山东省地方标准：动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA残留量的测定 液相色谱-串联质谱法（定稿）.doc

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1、ICS 67.040C 53DB37山东省 地方标准DB 37/T XXXXXXXXX动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物 1- DQCT、BDQCT、MQCA 残留量的测定 液相 色谱-串联质谱法Determination of quinocetone and its metabolites 1-DQCT, BDQCT and MQCA residues in animal-derived foodsLiquid chromatography tandem mass spectrometry- XX - XX 发布XXXX - XX - XX 实施山东省市场监督管理局 发 布DB37/T XXX

2、XXXXXXI前 言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：青岛农业大学。 本标准主要起草人：郝智慧、曲少奇、黄亭亭、曲丽华、孙京新。DB37/T XXXXXXXXX1动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 残留量 的测定 液相色谱-串联质谱法1 范围本标准规定了动物源性食品中喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA残留量测定的液相色谱 串联质谱法。 本标准适用于猪肝、猪肉、猪心和鸡蛋中的喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA

3、残留量的测 定。 本方法的检出限均为1.25 g/kg，定量限均为2.5 g/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理采用乙酸乙酯溶液提取样品中喹烯酮及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA，提取液经固相萃取小柱净化， 滤膜过滤后用液相色谱-串联质谱法进行测定，外标法定量。4 试剂或材料除非另有规定，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂。 4.1 水：GB/T 6682，一级。 4.2 乙酸乙酯。

4、 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 甲醇：色谱纯。 4.5 二甲基亚砜：色谱纯。 4.6 甲酸：色谱纯。 4.7 0.1 %甲酸水溶液：准确吸取 0.5 mL 甲酸（4.6），加水（4.1）稀释至 500 mL，混匀。 4.8 0.1 %甲酸乙腈溶液：准确吸取 0.5 mL 甲酸（4.6），加乙腈（4.3）稀释至 500 mL，混匀。 4.9 20 %甲醇溶液：准确量取 200 mL 甲醇（4.4），加水（4.1）稀释至 1 000 mL，混匀。 4.10 洗脱液：准确吸取 20 mL 0.1%甲酸水溶液（4.7），加乙腈（4.3）稀释至 1 000 mL，混匀。 4.11 0.1 %甲酸乙腈溶

5、液：0.1 %甲酸水溶液（4.7）+0.1 %甲酸乙腈溶液（4.8）=7+3。 4.12 喹烯酮（QCT）对照品：纯度98.0 %。 4.13 3-甲基喹噁啉-2-羧酸（MQCA）对照品：纯度98.0 %。 4.14 N1-脱氧喹烯酮（1-DQCT）对照品：纯度98.0 %。DB37/T XXXXXXXXX24.15 脱二氧喹烯酮（BDQCT）对照品：纯度98.0 %。 4.16 标准储备溶液：分别称取喹烯酮对照品（4.12）、MQCA 对照品（4.13）、1-DQCT 对照品 （4.14）、BDQCT 对照品（4.15）10 mg，置 10 mL 棕色容量瓶中，加入 1 mL 的二甲基亚砜（

6、4.5）溶 解后，用乙腈（4.3）定容至刻度，配制成浓度均为 1 mg/mL 的标准储备溶液，-20 冰箱保存，有 效期为 3 个月。 4.17 混合标准中间溶液：准确吸取喹烯酮及 1-DQCT、BDQCT、MQCA 标准储备溶液（4.16）各 1 mL 置 于 10 mL 容量瓶中，加乙腈（4.3）稀释至 10 mL，配制成浓度为 100 g/mL 的混合标准工作溶液。 4.18 基质混合标准工作溶液系列：准确称取 5 份空白试样（2.0 g，精确至 0.001 g）于 50 mL 聚丙 烯离心管中，根据需要分别加入相应体积的混合标准中间溶液（4.17），配制成 2.5 ng/mL、5 ng

7、/mL、10 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL 的基质混合标准工作溶液系列，然后按 7.1 和 7.2 操作，供 液相色谱串联质谱仪分析。 4.19 C18固相萃取柱：250 mg/3 mL，或其它性能类似的小柱。 4.20 微孔滤膜：0.22 m 有机系过滤膜。5 仪器设备5.1 液相色谱串联质谱仪（HPLC-MS-MS）：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2 分析天平：感量 0.001 g 和 0.01 mg 各一台。 5.3 均质器：转速不低于 20 000 r/min。 5.4 氮气吹干仪。 5.5 色谱柱：C18，2.1100 mm，1.8 m，或其它性能类似的柱子。

