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1、食品中菌落总数的测定方法操作规程一、适用范围本标准规定了食品中菌落总数(Aerobic plate count)的测定方法。 本标准适用于食品中菌落总数的测定,实验采样方案按照GB4789.1-2016。二、编写依据GB4789.2-2016食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数的测定三、术语和定义菌落总数:食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。四、内容1.设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:1 .1恒温培养箱:361,3011.2 冰箱:251.3 恒温水浴箱:4611.4 天平:
2、感量为0.1g1.5 均质器1.6 振荡器1.7 无菌吸管:1 mL(具0.01 mL 刻度)、10 mL(具0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头1.8 无菌锥形瓶:容量250 mL、500 mL1.9 无菌培养皿:直径90 mm1.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸1.11 放大镜或/和菌落计数器2.培养基和试剂:2.1 平板计数琼脂培养基:同GB 4789.15项下制法。 2.2 磷酸盐缓冲液:同GB 4789.15项下制法。 2.3 无菌生理盐水:同GB 4789.15项下制法。 2.4 30%碳酸钠溶液。2.5 1mol/L HCl。3.样品的稀释3.1固体和半固体样品:称
3、取25 g样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min10000 r/min均质1 min2 min,或放入盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1 min2 min,制成1:10的样品匀液。3.2液体样品:以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。3.3用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1 mL,沿管壁缓慢注于盛有9 mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其
4、混合均匀,制成1:100的样品匀液。3.4按4.3操作程序,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1 mL无菌吸管或吸头。3.5根据对样品污染状况的估计,选择2个3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1 mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。3.6及时将15 mL20 mL冷却至46 的平板计数琼脂培养基(可放置于46 1 恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。4.培养4.1待琼脂凝固后,将平板翻转,36 1 培养48 h2 h。水产品30 1 培养72 h
5、3 h。4.2 如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4 mL),凝固后翻转平板,按5.1条件进行培养。5.菌落计数5.1选取菌落数在30 CFU300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数,大于300 CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。5.2其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。5.3当平板上出现菌落
6、间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。6.结果与报告6.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。6.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按公式(1)计算:N=C/(n1+0.1n2)d.(1)式中:N样品中菌落数;C平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和;n1第一稀释度(低稀释倍数)平板个数;n2第二稀释度(高稀释倍数)平板个数;6.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以
7、最高稀释倍数计算。6.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30 CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.5若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。6.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU300 CFU之间,其中一部分小于30 CFU或大于300CFU时,则以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。6.7 菌落总数的报告(1)菌落数小于100 CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。(2)落数大于或等于100 CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指
8、数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。(3)若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。(4)若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。(5) 称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。7.记录信息 应严格按照“食品微生物菌落总数测定原始记录”的要求进行填写,包括检品编号、检品名称、批号、检验依据、判定依据、样品性状、抽样来源、抽样时间和试验时间等,以及培养基的批号、培养温度和时间、试验数据、试验结论和检验人员标识等,如无需填写,须划“/”去掉。8 报告格式 结果:称重取样以 CFU/g 为单位报告,体积取样以 CFU/mL 为单位报告。例如“2.5104CFUg”或“2.5104 CFU/mL”。