《生物化学》B平台教学大纲.doc

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1、1基础医学院四年制药学本科专业生物化学 （2404B2404B） 教学大纲执笔人：孙剑 审查人：唐微 分管教学院长：赵万红 学院院长：李文春2一、课程基本信息一、课程基本信息 课程中文名称:生物化学课程代码：2404B学分与学时：3 学分 72 学时 理论学时 48，实验学时 24课程性质：必修授课对象：药学专业本科学生3二、课程教学目标与任务二、课程教学目标与任务生物化学是研究物体内化学分子与化学反应的科学，从分子水平上探讨生命现象的本质，它主要以化学和生物学的理论和方法为主要手段来研究生物体内基本物质的组成，结构、理化性质、生物功能和结构与功能的关系及在生命过程中化学变化的规律。生物化学是

2、药学专业的重要基础课。药学专业通过学习生物化学，使学生掌握生物化学的基本理论，基本知识和基本技能。为学习其它课程和新药研究、开发以及在分子水平上研究药物代谢规律、阐明药物作用机理奠定基础。药学专业生物化学为 72 学时，其中理论课 48 学时，实验课 24 学时。3 个学分。教学方法上运用启发式教学，积极开展教学研究，经常性的开展集体备课、相互听课，探讨好的教学方法。理论课采用多媒体教学。本课程考试课采用闭卷考试，实验课考核分三个方面，包括：实平时操作成绩，实验报告、和实验理论成绩，累积为实验分。理论考试分数占 80%，实验分数占 20%。4三、学时安排三、学时安排 课程内容和学时分配表课程内

3、容和学时分配表药学专业本科生生物化学理论课和实验课学时分配表理论课内容学时实验课内容学时总学时第 1 章 糖的化学22第 2 章 脂类的化学22第 3 章 维生素与微量元素自学第 4 章 蛋白质化学5血清蛋白电泳49第 5 章 核酸的化学5动物组织核酸的提取和鉴定49第 6 章 酶4琥珀酸脱氧酶的作用及抑制48第 7 章 激素及其作用自学第 8 章 生物氧化44第 9 章 糖代谢6糖原的提取和鉴定410第 10 章 脂类代谢5HDL-C 含量测定49第 11 章 蛋白质的分解代谢5血清 ALT 活性测定49第 12 章 核酸与核苷酸代谢22第 13 章 代谢和代谢调控总论22第 14 章 DN

4、A 的复制与修复22第 15 章 转录与基因表达调控22第 16 章 蛋白质的生物合成22合计4824725四、课程教学内容与基本要求四、课程教学内容与基本要求药学专业本科生生物化学绪论绪论 目的要求： 1、明确：生物化学概念及研究对象 2、了解：生物化学在药物中的重要性 第一章第一章 糖的化学糖的化学 目的要求： 1、掌握：糖的概念、重要多糖的基本结构、性质和生理功能。 2、熟悉：糖的重要性；多糖的提取、分离、纯化和分析的基本原理。 3、了解：多糖结构分析的基本原理。 授课学时：2 学时 重点与难点： 重点：重要多糖的基本结构和性质。 难点：多糖的提取、分离、纯化和分析的基本原理。 教学内容

5、： 一、糖的概念、分布及主要生理作用，糖的分类；多糖的化学 ，糖的分类 ，重要多 糖的化学结构与生理功能； 二、多糖分离、纯化及降解的原理，多糖理化性质测定，多糖结构分析的基本原理， 糖链与糖蛋白的生物活性。 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第二章第二章 脂类的化学脂类的化学 目的要求： 1、掌握：脂类的概念、分类、基本结构、性质和功能。 2、熟悉：脂类的重要性；脂类提取分离和分析的基本原理。 3、了解：重要多不饱合脂肪酸的来源与应用。 授课学时：2 学时 重点与难点： 重点：脂肪的化学结构，磷脂，胆固醇和胆酸。 难