8、 5.6 离心机：转速不低于 10 000 r/min。 5.7 旋涡混合器。 5.8 旋转蒸发仪。6 样品6.1 试样的制备取均质后的供试样品，作为供试试样。 取均质后的空白样品，作为空白试样。 取均质后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液，作为空白添加试样。6.2 试样的保存-18 以下保存。7 试验步骤7.1 提取平行做两份实验，称取试样2 g（精确至0.001 g），置于50 mL聚丙烯离心管中，准确加入乙酸乙 酯（4.2）10 mL，均质提取1 min后，于10 000 r/min离心10 min，取上清液，置另一干净的50 mL聚 丙烯离心管中。残渣准确加入10 mL乙酸乙酯（4.2

9、）重复提取一次，离心后合并上清液，将上清液于DB37/T XXXXXXXXX3旋转蒸发仪中50 水浴，蒸发至近干。准确加入2 mL 20 %甲醇溶液（4.9）溶解，涡旋混合30 s，待 净化。7.2 净化C18固相萃取柱（4.19）依次用3 mL甲醇（4.4）、3 mL水（4.1）预洗活化。将提取液转移至已活 化好的C18固相萃取柱（4.19）上，保持流速为1滴/s，加入3 mL水（4.1）淋洗，3 mL洗脱液（4.10） 洗脱，收集洗脱液于5.0 mL离心管中，40 氮气吹干。残渣用1.00 mL含0.1 %甲酸乙腈溶液（4.11） 溶解，用微孔滤膜（4.20）过滤，取滤液作为HPLC-MS

10、-MS供试品溶液，采用外标法计算药物含量。7.3 测定7.3.1 液相色谱参考条件：a)色谱柱：C18，2.1100 mm，1.8 m, 或其它性能类似的柱子；b)流动相：0.1 %甲酸水溶液（4.7，A 相），乙腈（4.3，B 相）；c)流速：0.3 mL/min；d)进样量：5 L；e)柱温：30 ；f)流动相及梯度洗脱条件见表 1。表 1 流动相及梯度洗脱条件时间（min）A 相（%）B 相（%）0.09552.060403.060404.001007.001008.09559.0955 7.3.2 质谱参考条件：a)离子源及扫描方式：电喷雾正离子扫描（ESI+）；b)毛细管电压：3 k

11、V；c)离子源温度：110 ；d)脱溶剂气（N2）温度：320 ；e)脱溶剂气（N2）流速：550 L/h；f)监测方式：多反应监测（MRM）；g)喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 的特征离子对、碰撞能量和锥孔电压见表 2。表 2 特征离子对、碰撞能量和锥孔电压序号化合物母离子子离子碰撞能量/eV锥孔电压/V1喹烯酮307273152421-DQCT18914310153BDQCT29115910204MQCA2751431020DB37/T XXXXXXXXX47.3.3 定性测定。通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应 浓度标准溶液各

12、色谱峰的特征离子相对照定性。试样与标准品保留时间的相对偏差在2.5 %之内；试 样特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 3 的规定，则可 判断试样中存在相应的目标化合物。表 3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度，%5020 至 5010 至 2010允许相对偏差，%202530507.3.4 定量测定。对基质标准工作溶液进样，以峰面积为纵坐标、基质标准工作溶液浓度为横坐标绘 制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品采用外标法进行定量，样品溶液中喹烯酮药物及代谢物 1- DQCT、BDQCT、MQCA 的响应值应在仪器测定的线性范围内。喹烯酮药物及

13、代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 溶液的多反应监测（MRM）色谱图参见附录 A。8 试验数据处理供试试样中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA残留量以质量分数，单位以纳克每千克表示（ng/g）， 按式(1)计算：.(1)12=mAC V A 式中： A1试样溶液中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA峰面积； A2标准溶液中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA峰面积； C 标准溶液中喹烯酮及1-DQCT、BDQCT、MQCA浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V 溶解残渣的液体体积，单位为毫升（mL）； m 试样质量，单位为克（g）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 精密度在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值，不大于该平均值的15 %。DB37/T XXXXXXXXX5A A附 录 A （资料性附录） 喹烯酮药物及代谢物 1-DQCT、BDQCT、MQCA 混合标准工作液的 MRM 色谱图喹烯酮药物及代谢物1-DQCT、BDQCT、MQCA混合标准工作液的MRM色谱图见图A.1。图 A.1 混合标准溶液色谱图（20 g/L）的多反映监测（MRM）色谱图_