设计原则，以MATl基因的cDNA序列为模板，筛选4条靶mRNA序列如下：序列1：5 7GGucuuGucc从Au

13、ccACAuu 3。序列2：5GucGuuccAcuuCuAAAGcuu 3。序列3：5 7 AcGucAcuGGuuuuAcACGuu 3 7。序列4：5cuGuoGAAAAcCucAcuGGuu 3 7。另设计一条阴性对照序列：5AGCGGAUCCAAUcUuuGuGUu 3。在GenBank数据库中使用BIAsT以确保目的序列与其他基因没有同源性。然后根据碱基互补原则对每一靶mRNA序列设计出两条互补的脱氧核苷酸链，在3端各加上8个“CCT(订c1”碱基(引导序列)，总长度共29个碱基，共10条脱氧核苷酸链，由QIAGEN-0pemn公司合成。然后采用Silencer。siRNA合成试剂

14、盒在体外转录合成4条21nt的双链siRNA和1条阴性对照的双链8iRNA。产物质控：用紫外分光光度仪测A。和A。值以检测每一条产物的产量和纯度，用2琼脂糖凝胶电泳检测产物大小和完整性(更高位置的条带出现表示消化不完全，更低位置的条带出现表示合成流产)。3荧光标记和转染：用silencersiRNALabding试剂盒(cy3)中的cy3荧光试剂分别标记双链BiRNA。用silencerm siRNA转染试剂盒中BiPORT一脂质体中性阳离子脂质体转染双链siRNA入细胞，对传代细胞数量、siPORT一脂质体体积和MATl一BjRNA的转染终浓度3项参数行优化实验，确定转染条件。转染5 h后，

15、在荧光显微镜下直接计数显示红色cy3荧光的细胞数量来判断转染效率。4直接计数法绘制细胞的生长曲线图：6孔细胞培养板每孔接种l105BxPc3细胞，设MATl-siRNA转染组、阴性siRNA对照组、脂质体对照组、空白对照组。转染24 h后起，连续3 d同一时间消化细胞，镜下直接计数活细胞数量，绘制各组细胞的生长曲线图，方法见文献2。并从4条MATIsiRNA干扰序列中筛选出最有效的1条。5流式细胞仪中(FcM)分析细胞周期曲线：按上法接种、消化BxPc3细胞，连续3 d，仅设MATl-siRNA转染组和空白对照组，在流式细胞仪中(FcM)分析细胞周期曲线，方法见文献2，并计算细胞增殖指数(PI

16、)。6半定量RT-PcR检测沉默后MATlmRNA的表达水平：按上法接种、培养BxPc3细胞，设MATlsjRNA转染组和空白对照组，分别于转染前0 h，转染后5、24、48和72 h消化、收集细胞，提取总RNA，行RTPcR检测，了解何时MATlmRNA水平明显下降。然后分别用4条MATl8iRNA序列转染BxPc3细胞(按上法接种培养)，同时设阴性siRNA对照组、脂质体对照组和空白对照组，于转染后48 b抽提总RNA，行RTPcR检测，了解各干扰序列对MATl-mRNA水平的影响。MATl基因上游引物：5万方数据生望壁芏盈盍!垒盟望!Q旦!旦星盟益差望拐堕世丛鲤!i坠，Q苎生壁!。2嫂!

17、：型!Z：盟生望cAGGcAlAAAATGGGTc 3 7，下游弓I物：5GAGGCTIHTcGT cTcAAA 3，扩增片段长度为488 bp。内参照GAPDH基因上游引物：5 7CGTcGGAGTcAAcGGAlTrccTcG 3 7，下游引物：5ccTccG_AcGccTGcTTcAccA 3，扩增片段长度为787 bp。PcR热循环参数：955 min，9430 s，5730 s；7255$；共进行32个循环，末次循环后727 min。产物在18琼脂糖凝胶中电泳，经凝胶成像扫描分析系统行全自动图像分析。7we8Iem印迹检测沉默后MATl蛋白质的表达水平：按上法接种、培养BxPc3细胞