6、点：脂类提取分离和分析的基本原理 教学内容： 脂类的概念、分类用生理功能；单脂的化学；复合脂类的化学；脂类的提取、分离和 分析。 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第三章第三章 蛋白质的化学蛋白质的化学6目的要求： 1、掌握：蛋白质的化学组成、基本结构和理化性质。 2、熟悉：蛋白质的重要性，氨基酸的一般结构与性质；蛋白质构象的基本概念；蛋白 质分离、纯化和含量测定的基本原理。 3、了解：蛋白质的结构与功能的关系；蛋白质与多肽的序列分析和化学合成，蛋白质 的分类。 授课学时：5 学时 重点与难点： 重点：蛋白质的化学组成

7、和结构，蛋白质的理化性质。 难点：蛋白质的基本结构和理化性质；蛋白质的分子结构、分离和含量测定的基本原 理。 教学内容： 一、蛋白质是生命的物质基础；蛋白质的化学组成；蛋白质的分子结构； 二、蛋白质的结构与功能；蛋白质的理化性质； 三、蛋白质的分离与纯化的基本原理；蛋白质的分类。 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第四章第四章 核酸的化学核酸的化学 目的要求： 1、掌握：核酸的概念和化学组成、基本结构、理化性质和生物学功能；DNA 双螺旋 结构的要点和碱基互补规律。 2、熟悉：核酸的分类纯化和含量测定体内重要游离核苷酸

8、的结构与功能。 3、了解：核酸结构与功能的关系，核酸顺序分析原理。 授课学时：5 学时 重点与难点： 重点：DNA 的基本结构，理化性质和碱基互补规律，主要 RNA 的结构和功能。 难点：DNA 的一级结构，DNA 二级结构双螺旋结构模型，RNA 的结构与功能。 教学内容： 一、核酸的概念和化学组成。 二、核酸的分子结构及核酸的分离与含量测定 1、核酸的概念和重要性，核酸的基本结构单位单核苷酸； 2、DNA 的分子结构，RNA 的种类和分子结构； 3、核酸的理化性质；核酸的提取、分离和纯化，核酸含量测定的原理。 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启

9、发式教学方法，做到课堂互动。第五章第五章 酶酶 目的要求： 1、掌握：酶在生命活动中的重要性；酶的化学本质，作用特点及影响酶作用的因素 （酶促反应的动力学） 。 2、熟悉：酶的催化作用机制；酶的分离、纯化及酶知性测定的原理；辅酶及同工酶的7概念。 3、了解：固相酶，工具酶，酶在医药学上的应用；酶的命名和分类。 授课学时：4 学时 重点与难点： 重点：酶催化反应的特点，酶的活性中心，影响酶促反应的因素。 难点：酶促反应的动力学；酶的分离、纯化及酶知性测定的原理。 教学内容： 一、酶是生物催化剂 二、酶的结构与功能，酶促反应动力学， 三、酶的分离、提纯及活性测定，酶在医学上的应用。 1、酶的生物学

10、意义，酶作用的专一性，酶的分类与命名。 2、酶的化学组成，酶的辅助因子，酶的结构与功能。 3、酶能显著降低反应活化能中间复合物学说，酶作用高效率的机制，核酶与抗体酶。 4、底物浓度、酶浓度、温度、pH、抑制剂和激活剂对反应速度的影响； 4、酶的分离、提纯，酶的活性测定。重要的酶类，寡聚酶，同工酶，诱导酶，调节酶。 5、酶在诊断上的应用，酶在治疗上的就应用，固相化酶及其在医学上的应用。 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第七章第七章 生物氧化生物氧化 目的要求 1、掌握：生物氧化的概念、特点和意义，线粒体呼吸链组成和传递

