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1、与医学相关的论文的范文大全优选与医学相关的论文的范文大全优选诗琪5医学论文知道怎么写吗?下面是我为大家整理整合关于药学论文的范文，欢迎浏览，希望对你有帮助。从P38-MAPK信号通路讨论黄芩苷对Ac-LDL+LPS诱导的与动脉粥样硬化相关巨噬细胞凋亡的影响动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)相关心血管疾病的发生与AS斑块的不稳定性密切相关。巨噬细胞是不稳定斑块的主要细胞成分，其凋亡与As斑块的破裂相关。研究发现巨噬细胞凋亡的结果在AS的早期和晚期是不同的。早期病变中，巨噬细胞的凋亡有利于抑制病变细胞泡沫化，显著降低早期病变面积。晚期巨噬细胞凋亡与动脉粥样硬化斑块的破裂密切相关。

2、p38蛋白激酶通路是已确定的MAPKs家族成员之一，介入细胞的生长、发育以及细胞间功能同步等多种生理经过，并与炎症、应激反响的调控密切相关。p38MAPK通路也介入介导凋亡的信号传导，促进巨噬细胞的凋亡。黄芩苷(baicalin)是由黄芩的枯燥根中提取的一种黄酮类化合物，是黄芩的主要有效成分之一。近年来，大量研究发现，黄芩苷具有抗动脉粥样硬化作用。然而对黄芩苷抗AS的作用机制并没有明确的说明。通过整体及离体实验研究发现，黄芩苷对肺炎衣原体感染所致AS病理经过具有良好的阻抑作用。本实验以脂多糖和乙酰低密度脂蛋白双重打击诱导离体培养的巨噬细胞凋亡，观察黄芩苷对凋亡及凋亡相关P38MAPK信号通路的

3、影响，从巨噬细胞凋亡信号通路方面论证黄芩苷干涉动脉粥样硬化的作用机制。1材料与方法1.1材料RAW264.7细胞购自中山医学院细胞中心;0.25%胰酶、DMEM培养液、脂多糖、培养瓶、PBS、胎牛血清、青霉素、链霉素购自广州斯佳生物科技;乙酰低密度脂蛋白、脂多糖、黄芩苷、AnnexinVFITC/PI细胞凋亡检测试剂盒、Westernblot检测试剂盒购自广州晨展生物公司。1.2巨噬细胞的采集及试验分组RAW264.7细胞株常规培养于含100g/mL青链霉素、10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液，置37、5%CO2、饱和湿度中培养，所有实验均在细胞处于对数生长期进行。黄芩苷剂量参照邝氏实

4、验，乙酰低密度脂蛋白用量参照VenkateswaranA实验，脂多糖用量参照万氏实验，试验分为7组，即为(1)正常组：巨噬细胞采用原培养基孵育;(2)乙酰低密度脂蛋白对照组：原培养基中吸出125L上清液，参加100g/mLAc-LDL125(3)脂多糖对照组：原培养基中吸出50L上清液，参加1g/mLLPS50(4)模型组：原培养基中吸出175L上清液，参加100g/mLAc-LDL125g/mLLPS50(5)低剂量观察组：原培养基中吸出275L上清液，参加100g/mLAc-LDL125L+1g/mLLPS50L+120g/mL黄芩苷含药血清100(6)中剂量观察组：原培养基中吸出275L

5、上清液，参加100g/mLAc-LDL125L+1g/mLLPS50L+240g/mL黄芩苷含药血清100(7)高剂量观察组：原培养基中吸出275L上清液，参加100g/mLAc-LDL125g/mLLPS50L+480g/mL黄芩苷含药血清100L。1.3AnnexinVFITC/PI细胞凋亡检测用完全培养液调整细胞数为1.5105个/mL，接种于24孔板，待细胞贴壁后，分组方法同前，刺激物参加24h后，用不含EDTA的胰酶消化细胞，PBS洗2次，按试剂盒讲明书要求染色后，流式细胞仪检测细胞凋亡率。1.4Western-blot检测P38的表达另取细胞接种于12孔板，待细胞贴壁后，分组方法同