18、，并设对照组，转染后抽提总蛋白并测浓度，于losDs聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离蛋白，用半干转法转移蛋白条带至PvDF膜上，先后予MATl一抗(1：1000稀释)、兔抗羊二抗(1：2000稀释)孵育，用化学发光显色液孵育1 min，置于x光底片曝光成像。B-肌动蛋白内参照和cDK7的蛋白质印迹试验同上。扫描仪扫描后进行全自动图像分析。8胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型抑制实验：首先用BxPc3细胞建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型，方法见文献5，待BxPc3皮下移植瘤长至约5 mm5 mm时，随机分为3组，每组6只，MATlBjRNA转染组每只裸鼠皮下移植瘤体内直接注射MATl一siRNA 100“l(8iR

19、NA浓度：200 nmoLL)，每周2次，共4周，同时设空白对照组、阴性MATl-siRNA对照组。疗程结束后拉颈处死裸鼠，观察治疗前后裸鼠肿瘤体积变化、体重变化、计算抑瘤率。肿瘤体积按3146长径短径2计算，抑瘤率=(对照组瘤重一治疗组瘤重)对照组瘤重100。三、统计学处理”2l计量资料用f检验。用sPssll5统计软件分析。结 果1MATl蛋白在胰腺癌细胞株BxPC3的表达：呈强阳性表达，除细胞质着色外，细胞核膜亦明显着色(图1)。2体外转录法合成的siRNA的质控：琼脂糖凝胶电泳后合成的双链si硎A均与标准参照eAPDH-siRNA(21 bp)处于同一水平位置，未见更高或更低位置的条带

20、出现，平均纯度1944O029；平均浓度(48480)斗gInl，其大小、完整性、纯度和产量均符合要求(表1)。表1 体外转录法合成的5条siRNA的浓度和纯度的检测序列mm 7旨(盘黪。)(i籀)l 02678 01356 l 9758 30 61 428482 0 2914 01516 19238 3330 466243 0 2501 01314 19054 28 57 400 004 n 3750 0 1910 I96 4285 60000阴性 n 3270 O1672 L9557 3737 523 203MATlmA的转染效率：转染参数经优化试验后确定为：传代细胞数量l105、siPO

21、RT一脂质体6一、siRNA(20 pmoLL)4山、转染终体积600山、siRNA转染终浓度100 nm彬L(此试验siRNA转染终浓度在50一200 nmoLL范围内均有效)。在BxPc3细胞中转染效率大于90(图2)，转染后Cy3荧光能持续可见72 h。4MATl-8iRNA转染后对BxPc3细胞增殖的影响：4条设计合成的siRNA序列中仅序列2和序围l BxPc3细胞免疫细胞化学x200lA MATl强阳性表达；1B哪阴性对照圈2 BxPc3细胞转染面刚A 5 h后镜下照片x 400 2荧光显微镜；2&同一视野普通光学万方数据空生匡芏盈查!盟!生!Q旦!i旦星堑盎箍塑塑型堂丛笪h!坚：

22、Q!塑b里!：垫盟。!堂!：坠翌列3可显著抑制BxPc3细胞的生长，有效率为50(2“)，与其他对照组相比，细胞生长受到明显抑制(均Po01)，其中以序列3抑制效果最明显(P001)，72 h后细胞生长抑制率达349(图3)。流式细胞仪分析显示MATlsiRNA(序列3)转染组转染48 h后GoG。期细胞比例明显上升，到72 h后已出现明显的G0G。期细胞滞留，由496上升到839，s期细胞比例由2922降至lo34，G：M期细胞比例由212l降至575，PI值明显下降，与其他对照组相比，差异均有统计学意义(均尸001)，但是，细胞周期曲线图未显示出明显的凋亡峰。时简(h5转染8iRNA对MA

23、Tl、cDK7表达的影响：BxPc3细胞的MATlmRNA水平在MATl一siRNA(序列3)转染组中于转染图3 MAT1州RNA(序列3)抑制24、48、72 h后分别B廿c3细胞增殖 下调了4737、78，09和8012，而其MATl蛋白水平于转染48和72 h后分别下调了3004和5012，与空白对照组相比，差异均有统计学意义(均JP001)，提示转染48 h后是MATlmRNA水平下调的高峰期，72 h后是MATl蛋白水平下调的高峰期。取转染后鸽h为观察点，与阴性siRNA对照组、脂质体对照组、空白对照组和序列l、序列4转染组相比，序列2和序列3转染组中BxPc3细胞的MATlmRNA