11、体的排列顺序。 2、熟悉：底物水平磷酸化和氧化磷酸化偶联作用；高能磷酸键的贮存和释放。维生素 和生物氧化的关系。 3、了解：氧化磷酸化的作用机理及生物氧化抑制剂的作用及意义。 授课学时：4 学时 重点与难点： 重点：电子传递链，电子传递链的解偶联和抑制，氧化磷酸化。 难点：氧化磷酸化的机制。 教学内容 一、概述 1、生物氧化的基本概念 2、生物氧化的特点 二、线粒体氧化体系 1、呼吸链的主要组分：NAD+、黄素蛋白、铁硫蛋白、泛醌、细胞色素体系。 2、呼吸链中传递体的排列顺序：理论依据；四个复合体。 3、主要的呼吸链： NADH 氧化呼吸链、FAD2H 氧化呼吸链。 4、生物氧化过程中 ATP

12、 的生成：1、高能化合物和高能磷酸化合物；2、ATP 的生成： 底物水平磷酸化、氧化磷酸化、影响氧化磷酸化抵制剂。 5、ATP 的利用和贮存 三、非线粒体氧化体系 1、微粒体氧化体系 2、过氧化物酶体氧化体系8教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第八章第八章 糖代谢糖代谢 目的要求 1、 掌握：葡萄糖在体内氧化供能的基本代谢途径（有氧氧化和无氧氧化）及生理意义； 血糖恒定及调节。 2、 熟悉：磷酸戊糖途径的特点及生理意义，糖原合成、分解，糖异生作用。 3、 了解：其它单糖的代谢。 授课学时：6 学时 重点与难点： 重点；

13、糖的代谢途径，血糖的来源与去路，血糖的激素调节。 难点：糖代谢各途径的具体反应过程，丙酮酸脱氢酶复合体作用机制、糖的有氧氧化 的调节。 教学内容一、糖的消化吸收，糖的消化，糖的吸收，糖代谢的概况 二、糖的分解代谢 1、糖的无氧氧化：反应部位、反应过程、生理意义、糖酵解的调节。 2、糖的有氧氧化：反应部位、反应过程、三羧酸循环的生理意义、有氧氧化的生 理意义、有氧氧化的调节。 3、磷酸戊糖途径：反应过程、生理意义。 三、糖原的合成与分解、糖异生、血糖水平的调节 1、糖原的合成作用，糖原的分解作用 2、糖异生原料、异生部位，糖异生途径、乳酸循环、糖异生生理意义 3、糖异生的调节 4、血糖的来源与去

14、路、血糖水平的调节，血糖水平异常 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第九章第九章 脂类代谢脂类代谢 目的要求 1、掌握：血浆脂蛋白的分类、组成、来源和功能。脂肪酸的氧化与酮体的生成和分解 途径。 2、熟悉：脂肪的合成、磷脂和胆固醇代谢概要及其生理意义，糖脂代谢的关系。 3、了解：脂代谢调节紊乱，降血脂药的作用原理。 授课学时：4 学时 重点与难点： 重点：脂肪的动员、脂肪酸的 -氧化，酮体的生成与利用，血浆脂蛋白的结构与功能。难点：脂肪酸的氧化分解过程、脂肪的合成过程。 教学内容：一、脂类在体内的消化和吸收，脂类的体内

15、贮存和运输91、脂肪的消化和吸收，类脂的消化和吸收 2、脂类的体内贮存和动员 3、血浆脂蛋白和脂类的运输：血脂、血浆脂蛋白；血浆脂蛋白的分类、组成、来源及 功能 二、脂肪的分解代谢，脂肪的合成代谢 1、脂肪的水解，甘油的氧化分解、 2、脂肪酸的氧化分解，酮体的生成和利用 3、-磷酸甘油的合成，脂肪酸的生物合成，脂肪的生物合成 三、类脂的代谢 1、磷脂的代谢 2、胆固醇的代谢：胆固醇的生物合成；胆固醇在体内的代谢转化；胆固醇的排泄。 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第十章第十章 蛋白质的分解代谢蛋白质的分解代谢 目的要

