血清肌酸激酶MB同工酶DGKC推荐方法测定作业指导书.doc

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1、血清肌酸激酶血清肌酸激酶 MBMB 同工酶同工酶 DGKCDGKC 推荐方法测定作业指导书推荐方法测定作业指导书 1 1. . 实实验验原原理理 使用多克隆抗体抑制CK 的 CK-M 同工酶活性后， 按照德国临床化学学会 (DGKC)和国际临床化学学会 (IFCC)推荐的连续监测法检测余下的肌酸激酶活力。 CK-MB 由 CK-M 和 CK-B 亚单位组成。抗 CK-M 抗体 完全抑制了 CK-MM（肌酸激酶的主要活性部分）和 CK-MB 中的 CK-M 亚单位的活性。再检测CK 的活力为 余下的 CK-B 的活力，相当于一半CK-MB 活力。所以 将结果乘以 2，为 CK-MB 的活力。 A

2、DP + 磷酸肌酸 肌酸 + ATP ATP + 葡萄糖 ADP + 葡萄糖 -6-磷 酸 葡萄糖 -6-磷酸+NADP+ 6-磷酸葡萄糖酸 +NADPH+H+ 2 2. . 标标本本： CK 己糖激酶(HK) (G6P-DH) 2.1 病人准备：无特殊。 2.2 类型：血清，肝素或EDTA 血浆。 3 3. . 标标本本存存放放： 稳定性： -20保存稳定 4 周（避光保 存） 。活性损失： 28保存 24 小时或 1822保 存 1 小时至少损失 10%。 4 4. . 标标本本运运输输： 常温条件下保存运输。 5 5. . 标标本本拒拒收收标标准准： 细菌污染的标本。 6 6. . 实实

3、验验材材料料 6.1 试剂 利德曼 CK 测定试剂盒（试剂1 664ml 试剂 2 616ml） 6.1.1 试剂组成 试剂 1（R1）+ 试剂 2（R2）： 咪唑缓冲液 pH6.7 100mmol/L 磷酸肌酸 30mmol/L 葡萄糖 20mmol/L N-乙酰半胱氨酸（ NAC） 20mmol/L 乙酸镁 10mmol/L EDTA-Na2 2mmol/L ADP 2mmol/L NADP 2mmol/L AMP 5mmol/L 二腺苷 -5-磷酸 10mol/L 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（ G6P-DH） 1500U/L 已糖激酶（ HK） 2500U/L 抑制人 CK-MM 的人抗体 2

4、000U/L 6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于28， 若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.4 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊 度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不 能继续使用。 6.1.5 注意事项：试剂中含叠氮钠（0.95g/L）为防 腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘膜。应采取必要的 预防措施使用试剂。 6.2 校准品：使用 DiaSys 公司提供的 TruCal U 校准 品对自动分析仪进行校准，具体参见生化检验校准品和 质控品 .SOP 文件。 6.3 质控品：具体参见生化检验校准品和质控品.SOP

5、文件。 7 7. . 仪仪器器：奥林巴斯 AU1000 生化分析仪 8 8. . 操操作作步步骤骤 8.1 项目基本参数：参见AU1000 生化分析仪项目测定 参数.SOP 文件 8.2 仪器操作步骤：参见AU1000 生化分析仪操作规程 . SOP 文件 9 9. . 检检验验结结果果的的判判断断与与分分析析 1 10 0. . 质质量量控控制制： 在每一批标本中都应把非定值血清水 平 I 与 II 质控）做为未知标本进行分析，以2S 为质 控警告限， 3S 为失控限，绘制质控图，判断是否在控。 质控规则参见室内质控操作规程.SOP 文件。 1 11 1. . 计计算算方方法法： 使用 A/

6、min 均值乘以计算因子得到 CK-MB 活力。计算因子见下表： A A/ /m mi in n因因子子 = = C CK K 活活力力 U U/ /L L 计算因子（ 37）：340nm 8254 334nm 8414 1 12 2. . 参参考考值值范范围围 1：0-24U/L 参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差 别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参 考值。 1 13 3. . 临临床床意意义义 1 1, ,2 2 肌酸激酶主要由存在于肌肉中的同工酶（CK-M） 和存在于脑中的同工酶（ CK-B）组成。在血清中CK 形式为 CK-MM，CK-MB，CK-BB 和巨酶等

7、的二聚物。在 检测心肌损伤时 CK-MB 特异性很高。因此， CK-MB 常 用于心肌梗死的诊断和监视。 1 14 4. . 操操作作性性能能 14.1 线性范围 1000U/L。 14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS 推荐的标 准方法， AU1000 批内精密度小于 3%，总精密度小于 3%。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的 NCCLS 的规则。 批内精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 批间精密 度 n=20 x (U/L) s (U/L) CV (%) 样品 1 30.70.431.40 样品 1 31.50.270.85 样品 2 82.60

8、.500.61 样品 2 93.30.490.53 样品 3 1941.000.52 样品 3 1871.060.57 14.3 方法学比较：本公司的试剂盒(y)与某商品化试 剂盒(x)，同时对 75 个样品进行 CK-MB 活力检测，将 检测结果作方法学比较，其统计结果如下： y=0.97x+3.78（U/L） ；r=0.998。 14.4 灵敏度：本试剂的检测限为2U/L。 14.5 病人结果可报告范围： 2-1000U/L。 1 15 5. . 超超出出范范围围结结果果处处理理： 本法对 CK-Mb 活力的线性上 限为 1000U/L，当测定值超过上限时，应将样品用 9g/L 氯化钠溶液

9、稀释，重新测定。 1 16 6. . 病病危危报报警警值值的的处处理理： 无。 1 17 7. . 方方法法局局限限性性 17.1 本法对 CK-Mb 活力的线性上限为1000U/L，当测 定值超过上限时，应将样品用9g/L 氯化钠溶液稀释， 重新测定。 17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度 1704mol/L，胆红素浓度 684mol/L，血红蛋白 2.00g/L，甘油三酯浓度 22.6mmol/L 时没有观察到 干扰。 1 18 8. . 补补救救措措施施： 当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂 家进行维修。 1 19 9. . 参参考考文文献献 1.Stein W. Creatine k

10、inase (total activity), creatine kinase isoenzymes and variants. In: Thomas L ed. Clinical laboratory diagnostics. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.71-80. 2.Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemistry. 3rd ed. Ph

11、iladelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P.617-721. 3.Wurzburg U, Hennrich N, Orth HD, Lang H. Quantitative determination of creatine kinase isoenzyme catalytic concentration in serum using immunological methods. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15:131-7. 4. Recommendations of the German Society for Clinical Chemistry. Standardization of methods for the estimation of enzyme activities in biological fluids: Standard method for the determination of creatine kinase activity. J Clin Chem Clin Biochem 1977;15:255-60. 2 20 0. . 其其他他： 仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集 后按检验科废物处置管理规定 执行。