血清羟丁酸脱氢酶DGKC推荐方法测定作业指导书.doc

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1、血血清清 羟羟丁丁酸酸脱脱氢氢酶酶 D DG GK KC C 推推荐荐方方法法 测测定定作业指导书作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 德国临床化学学会 (DGKC)推荐的连续监测法。 2-酮基丁酸 + NADHH+ 2-羟丁酸 + NAD+ 2 2. . 标标本本： 2.1 病人准备：无特殊要求。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 3 天内的活性损失： 28保存： 8%；1525保存： 2%。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 标本溶血、细菌污染的标本。 6 6. . 实实验验材

2、材料料 6.1 试剂：申能 HBDH 测定试剂盒（ 141 3207170 1 试剂 1（664ml）试剂 2（616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）： -HDBH 磷酸盐缓冲液 pH7.8 50mmol/L 2-酮基丁酸 3mmol/L 试剂 2（R2）： NADH 0.18mmol/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存 试剂保存于 28，若无污染，可稳定至失效期。试 剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项 试剂中含叠氮钠（ 0.

3、95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品 使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校 准品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品 和质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品 具体参见生化检验校准品和质控品. SOP 文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分

4、分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控做为未知标本进行分析，以2S 为质控 警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 以 TruCal U 复合校准品 a-HBDH 校准 值校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报 告可靠的检测结果。 不使用校准品进行a-HBDH 活力检测，可以直接使 用 A/min 均值乘以计算因子得到结果。但是这样所得 结果的可靠性不如使用校准品。计算a-HBDH 活力的 计算因子见下表： A/min因子

5、=a-HBDH 活力U/L 底物起始的反应（ 37） 样品起始的反应 （37） 340 nm 10079 7935 334 nm 10275 8097 365 nm 18677 14714 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 1 成人 0.9 肝损害： a-HBDH/LDH0.6 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 ： ：-羟丁酸脱氢酶（ -HBDH）是乳 酸脱氢酶的一种同工酶，它以-羟丁酸为底物。与乳 酸脱氢酶的其它同工酶相比，-HBDH 在心肌组织中含 量很高

6、，因此 -HBDH 对心肌梗死的诊断更敏感和更特 异。为区别肝脏和心脏疾病，-HBDH/LDH 比率有助 于肝病和心脏疾病的鉴别。实质性肝病的- HBDH/LDH 比率降低；而心肌梗死的 -HBDH/LDH 比率 升高。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围： 3-1100U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精 密度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 批间精 密度 n=20 x (U/L)

7、s (U/L) CV (%) 样品 1 1002.212.20 样品 1 97.82.202.25 样品 2 1742.971.71 样品 2 1772.011.14 样品 3 884.201.08 样品 3 3866.961.80 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 64 个样品进行 -HBDH 活力检测， 将检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=1.00 x-1.00（U/L） ；r=0.99。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为3 U/L。 14.5 病人结果可报告范围 本法对 -HBDH 活力检测 的 A/min 最大变化在 340 和 3

8、34nm 为 0.15，在 365nm 为 0.07。当样品测定值超过上限时，应将样品用 9g/L 的氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定， 结果乘以 10。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法对 -HBDH 活力检测的 A/min 最大变化在 340 和 334nm 为 0.15，在 365nm 为 0.07。当样品测定值超过上限时，应将样品用 9g/L 的氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以 10。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 无。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 -HBDH 活力检测的 A/min

9、 最大变化在 340 和 334nm 为 0.15，在 365nm 为 0.07。当样品测定 值超过上限时，应将样品用9g/L 的氯化钠溶液作 1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704mol/L ，胆红素浓度 684mol/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察到干扰。即使是很低浓度的血 红蛋白都会干扰检测结果。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In:

10、 Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721. 2.Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.89-94. 3. Elliot BA, Wilkinson JH. The serum - hydroxybutyrate dehydrogenase in diseases other than myocardial infarction. Clin Sci 1963;24:343-55. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。