16、求 1、掌握：蛋白质在营养上的重要性，氨基酸一般分解代谢与最终产物生成过程及意义。2、熟悉：蛋白质消化过程及生理意义；一碳基团代谢。糖、脂和蛋白质三大代谢的相 互关系。 3、了解：个别氨基酸代谢的特点。 授课学时：4 学时 重点与难点： 重点：氨基酸的脱氨基作用，尿素的合成，一碳单位的代谢。 难点：联合脱氨基作用、鸟氨酸循环基本过程。 教学内容一、营养素的概念和蛋白质的营养，蛋白质的消化、吸收和腐败 1、营养素的概念和生理功能，食物蛋白质的生理功能，氮平衡，蛋白质的营养价值 2、蛋白质的消化，肽和氨基酸的吸收，蛋白质及其消化产物在肠中的腐败作用 二、氨基酸的一般代谢，个别氨基酸的代谢 1、氨基

17、酸在体内的代谢动态 2、氨基酸的脱氨基作用：氧化脱氨基作用、转氨基作用、联合脱氨基作用、非氧化脱 氨基 3、氨的代谢：氨的来源与去路；尿素的合成；氨在血液中的运输形式；谷氨酰胺的生 成。-酮酸的代谢。 4、氨基酸的羧作用，氨基酸与一碳基团代谢，含硫氨基酸代谢的特点，芳香族氨基酸 代谢的特点，肌酸的代谢特点 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第十一章第十一章 核酸代谢与蛋白质的生物合成核酸代谢与蛋白质的生物合成10目的要求 1、掌握：核苷酸合成方式及元素来源，核酸生物合成的基本规律及有关酶的作用，蛋 白质生物合成的基本规

18、律及有关酶和重要因子的作用。基因表达调控的基本方式。 2、熟悉：核酸与蛋白质的生物合成的过程，DNA 损伤与修复的基本原理，药物对核 酸与蛋白质的生物合成的作用。 3、了解：核酸分解途径及主要产物 授课学时：8 学时 重点与难点： 重点：核苷酸的基本结构，核酸的生物合成的规律和基本过程。 难点：核酸与蛋白质的生物合成过程中各蛋白质与核酸的辨认结合及其作用。 教学内容 一、核酸的消化与吸收，核酸的分解代谢，核酸的合成代谢 1、核酸的分解，单核苷酸的分解，嘌呤的分解，嘧啶的分解 2、核苷酸的合成，DNA 的生物合成（复制） ，DNA 的修复，R NA 的生物合成（转录）二、蛋白质的生物合成 1、遗

19、传信息的传递中心法则 2、RNA 在蛋白质的生物合成中的作用 3、蛋白质的生物合成过程， 4、药物对遗传信息传递过程的影响教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。第十二章第十二章 代谢和代谢调控总论代谢和代谢调控总论 目的要求 1、掌握：物质代谢调控的方式，抗代谢物的概念与药学的关系。 2、熟悉：糖、脂类、蛋白质及核苷酸代谢的相互关系。 3、了解：新陈代谢的概念和研究方法，代谢抑制剂的概念与种类。 授课学时：4 学时 重点：物质代谢调控的方式。 难点：抗代谢物与药学的关系，代谢抑制剂的概念与种类。 教学内容 一、新陈代谢的概

20、念和研究方法 二、物质代谢的相互关系 三、代谢调控总论，代谢抑制剂和抗代谢物1、物质代谢的概念 ，能量代谢的概念，物质代谢的研究方法 2、蛋白质与糖代谢的相互联系，糖与脂类代谢的相互联系，蛋白质与脂类代谢的相互 联系 ，核苷酸与糖、脂类和蛋白质代谢的相互联系3、细胞或酶水平的调节，激素和神经系统调节 4、代谢抑制剂，抗代谢物 教学方法：大课讲授，联系生物学所学的相关知识、适当结合生活实际实例，采用疑问式、启发式教学方法，做到课堂互动。11五、课程教学方式与考核方式五、课程教学方式与考核方式（一）教学方式（以课堂讲授为主，辅以实践教学、课后作业、小论文等） （二）考核方式（闭卷考试）六、参考教材