6、1.2项下，刺激物参加4h后，参加细胞裂解液，采用Western-blot法检测P38-MAPK含量。详细步骤如下：将细胞采集裂解后进行丙稀酰胺凝胶电泳，电泳后，将胶上的DNA转移到PVDF膜上，PVDF膜用封闭液封闭之后，TBST液洗膜3次，并分别参加鼠P384过夜。并用鼠GAPDH单抗(一抗)作为内参照。TBST液再洗膜3次后，参加HRP标记的羊抗鼠二抗室温振荡2h，洗膜后，参加LumiGLO底物，对X胶片(Kodak，日本)适度曝光后，显影，定影。1.5实时荧光定量PCR技术检测JNK蛋白表达使用qRT-PCR法，操作步骤按试剂盒讲明书完成。1.6统计学处理数据采用SPSS13.0统计软

7、件，采用方差分析_(ANOVA)模块，组间比拟采用t检验。2结果2.1流式细胞仪检测细胞凋亡正常组、对照组与模型组的凋亡率差异有统计学意义(P0.01)，模型组细胞凋亡率明显高于正常组和对照组，可知实验造模成功。黄芩苷低剂量观察组与模型组细胞凋亡率相比差异无统计学意义(P0.01)。黄芩苷中、高剂量观察组与模型组细胞凋亡率相比差异有统计学意义(P0.01)，黄芩苷中、高剂量观察组细胞凋亡率明显高于模型组，而高剂量观察组细胞凋亡率又高于中剂量观察组。结果见表1。以Annexin-FITC和PI(propidium，碘化丙锭)双标法经流式细胞仪检测RAW264.7巨噬细胞凋亡率。2.2Wester

8、n-blot检测磷酸化P38的表达常规培养基孵育的巨噬细胞(正常组)中有少量磷酸化P38表达，定义为1。在Ac-LDL、LPS、Ac-LDL+LPS的干涉下，磷酸化P38表达皆升高。乙酰低密度脂蛋白对照组与脂多糖对照组磷酸化P38相对表达量为：2.0、1.2，模型组中磷酸化P38表达明显，为2.2。这表明在Ac-LDL、LPS、Ac-LDL+LPS的干涉下磷酸化P38表达水平皆增加，Ac-LDL+LPS模型组最明显，证实建模成功。经过黄芩苷的处理，低、中、高剂量观察组磷酸化P38表达量分别为1.8、1.6、3.8。可见，Ac-LDL+LPS联合打击较Ac-LDL或LPS单独干涉的巨噬细胞中P3

9、8高。黄芩苷低、中剂量观察组对磷酸化p38表达无明显的促进或抑制作用，高剂量观察组磷酸化P38表达量明显增高。3讨论本实验采用乙酰低密度脂蛋白及脂多糖双重打击诱导巨噬细胞凋亡。实验发现，在LPS复合高脂条件下培养后巨噬细胞凋亡显著增加，正常组、对照组与模型组的细胞凋亡率差异有统计学意义(P0.01)，模型组细胞凋亡率明显高于正常组和对照组，可知实验造模成功。在巨噬细胞凋亡显著增加的同时，模型组也出现了较高水平磷酸化P38的表达，这讲明脂多糖和乙酰低密度脂蛋白双重打击是诱导巨噬细胞凋亡的重要原因，P38-MAPK信号通路介入这一经过。黄芩苷高剂量观察组与模型组细胞凋亡率相比差异有统计学意义(P0

10、.01)，同时黄芩苷高剂量组磷酸化P38表达明显加强，较模型组有统计学意义。可见，高剂量的黄芩苷可能通过激活P38通路促进早期AS斑块中巨噬细胞凋亡。黄芩苷中剂量观察组与模型组细胞凋亡率相比差异有统计学意义，黄芩苷低、中剂量组磷酸化P38表达较模型组无统计学意义。综上所述，随着黄芩苷浓度的上升，细胞凋亡率升高。高剂量的黄芩苷可能通过激活P38-MAPK信号通路促进巨噬细胞凋亡，而详细激活P38MAPK信号通路的最小剂量有待进一步研究。中量黄芩苷组磷酸化P38表达较模型组无计学意义，但其仍促进巨噬细胞的凋亡，考虑中剂量黄芩苷可能通过JNK、SRA等其他通路促进细胞凋亡，需进一步研究以说明。动脉粥

