评价憎水膜过滤器的细菌滞留能力的一个方法.doc

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1、为EHEDG出版由：文件19 评价憎水膜过滤器的细菌滞留能力的方法2002年6月评价憎水膜过滤器的细菌滞留能力的一个方法*编著者： （略）* 报告由欧洲卫生设备设计组织（EHEDG）测试方法小组提交，2002年61. 介绍最近几年的研究发现目前使用的孔径为0.22m憎水性膜过滤器在所有的生产状态下不会保留微生物。进行的调查包括对灭菌的憎水膜过滤器的风险评价，评估过滤器在一系列运行状态下的性能。研究的主要课题由荷兰TNO营养和食品研究所来进行，包括在发酵罐排气系统中碰到的运行状态。为了证实过滤器的性能，开发了细菌悬浮物考验过滤器测试方法(TBAC)。方法用于证明发酵罐上的空气过滤和排气过滤的过滤

2、系统。在这些应用中过滤器用于微生物污染环境。本文描述用于评价灭菌级憎水膜过滤器的细菌滞留能力的测试方法。此方法由EHEDG测试小组提交。程序基于荷兰TNO开发的方法，并与过滤器制造商密切合作，用来测定过滤器细菌去除效率。要测试的过滤器用细菌悬浮物处理一些时间。在此期间细菌必须不能穿过过滤器。选择好氧细菌Brevundimonas diminuta和Bacillus subtilis作为测试菌种。好氧细菌Brevundimonas diminuta ATCC19146的直径为0.5到0.8m因而用于测试过滤器的滞留能力。此菌种广泛用作液体过滤的测试菌种。好氧细菌Bacillus subtilis

3、 ATCC9372的孢子直径为1m，由于其在烟雾化过程中受干燥的影响较小而用于测试过滤器的滞留能力。细菌考验测试方法已证实足够灵敏用来测定对这两种微生物滞留高至99.9995%的过滤器。所用的等动态取样系统(相等的流速通过测试系统和取样管)已证实当使用微生物撞击检测时是特别有用的。2. 材料2.1 微生物Brevundimonas diminuta ATCC19146Bacillus subtilis ATCC93722.2 培养基微生物Brevundimonas diminuta在培养液(含：7.5g/l 胰酶解酪蛋白胨；2.5g/l酵母浸膏；0.5g/lNaCl;0.24g/lMgSO47

4、H2O;PH6.8-7.2;121高压灭菌20分钟)中旋转振荡培养箱中30生长48小时。培养后，在每次试验之前，300ml此培养物8000g离心10分钟，圆颗粒悬浮在400ml的无菌去离子水中。在每次细菌考验测试前和后测定在38培养48小时的营养琼脂平板上菌落形成单元(cfu)的总数。使用一个三段微生物撞击取样器过滤器的排气中的过滤器渗透细菌在营养琼脂平板(Oxoid;3g/l实验室肉汁粉；5g/l细菌蛋白胨；8g/l NaCl;15g/l琼脂；PH7.07.2；121高压灭菌20分钟)上测定。取样器中的平板每15分钟在生物危害层流箱中改变一次并在30下培养48小时。微生物Bacillus s

5、ubtilis在培养液(含：5.0g/l 蛋白胨；2.5g/l麦芽浸膏；0.24g/lMgSO47H2O;PH7.0;121高压灭菌20分钟)中旋转振荡培养箱中30生长48小时。培养液在80中10分钟以杀死营养体细胞。300ml此培养物8000g离心10分钟。圆颗粒在去离子水过滤(0.22m)水中洗涤和重新悬浮三次以从孢子中去除营养液和细胞残留物。在每次试验之前，圆颗粒悬浮在400ml的无菌去离子水中。在每次细菌考验测试前和后测定在38培养48小时的营养琼脂平板上菌落形成单元(cfu)的总数。3. 检测 穿透过滤器的细菌在过滤器的下游使用一个三段微生物撞击取样器在营养琼脂平板(Oxoid)上检

6、测。取样器中的平板每15分钟在生物危害层流箱中改变一次并在30下培养48小时。4. 设备Collison喷雾器，特定的颗粒尺寸范围0.5m至2m(90%);Domnick Hunter UK微生物撞击取样器(MIS);Landre Intermij B.V.,荷兰。5. 测试程序5.1 测试系统每个要测试的过滤器直接从原始的包装中取出并放置在测试系统中。用于测试细菌渗透能力的测试系统的流程图如图1所示。取决于过滤器的尺寸，要测试的过滤器用50400l/min的流速在4099%的相对湿度下含107个细胞/cm2过滤面积的考验细菌空气中考验。测试程序包括两个步骤： 零控制测试； 细菌考验测试。5.

7、2 零控制测试在每次细菌考验测试之前，通过湿的完整性测试来调节过滤器的损坏(泄漏、塞孔)。通过运用将空气压到预先弄湿的过滤器(异丙醇:水混合物，60:40)来进行此测试。当湿的过滤器加压后，测量压力衰减、扩散的气流和起泡点(Sartocheck II或Palltronic FFE04)。这些测量的结果必须在过滤器的规格范围内。在55下干燥过夜后，过滤器放置到测试系统中。然后整个系统用饱和蒸汽在121处理30分钟。系统通过使用干燥的预先过滤(0.22m憎水空气过滤器)的无菌空气干燥和冷却。通过在上游气流中用无菌水使微生物成烟雾状散开30分钟来进行测试，使用MIS每15分钟在上游和下游气流中取样。

8、对从三个不同批号的三个过滤器进行零控制测试。5.3 细菌考验测试在通过湿的完整性测试来调节过滤器并在55下干燥过夜后，过滤器放置在测试台上。整个系统用饱和蒸汽在121处理30分钟。系统使用干燥的无菌空气来干燥和冷却。测试开始用零测试通过在上游气流中雾化无菌水30分钟，每15分钟用MIS在下游微生物取样。细菌考验测试通过在上游气流中雾化测试微生物30分钟来进行，每15分钟用MIS在上游和下游气流中微生物取样。在细菌考验测试结束后，从测试台上取下过滤器并用湿的完整性测试来调节。对从三个不同批号的三个过滤器进行细菌考验测试。图1 细菌滞留测试系统1 压缩空气进口，6bar;2 减压阀；3 带加热盘管

9、和连接到2025水浴的水蒸发器；4 冷凝器；5 灭菌级过滤器；6 管塞；7 刻度流量计；8 蒸汽连接；9 Collison喷雾器，工作压力2bar；10 蒸发段，40；11 压差计；12 要测试的过滤器支架；13 温度和相对湿度传感器；14 取样腔；15 用于气体出口的灭菌级过滤器；16 激光颗粒计数器，六通道；17 微生物撞击取样器，三段；18 真空泵，30l/min；19 泡沫发生器。6. 结果的解释过滤器必须通过所有的测试，在过滤器的下游无细菌可检测到。通过细菌悬浮物的最低计数乘以其雾化体积计算对过滤器总的细菌负荷，应107个细胞/cm2过滤面积。MIS仅从过滤器的下游气流中取了一部分样品。因而测得得数据必须乘以从整个气流被MIS的取样体积分开计算得来的系数。7. 讨论细菌气雾剂细菌考验测试足够灵敏以至于对使用的微生物类型可以测定过滤器效率高至99.9995%。对相同类型的三个不同过滤器进行测试。过滤器必须通过所有的控制和微生物过滤器的完整性测试。8. 参考资料略