21、及教学参考资料六、参考教材及教学参考资料1. 高天祥，田竟生主编.医学分子生物学. 北京:科学出版社,2000 2. 徐晓利、马涧泉主编. 医学生物化学.北京:人民卫生出版社, 2002 3. 伍欣星, 聂广主编. 医学分子生物学. 武汉:武汉大学出版社, 1996 4. 史济平主编. 药学分子生物学. 第二版, 北京: 人民卫生出版社, 2003 5. 周爱儒主编. 生物化学. 第六版. 北京:人民卫生出版社,2005 6. Devlin TM, Textbook of Biochemistry with Clinical Correlations. 4th. New York: John

22、Wiley & Sons, Inc., 1997 7. Nelson DL, Cox MM. Lehninger. Principles of Biochemistry. 3rd. New Worth Publishers, 2000七、实验教学内容与要求七、实验教学内容与要求 （一）实验教学目的与基本要求（一）实验教学目的与基本要求 （二）实验内容与基本要求（二）实验内容与基本要求 1、实验项目一览表序号序号实验项目名称实验项目名称学学 时时实验类型实验类型实验类实验类 别别每组人每组人 数数 1蛋白质的定量测定4验证实验必做24 人122氨基酸的离子交换柱色谱分离4验证实验必做24 人3醋

23、酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白4验证实验必做24 人4琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制4验证实验必做24 人5血糖含量的测定4验证实验必做24 人6肝糖原的提取与鉴定4验证实验必做24 人2、实验内容及要求实验一 蛋白质的定量测定【实验目的】1、复习蛋白质的理化性质。2、熟悉双缩脲法测定蛋白质含量的原理及方法。【实验设备】722S 分光光度计。【实验材料】1双缩脲试剂：称取硫酸铜（CuSO45H2O）1.5 克及酒石酸钾钠（C4H4O6KNa4H2O）6 克，分别用适量蒸馏水溶解，混合后加 10NaOH 溶液 300 ml，最后加蒸馏水至 1000 ml。2蛋白标准液：取经凯氏定氮标定后的标准蛋白

24、血清用 15的 NaCl 溶液稀释 25 倍，贮于冰箱中备用。【实验方法】待测血清稀释，待测血清用 15的 NaCl 溶液作 25 倍稀释备用。按表操作【注意事项】（一）硫酸钠的溶解度与温度有关，温度低于 30易结晶析出，故室温较低时应在37水浴或恒温箱进行保温。（二）血清样品必须新鲜，如有细菌污染或溶血，则不能得到正确的结果。（三）含脂类较多的血清，可用乙醚 3 ml 抽提一次后再进行测定。实验二 氨基酸的离子交换柱色谱分离【实验目的】1、 掌握离子交换层析分离生物大分子的原理和方法。2、 了解层析法的概念、特点及分类。3、 复习氨基酸的理化性质。【实验仪器】1、玻璃色谱柱：长 20 cm，

25、内径 1.6 cm。2、蝴蝶夹。3、铁支架。134、722S 型分光光度计。5、水浴锅。【实验材料】（1）树脂：磺酸型阳离子交换树脂（732 型）（2）洗脱液：0.45 mol/L、pH5.3 柠檬酸缓冲液。取 285 克柠檬酸（C6O7H8H2O） ，186 克，97NaOH，105 ml 浓盐酸溶于水稀释至 10 L。（3）0.01 mol/L pH12 NaOH 缓冲液：取 4 g NaOH 溶于 10 升蒸馏水。（4）样品液：0.005 mol/L Asp 和 Lys 的 0.02 mol/L HCl 混合溶液。（5）显色剂：三氯化钛-茚三酮溶液：（6）醋酸缓冲液：水 150 ml，无

26、水醋酸钠 82 g，无水醋酸 25ml，加水定容 250 ml， pH5.5。乙二醇甲醚 750 ml，加入茚三酮 20 g，三氯化钛（TiCl315%）1.7 ml，用醋酸缓冲液定容到 1 L。【实验方法】1、树脂的处理：关于市售新树脂的处理见注 1，关于树脂浮选的方法参照讲义所述，本实验采用处理好的树脂。2、装柱：将色谱柱垂直装好，关闭柱底出口，在柱内注入约 2 cm 高 pH5.3 的柠檬酸缓冲液。3、平衡：柱装好后用 pH5.3 柠檬酸缓冲液以 1 ml/min 的流速平衡，直到流出液的 pH与洗脱液的 pH 相同为止（pH 试纸检查） ，这大约需要 23 倍床体积。4、加样与洗脱：降