24、水平在转染48 h后被分别下调了5202和MDNA标准参照物：1空亡l对照；2阴性对照3脂质体对厢；t面RNA序列l；5B；RNA序列4；6 9【RNA序列2；7 8jRNA序列3；8空白泳道埘照图4转染BiRNA48 h后对BxP细胞MATlmRN表达承平的影响(2琼脂糖凝腔电泳，80V30 m江)7933，而其MATl蛋白水平于转染72 h后被分别下调了3577和5010，差异均有统计学意义(均PO01，图4)，而各对照组之间差异无统计学意义。此外，在各转染组中均未发现cDK7蛋白水平的下调。6MATlsiRNA转染对BxPc3皮下移植瘤的生长抑制作用：2周后可见裸鼠的胰腺癌移植瘤成功率为

25、100。治疗前各组皮下移植瘤体积无显著性差异，治疗4周后MATl一siRNA转染组体积(44055)mm3，明显低于空白对照组(70472)mm和阴性MATl一siRNA对照组(68659)mm3，差异均有统计学意义(均尸O01)。治疗后MATlRNA转染组皮下移植瘤重量(o530o087)g与其他对照组(0922O174)g、(o851o129)g相比，差异均有统计学意义(均PO，叭)，抑瘤率达4253(图5)。l空白对照；2阴性对照；3脂质体对照；4 si删A序列l；5 BiRNA序列4；6 9IRNA序列2；7 siRNA序列3囤5转染8iRN72 h后对BtPo细胞MATl蛋白表达水平

26、的影响(wB结果)讨 论Fjre等”o因正确阐述了RNAj的原理而获得2006年度诺贝尔生理学或医学奖，这距此项成果的发表仅8年。此实验设计基于RNAi技术的以下优点：RN Ai有浓度、时间双重依赖性，干扰效应通常出现在注射dsRNA后6 h，可持续72 h以上o；RNAi基因表达的效应可以传递给子一代，具有遗传性“。MATl基因在调节信号分子转导，控制细胞周期的进程，影响细胞的增殖或凋亡等方面起着关键作用，可能与多种肿瘤的发生相关”。Rossi等”“经典的基因敲除实验已证实：MATl(一一)基因缺陷型小鼠细胞不能进入s期，这影响细胞的增殖和生长。wu等”“报道，转导反义MATlRNA进入骨万

27、方数据生生匡望苤盍2Q盟至!Q旦!旦苤盟鲞星垫翘盟趔丛型!塑：鱼堂!笪!i：!盟。!尘!，塑!：望肉瘤细胞株MG-63，72 h后细胞生长抑制率约333，G。G期细胞比例由4422上升到67。zhg等”“转导反义MATlRNA进入成神经细胞瘤cHPl26细胞中，72 h后G0G。期细胞比例由43上升到66。张世能等9 3证实：转导反义MATl-RNA进人胰腺癌BxPc3细胞后，通过cAK磷酸化Rb途径影响细胞周期蛋白，使细胞生长阻滞于G。期的晚期。本实验在转染MATl一siRNA72 h后，BxPc3细胞生长受到明显抑制，高比例的细胞滞留于G。G，未见明显罚亡峰出现，cDK7的蛋白水平无明显变

28、化。这进一步证实：MATl基因的正常表达是细胞从G期进入s期所必需的，单纯下调MATl蛋白的表达即可影响cDK激酶(cAK)活性，引起肿瘤细胞生长受抑，滞留于G。G。期。值得一提的是，以上3个反义MATlRNA的实验结果均未见肿瘤细胞的凋亡峰出现，与用同样的方法在非肿瘤细胞中诱发的明显的细胞凋亡现象完全不同。这提示单纯的反义废除或RNAi沉默MATl基因可能都不足以使肿瘤细胞出现明显的凋亡。本实验选择了体外转录法，该方法价格适中，可在短期内完成合成并筛选5对siRNA序列的繁重工作量，选用高效的中性阳离子脂质体获得了满意的转染效率，虽为瞬时转染，但已完全满足体外实验的要求。在体内实验时，通过用

29、2倍于体外细胞实验转染浓度的siRNAs直接注射入裸鼠胰腺癌皮下移植瘤(该浓度体外实验未见明显细胞毒性)，获得了预期的抑瘤效果。采用多次重复注射的策略来解决siRNA短时效的问题，但siRNA的直接注射法用于哺乳动物目前仅限于探索性研究，它面临siRNA容易降解，作用时间短，给药途径受限等多方面的问题，构建siRNA的重组表达质粒使其在体内实验中稳定且长时间表达可能达到更理想的抑瘤效果。参考文献1刘建平袁世珍，张世能，等胰腺癌中MATl蛋白的表达与其临床病理特征的关系中国病理生理杂志20052l：163一1662张世能，棘风琴，黄志清，等反义MATl重组腺病毒对人胰腺癌细胞BxPc0的周期调控