11、样硬化斑块越不稳定，越易破裂，斑块破裂后易导致血栓构成。而巨噬细胞是不稳定斑块的主要细胞成分。巨噬细胞凋亡在AS发生发展中起着非常重要的作用，它贯穿了AS整个经过。Tracie等17-18用多种基因敲除动物模型深化研究了FC引起巨噬细胞凋亡的机制，发现主要需要3个通路的同时作用，这3个通路分别为氨基端激酶(JNK)通路、P38-UPR-CHOP通路和A型清道夫受体(SRA)通路。P38表达与巨噬细胞凋亡有密切联络19-20。近年国内外学者以LPS和乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)加酰基辅酶A-胆固醇酰基转移酶抑制剂(58035)条件成功诱导巨噬细胞凋亡。近年来，大量研究也发现，黄芩苷具有抗动

12、脉粥样硬化作用。然而对黄芩苷抗AS的作用机制并没有明确的说明。马珺等研究显示黄芩苷能够通过调节血脂及抗氧化作用对AS起到干涉作用;于昕等研究提示黄芩苷可能通过降血脂、改善凝血纤溶系统平衡、下调凝血酶激活纤溶抑制物(TAFI)水平等途径干涉AS的构成;吴伟等研究证实黄芩苷能够明显降低血清TNF、IL-6及IL-10水平，通过抑制炎症反响进而发挥其对AS的早期干涉作用;李岩等研究提示黄芩苷可能通过抗炎作用发挥其对AS的干涉作用。在动脉粥样硬化早期的病变中(即坏死核心发展之前)，巨噬细胞凋亡与病灶大小呈反比关系，巨噬细胞的凋亡有利于抑制病变细胞泡沫化，显著降低早期病变面积。早期病变巨噬细胞死亡的有益

13、方面已经用缺陷鼠来说明，AIM-/-和LDLR-/-双敲除鼠表明增加了巨噬细胞的死亡，可显著降低早期病变面积。也有研究发现，在病变早期23-24，巨噬细胞吞噬功能很强，主要针对脂蛋白，可以有效吞噬去除凋亡细胞，限制活体内动脉粥样硬化病变的大小，而在此经过中巨噬细胞本身也遭受凋亡细胞所释放的细胞因子的影响而发生凋亡，可见在动脉粥样硬化病变早期巨噬细胞凋亡是减少病变成分，抑制动脉粥样硬化进展的表现。根据本实验研究数据，综合当前研究现状，高剂量的黄芩苷可能通过激活P38MARK信号通路促进早期AS斑块中巨噬细胞凋亡，抑制病变细胞泡沫化，减少病变成分，降低病变面积进而拮抗早期动脉粥样硬化斑块的病理进程

14、。低剂量黄芩苷的作用不明显，提示较高浓度的黄芩苷才能激活相关通路，发挥拮抗早期动脉粥样硬化的作用。随着如血管内超声成像等各种检测技术的日益完善，我们能够更多的从黄芩苷促进早期AS斑块巨噬细胞凋亡方面入手，深化研究黄芩苷的抗动脉粥样硬化作用，利用黄芩苷对动脉粥样硬化中巨噬细胞凋亡进行更有利的调控，为早期有效干涉动脉粥样硬化的进展提供新的治疗靶点。当归贝母苦参丸含药血清对胃癌细胞SGC-7901抑制作用机制的讨论当归贝母苦参丸出自（金匮要略），原为治疗妊娠小便难，具有活血补血，化痰散结，清热解毒的成效。与肿瘤的发病正气缺乏，痰(湿)浊、热毒、瘀血内阻有着共同机制。近年来以用其加味治疗宫颈癌、膀胱癌

15、、前列腺癌获得明显疗效。其中绝大多数研究都是针对下焦癌变进行，而本研究拓展思路，将研究目光转向中焦胃癌。从基因转录水安然平静蛋白表达水平检测环氧化酶(cyclooxygenase，COX)，Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2associatedXprotein，Bax)，抑癌基因(phosphataseandtensinhomologdeletedonchromosometen，PTEN)，在细胞内的表达，讨论当归贝母苦参丸含药血清抑制胃癌细胞SGC-7901的机制，为中医药经方抗肿瘤研究提供理论基础。1材料1.1动物及细胞株SPF级Waster大鼠，合格证号SCXK(甘)2020-0001，体