27、低柱上的液器阀，小心使柱内液体流至柱表面时即行关闭。用加样器吸取 0.8 ml 氨基酸混合样品溶液，沿柱壁小心地加入柱中，加样时不要过快，以免冲坏树脂表面，加样后慢慢降低液器阀，使液面再与树脂面相齐时关闭，然后再用吸管吸取适量洗脱液如此清洗柱内壁四周 12 次。洗涤后，用 pH5.3 柠檬酸缓冲液在柱内加到约 2 cm 高的液层，然后调流速 1 ml/min 即开始洗脱。5、收集：柱流出液可用自动分离收集器或以刻度试管人工收集按每管 4 ml 先收集 4管。6、改换高 pH 洗脱收集：升高液器阀，更换成 pH12 NaOH 洗脱液，然后按上面同样方法继续收集第 5 管至第 12 管。7、测定：

28、将收集的各管编号后，分别取 0.5 ml 或 1.0 ml 收集液于一洁净的干试管中，加入 1 ml pH5.3 柠檬酸洗脱缓冲液，0.5 ml 茚三酮试剂，混合后在 100 水浴上加热 25 分钟。然后水冷却 510 分钟，加 3 m1 60乙醇稀释，摇匀后用 722S 型分光光度计在 570 nm 处比色。测定后，以光密度为纵坐标，收集的管数或毫升数为横坐标绘制洗脱曲线。8、再生，对于装好的柱使用几次后需要 0.2 mol/L NaOH 溶液洗脱，再用蒸馏水洗至中性后重复使用。实验三 醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白【实验目的】1、 复习蛋白质的相关理论知识。2、 掌握醋酸纤维薄膜电泳分离血清

29、蛋白的原理与方法。14【实验仪器】1、电泳仪：包括直流电源整流器和电泳槽两个部分。2、醋酸纤维素薄膜。3、721 型分光光度计。【实验材料】试剂（1）巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度 0.06）：巴比妥钠 12.7 g，巴比妥 1.66 g 于蒸馏水中加热溶解后再加水至 1000 ml。（2）氨基黑 10B 染色液：氯基黑 10B 0.5 g、甲醇 50 ml、冰醋酸 10 ml、蒸馏水 10 ml。（3）漂洗液：95乙醇 45 ml 冰醋酸 5 ml 蒸馏水 50 ml。【实验方法】1、准备与点样2、电泳将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时，无光泽面(即点样面)向下，点样端置于阴极槽架上以

30、四层滤纸作桥垫，膜条与滤纸需贴紧，待平衡 5 分钟后通电，电压为 110 V，电流为 0.40.6 mA/cm，通电 1 小时左右关闭电源。3、染色通电完毕后用镊子将薄膜取出，直接浸于盛有氨基黑 10B 的染色液中，染 5 分钟取出，立即浸入盛有漂洗液的培养皿中，反复漂洗数次，直至背景漂净为止。用滤纸吸干薄膜。 实验四 琥珀酸脱氢酶的作用及其可逆性抑制【实验目的】1、掌握几种可逆性抑制的概念、作用机理及特点。2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。【实验材料】1、组织匀浆机。2、恒温水浴箱。3、试剂（1） 0.1 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：0.1 mol/L NaH2PO4

31、 19 ml 加 0.1 mol/L Na2HPO4 81 ml。（2）0.1 mol/L 琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠 1.5 g 溶于 100 ml 蒸馏水中。（3）0.1 mol/L X 溶液：取 X 1.5 g 溶于 100 ml 蒸馏水中。（4）0.02%甲稀蓝溶液。【实验方法】新鲜兔肝立即剪碎，放于组织匀浆机中，加入 pH7.4 的 0.10 mol/L 磷酸盐缓冲液，制备成 200g/L 的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按表配制反应体系。15实验五 血糖含量的测定吴宪-Folin 法【实验目的】1、掌握血糖微量测定的基本原理和无蛋白血滤液的制备。2、掌握血糖正常水平及其测定的临床