30、作用中华医学杂志，2【)05，85：1348135I3za啪re PD，TuBclIl T，sharp PA，et aL RN“：douMtrafldedRNA di碑cb山c ATP-d印衄dem cL衄va即0f mRNA砒2l协23nucl帅hde mLmdCe2(啪10l：25习34lb鲴b打sM，H舡bnnh J，【棚deckd w，札aL DupkxeB of 21一删cle0Lide RNAs m刊la【腮RNA interk踟 icIlltur耐ali衄cillHatIe200I411：4944985张世能袁世珍胞嘧啶脱氨酶基冈治疗人胰腺癌的实验研究中华医学杂志，20I”，80

31、：249-2516Fi陀A，xu s，Mon即mery MK，越日L Poknt蛆d叩eci&辨ne6。inkrf；哪eby dmIble咭L础dRNm CaenorhBbditis ele单sNalum1998，391：806ll【7 J Harl町rtlI JElbashh sM，B郫herI K，d d Identific“叩0f曲Benhd鲫icultIlIed man咀an ce帅z哪aU inkdennzRNJ Cell sci，2001114(n 24)：455745658 S咖boda P，skln PH叫asI|i Hd 8L Sd脚Ii甲e r甜ucti00f山nalll

32、mnemd mRNA自曲00cy妇by RNA mkder町mBDe一0pm肌t2000J27：414741569刘建平，袁fc珍“分子开关”MATl基因的研究进展国外医学生理、病理科学与临床分册，2004，24：30600810Ro时i DJL册deshomugl AKo商s唧i Nd aL Ina咄哼Io胁t盯s Pha肌d d出nive RNA pdym啪cTD pl惴Pho吖I幽n inmice kkl雌M址1 EMB0 J，200120：28“28561j Wu LChen PSh唧CHd aL MAll一m甜uh【ed CAK船d“tv唧I她eu cyck c(1)eIiL Md

33、ceBiol，200l，21：260-270【12zh阳g s，Hc Q，P衄g H，n aL MATlmoduhed c”lin-dopend州 k附ac“vaLJ“# k一 解IlvI婶口8re曲eumh_丑BloUGl aeB【and ne衄k蛐L鲫wLh CaIlc盯R船200464：29772983(收稿日期：20_08-23)(本文编辑：李伟)“气体信号分子硫化氢的基础和临床研究”全国学术研讨会通知由中国医师协会、北京大学第一医院和复旦大学医学院、药学院联合主办的。气体信号分子硫化氢的基础和临床研究”全国学术研讨会拟于2007年11月“日在北京齐鲁饭店举行。1987年，一氧化氮(N

34、0)作为体内第一种气体信号分子被发现，开创了“气体信号分子”这一崭新的生命科学领域。20世纪90年代中期，一氧化碳(c0)被确认为体内第二种气体信号分子家族的新成员。近几年来内源性硫化氢(H，s)在机体心血管系统、神经系统生理活动及病生理改变中的重要意义得到科学界的关注，在此之后，H：s在内分泌系统、消化系统、免疫系统、呼吸系统、泌尿系统等机体各系统中的调节作用相继成为生命科学的研究热点。会议正值气体信号分子被发现20周年之际，诚挚邀请国内同道进行学术交流和研讨以期促进我国基础医学和临床医学领域中气体信号分子的研究进展。会议发起人：杜军保、朱依纯、朱依谆、唐朝枢、姚泰。会议的主要内容包括：(1)对目前已完成的研究成果进行学术交流；(2)对内源性H：s作为新型气体信号分子的研究趋势进行研讨；(3)探讨如何充分利用我国基础和临床医学的各种优势资源，争取开展多中心研究工作。参会者免注册费和食宿费。参会者请于11月8日前报名。报名联系人：金红芳医师，电话：133662507“或01066551122转3209，传真：010舶134261，地址：北京市西城区西安门大街l号北京大学第一医院儿科，邮编100034，E脚jl：jlhon由95l126 c-。万方数据