16、重(18020)g，雌雄各半，由甘肃中医学院科研中心动物实验室提供。饲养条件:室温2025，湿度45%55%。动物分笼饲养，食标准饲料，饮水自由，饲料由甘肃中医学院科研中心动物实验室提供。人胃癌SGC-7901细胞株购于北京协和肿瘤研究所。1.2药物及试剂当归、贝母、苦参购自甘肃中医学院附属医院。DMEM培养基、胎牛血清(美国HyClone公司)，四甲基偶氮唑蓝(上海华舜生物工程)，二抗(中杉金桥生物技术)，RNAisoTMPlus(批号D9810A)，thePrimeSeriptRTreagent，kit(批号DRRO37A)，SYBRPremixExTaqTM(批号DRR081A，英国Ta

17、karBio公司)，国产分析纯试剂(北京化学试剂公司)。1.3仪器SW-CJ-1D型超净工作台(苏州苏干净化设备)，MCO-18AIC型CO2培养箱(日本三洋公司)，CKX41/U-RFLT50型荧光倒置显微镜(日本Olympus公司)，5804R型高速冷冻离心机(德国Eppendorf公司)，Bio-RadCFX96型荧光PCR仪(美国伯乐公司)。2方法2.1含药血清制备2.1.1中药汤液制备将各复方中药药物饮片浸泡1h，煎煮2次，每次30min，纱布粗滤去渣，药液浓缩为含生药1，2，3gmL-1。2.1.2给药剂量方式及采血方法按完全随机化分组方法，将120只大鼠分为当归贝母苦参丸高、中、

18、底剂量组和空白空白组，每组30只，中药组和空白组大鼠天天分别灌服中药和生理盐水0.01mLg-1，2次/d，均连续给药7d，正常饮食饮水。对每只大鼠于末次给药2h后，乙醚麻醉，腹主动脉采血，3000rmin-1，15min离心分离血清，将各组已取备的30支血清混合，0.22m微孔滤膜过滤，56，30min灭活，-80保存备用。2.2细胞培养人胃癌细胞株SGC-7901接种于无菌培养瓶中，其中1组参加空白大鼠血清，其中1组参加10%胎牛血清作为空白组，用于检验空白大鼠血清的特异性，其他3组参加不同浓度的含药血清;每组都参加含双抗的DMEM培养基，在37，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。细胞单层

19、贴壁培养，到达对数生长期时用0.25%胰酶，37条件下消化，吹打成细胞悬液后接种传代。2.3MTT法检测细胞增殖取生长状态好，处于对数生长期的细胞，制备成密度为5104/mL细胞悬液。96孔板每孔参加细胞悬液100L，细胞贴壁后，实验组参加不同浓度的含药血清与培养液，空白组参加等量的完全培养液，每个剂量设8个复孔。于24，48，72h后，各取一块96孔培养板，每孔参加浓度为5gL-1的MTT20L。4h后弃去培养基，每孔加DMSO150L，摇床震荡10min，酶联仪于570nm处测出各孔吸光度A，按下式计算细胞抑制率。细胞抑制率=(A空白组-A给药组/A空白组)100%。2.4RT-qPCR检

20、测COX-2，Bax，PTEN的mRNA表达水平总RNA提取:分别将空白血清和含药血清处理24h的SGC-7901细胞用PBS清洗2次，参加预冷的Trizol1mL，冰上静置10min，使用细胞刮刮除细胞，转移至RNA酶处理过的1.5mLEP管中，参加0.2mL三氯甲烷，剧烈混匀，冰上静置5min;4，12000rmin-1离心，15min;之后可见分层，小心汲取上清约0.5mL;参加0.5mL异丙醇，上下混匀，冰上静置10min;4，10500rmin-1离心10min，可见核酸沉淀，弃上清，参加75%乙醇溶解;4，8500rmin-1离心5min，弃上清;枯燥5min后参加适量DEPC水，