32、意义。3、复习血糖的来源、去路及其调节的有关理论知识。【实验材料】1、722S 分光光度计2、离心机1、 试剂：（1）碱性铜试剂：称取无水 Na2CO3 40 g，溶于 100 ml 蒸馏水中,溶后加酒石酸 7.5 g若不易溶解可稍加热，冷却后移入 1000 ml 的容量瓶中。另取纯结晶 CuSO4 4.5 g 溶 200 ml蒸馏水中，溶后再将此溶液倾入上述容量瓶内，加蒸馏水至 1000 ml 刻度，放置备用。（2）磷钼酸试剂：取纯钼酸 70 g，溶于 10NaOH 400 ml 中，其中再加 Na2WO410 g，加蒸馏水至总体积约为 800 ml，加热煮沸 30-40 分钟，以除去钼酸中

33、可能存在的 NH3，冷却后加 85H3PO4 250 ml，加蒸馏水稀释至 1000 ml 刻度，摇匀，贮棕色瓶保存。（3）标准葡萄糖液：（4）标准葡萄糖液：（5）0.25苯甲酸液：称取苯甲酸 2.5 g，加入煮沸的蒸馏水 1000 ml 中，使成饱和溶液，冷却后，取上清液备用。（6）10Na2WO4。（7）2/3N H2SO4【实验方法】1、无蛋白血滤液的制备：取干试管一支，准确加入蒸馏水 3.5 ml，血液 0.1 ml，2/3 N H2SO4 0.2 ml，10Na2WO4 0.2 ml，混匀，离心，收集滤液备用。2、取试管 3 支，编号，按表操作。【注意事项】1、本法所测得的血糖并不完

34、全是真正的血糖，因滤液中尚有其它还原性物质的干扰(约占 10)，故结果偏高,用本法测定血糖浓度为 80120 mg%(4.446.67 mmo1/L)2、血糖测定应在取血后 2 小时内完成，放置过久糖易分解，致使结果偏低。3、磷钼酸试剂应贮于棕色瓶中，如出现蓝色，表明试剂本身已被还原，不能再用。4、碱性铜试剂中有氧化亚铜沉淀，也不能用。取碱性铜试剂 l ml，加磷钼酸试剂 1 ml，如蓝色消失，表明此试剂无氧化亚铜，可用。实验六 肝糖原的提取与鉴定【实验目的】1.根据所提供的信息和所学的知识写出实验原理和设计实验方法。2.掌握糖原结构组成及特性。3.复习糖原代谢相关知识。【实验方法】161、由

35、学生设计实验方法步骤，只要求思路，可不要求具体试剂的所用剂量。2、指导教师提示并归纳总结。【实验材料】1、家兔。2、组织匀浆机。3、离心机。4、水浴锅。5、白磁凹盘。6、试剂（1）5三氯醋酸。（2）95乙醇。（3）0.9NaCl（4）碘试剂：I2 100 mg，KI 200 mg 溶于 30 ml 蒸馏水中。（5）浓 HCl。（6）50NaOH。（7）班氏试剂：称取柠檬酸钠 173 g 及无水 Na2CO3放入 1000 ml 烧杯内，加水约 700 ml，加热溶解并以玻棒不断搅匀，溶解后待冷至室温。另用 200 ml 锥形瓶，称取CuSO45H2O17.3 g，加蒸馏水约 100 ml，加热溶解。将 CuSO4液缓缓倒入前液，倾入 1000 ml 容量瓶内，不断搅匀，补足水量至 1000 ml。如试剂混浊，可用脱脂棉过滤入瓶备用。三、实验教材三、实验教材 生物分子实验教程，卢方安主编，人民卫生出版社出版，第一版，2005四、考试方式四、考试方式 平时实验成绩占 85%，最后一次实验理论考试占 15%。