21、存于-80。提取RNA进行浓度纯度检测后，用TaKaRa逆转录试剂盒逆转录合成cDNA。使用CFX96Real-Time荧光PCR仪扩增目的基因。COX-2上游引物3-GCCTGAATGTGCCATAAGACTG-5，下游引物3-AAACCCACAGTGCTTGACACA-5Bax上游引物3-GGATGCGTCCACCAAGAAG-5，下游引物3-GCAAAGTAGAAAAGGGCGACA-5PTEN上游引物3-GACTCTGGAATATCCCTGGACA-5，下游引物3-AGGTTTGCTGCATCGACATCTG-5。采用荧光定量PCR试剂盒讲明操作，使用CFX96Real-Time荧光P

22、CR仪扩增，条件为:9510s预变性，9510s，6020s40个循环分析溶解曲线，确认扩增产物的特异性，相对表达量计算采取2-Ct法计算。2.5免疫细胞化学技术检测COX-2，Bax，PTEN蛋白量的表达在24孔培养板中每孔置入无菌10mm10mm的盖玻片，将对数生长期的胃癌SGC-7901细胞消化成单细胞悬液，接种于24孔培养板中，每孔500细胞贴壁后，空白组参加50L完全培养基，余孔参加空白血清、高、中、低含药血清各50L，每组设3个复孔。待细胞爬满盖玻片后，将爬片置于4%多聚甲醛中过夜，PBS洗3次，5min/次;滴加50L0.1%TritonX-100室温下孵育15min，PBS洗3

23、次，5min/次;滴加3%H2O2室温下孵育30min，PBS洗3次，5min/次;滴加50L5%BSA封闭液，室温20min，甩去多余液体;滴加50L稀释过的RabbitAnti-collagenType(1100)，湿盒中4孵育过夜;以PBS代替一抗，作为阴性对照，PBS洗3次，2min/次;滴加生物素化山羊抗兔IG，3720min，PBS洗3次，2min/次;滴加试剂SABC，3720min，PBS洗4次，5min/次;DAB显色，自来水冲洗1min;苏木素复染5min，0.5%盐酸乙醇分化10s，氨水返蓝10s;梯度乙醇(70%，75%，80%，85%，95%，100%)脱水枯燥，每一

24、个梯度5min，二甲苯透明10s，甘油封片。倒置相差显微镜观察照相。每张爬片选择3个高倍视野，使用图像费你先软件对所拍照片进行分析，测定相对灰度值。2.6统计学分析采用SPSS19.0统计软件分析数据，计量资料以珋xs表示，多组间采用单因素方差分析，以P0.05为差异有统计学意义。3结果3.1对SGC-7901细胞增殖抑制的影响MTT法检测细胞活力，空白血清组与空白组相比拟，差异不大，所以在下列比拟经过中将把空白组作为基准组。发现10%浓度的当归贝母苦参丸含药血清对人胃癌SGC-7901细胞抑制作用最明显，与空白组比拟，含药血清高、中、低组细胞的A明显降低，SGC-7901细胞组72h的抑制率

25、分别为:高剂量组到达35.21%，中剂量组为32.39%，低剂量组为21.12%;差异有统计学意义(P0.05)。3.2对SGC-7901细胞COX-2，Bax，PTEN蛋白表达的影响COX-2在空白组主要以强阳性和阳性表达为主，在含药血清干涉组中，细胞着色逐步变浅，COX-2蛋白的阳性表达率由与空白组相比明显下降;促凋亡基因Bax在空白组中呈阴性或是弱阳性表达，在含药血清干涉组中，细胞着色逐步变深，呈阳性或强阳性表达，Bax蛋白的阳性表达率与空白组相比上升;抑癌基因PTEN蛋白着色逐步变深，表达逐步加强，呈强阳性或阳性表达，而空白组细胞着色较浅，呈弱阳性或阴性表达。4讨论胃癌是我国常见的肿瘤

26、之一，其发病率和死亡率均居各类肿瘤的首位，由于早期胃癌无特异性的症状，所以大多数患者在就诊时就已到中晚期，而此时预后效果极差，经常由于术后复发或癌细胞侵袭转移而扩散到其他部位而死亡。肿瘤的发生发展是癌基因激活与抑癌基因受抑制的结果，并受相关基因的影响，其mRNA与蛋白的表达量亦影响癌细胞的发展与恶性肿瘤的预后。本研究从COX-2，Bax，PTEN3个不同方向的相关基因讨论抑制肿瘤的机制，为寻找新的药物对其作用加以调控可能对胃癌治疗带来新的策略。COX是前列腺素(PGs)合成的关键限速酶。COX-2的表达与胃癌的浸润深度密切相关，研究表明表达COX-2的细胞能够直接附着于基底膜，毁坏基底膜的完好

27、性，进而改变细胞的黏附性，促进肿瘤的浸润转移。Hp黏附于胃黏膜上皮，其释放的毒力因子直接与上皮细胞接触，而胃黏膜上皮损伤诱导COX-2表达Hp感染可刺激诱导COX-2的白细胞介素8(IL-8)，血管内皮生长因子(VEGF)等因子的释放。本实验研究表明，当归贝母苦参丸含药血清作用于胃癌细胞能够明显降低COX-2的表达量，揣测可通过抑制COX-2的表达降低细胞间黏附的E-钙黏蛋白活性，减弱肿瘤细胞的侵袭能力。Bax基因是Bcl-2基因家族内的同源基因，Bax基因表达异常与多种肿瘤发生密切相关。Bax缺失在肿瘤的发生中起重要的作用，研究发如今多种肿瘤中存在Bax基因的低表达。Kra-jewski检测

28、了119例乳腺癌，发现Bax缺失率为34%，而正常的乳腺上皮细胞Bax阳性率为97%。Bax表达与胃癌的关系研究不多，本研究结果显示当归贝母苦参丸含药血清使胃癌细胞中Bax表达阳性率为99.7%，进而抑制Bcl-2功能，加速细胞凋亡，抑制胃癌细胞的生长对胃癌发生、发展经过中可能起重要作用。PTEN是具有磷酸酶活性的抑癌基因，介入细胞生长调节，并在肿瘤细胞浸润、转移中起一定作用，恶性肿瘤的发生发展与PTEN缺失和突变有关，各类癌的总突变率为5%40%。PTEN基因突变能够降低瘤组织中脂质磷酸酶活性，刺激肿瘤细胞生长并抑制凋亡。研究表明:PTEN蛋白的表达与淋逢迎转移、侵袭程度密切相关。胃癌组织中

29、PTEN基因的检测可了解与判定肿瘤增生，侵袭及转移的能力和程度。本实验研究表明，当归贝母苦参丸含药血清作用于胃癌细胞能够升高PTEN的表达量，进而抑制DNA的复制;PTEN升高，去磷酸化作用加强，进而抑制细胞周期，诱导细胞凋亡和分化，抑制其转移。当归贝母苦参丸出自张仲景（金匮要略）。当代药理学研究证明，当归中多糖和阿魏酸能够抑制肿瘤增殖，是诱导肿瘤细胞凋亡或分化的天然诱导剂。贝母皂苷具有抗肿瘤作用。朱晓伟等研究表明:苦参碱和氧化苦参碱作用人胃癌SGC-7901细胞后，可增加G0/G1期细胞所占百分比，降低S期和G2/M期细胞百分比。李伏娥等证明苦参碱对人胃癌(SGC-7901)细胞具有明显抑制作用，诱导细胞凋亡并抑制端粒酶活性。本方中当归为君药，养血和血，行气活血，补虚扶正，加强机体攻癌毒的能力补虚扶正;贝母化痰散结，苦参清热利湿解毒，共为臣药;当归贝母苦参丸作为抗肿瘤的方剂，为古方新用，针对肿瘤的病因病机特点，全方药物切中肿瘤的病因病机，有活血补血，化痰散结，清热解毒祛湿之效，本实验研究结果显示当归贝母苦参丸通过对COX-2，Bax，PTEN因子影响来抑制胃癌细胞的生长，但关于当归贝母苦参丸抑制胃癌细胞增殖的机制仍需进一步研究。药学论文