我国弓形虫病研究进展.docx

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1、我国弓形虫病研究进展 摘 要：近年来，由于生命科学技术的广泛应用，使弓形虫及弓形虫病的探讨不断深化。本文将从弓形虫感染状况、致病、诊断及防治等方面探讨的进展作一综述。 关键词：弓形虫病；感染；致病；诊断；防治 中图分类号：R541.3 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1016-1959.2022.02.12 文章编号：1016-195902-0033-04 Abstract：In recent years，due to the wide application of life science and technology，the research on Toxoplasm

2、a gondii and toxoplasmosis has been deepened.This article reviews the progress of Toxoplasma gondii infection，pathogenesis，diagnosis and prevention and treatment. Key words：Toxoplasmosis；Infection；Pathogenicity；Diagnosis；Prevention and treatment 弓形虫病又称弓形体病，是由刚地弓形虫所引起的人畜共患病。它广泛寄生在人和动物的有核细胞内。在人体多为隐性感染

3、；发病者临床表现困难，其症状和体征又缺乏特异性，易造成误诊，主要侵扰眼、脑、心、肝、淋巴结等。弓形虫是孕期宫内感染导致胚胎畸形的重要病原体之一。 1 弓形虫感染状况 1955年，于恩庶首先从兔及猫体分别出弓形虫，1962年谢天华报道了我国第一例弓形虫病。弓形虫病是动物源性疾病，是一种人兽共患寄生虫病，世界五大洲各地区均有分布1。 我国其次次人体重要寄生虫现状调查显示，弓形虫血清IgG阳性率为7.88%2。各地区和城市略有不同。沧州市人群血清抗体阳性率为6.3%3，1924岁和4960岁年龄段的人群感染率高，居住农村、文化程度低、务农者的阳性率高；云南不同生态环境地区弓形虫感染状况显示，高危职业

4、人群血清抗体阳性率：宜宾县1.59%，芒市5.88%，总阳性率3.51%；疑似病例血清抗体阳性率：宜宾县9.68%，芒市16.67%，总阳性率13.11%4；内蒙古自治区平均血清抗体阳性率为6.39%5，地区分布特点以半荒漠草原景观带为最高，血清抗体阳性率以75岁以上人群为最高，养猫时间10年血清学阳性率明显高于少于10年人群，常常生食牛乳人群显著高于不生食牛乳人群；通辽地区育龄妇女弓形虫血清阳性率15.12%6，26例阳性者流产和畸胎等异样妊娠发生率高于阴性者，妇科疾病如子宫肌瘤、宫外孕、盆腔炎、卵巢肿瘤的患病率也高于阴性者；十堰地区育龄妇女弓形虫血清抗体或循环抗原阳性率为13%，阳性组中流

5、产、死胎、畸形发生率高于阴性组，妇科疾病如子宫肌瘤、宫外孕、盆腔炎、不孕症的患病率也显著高于阴性组，饲养宠物者高于不饲养宠物者7。 各地报道人群血清抗体阳性率各不相同，弓形虫易感对象与文化程度、不良饮食习惯及从事屠宰、动物饲养、养猫狗宠物者有亲密关系，而且，弓形虫病感染率有不断上升的趋势8。弓形虫感染与异样妊娠、不孕症及某些妇科疾病亲密相关。因此，全国各医疗机构应加强对弓形虫病的重视，应对不同人群适时进行弓形虫感染的流行病学调查，提高防范意识。 2 弓形虫的致病作用 2.1弓形虫的入侵和毒力因子 弓形虫感染宿主细胞经验粘附、穿入、在宿主细胞内形成纳虫空泡等过程。弓形虫含有3种分泌细胞器，即微线

6、体、棒状体、致密颗粒。当弓形虫与宿主细胞接触，微线体蛋白最先被释放，识别并粘附于宿主细胞受体上，随后释放棒状体蛋白，参加纳虫空泡的形成，最终分泌致密颗粒蛋白进入纳虫空泡，参加纳虫空泡膜的修饰9。虫体在纳虫空泡内发育繁殖。微线体蛋白、棒状体蛋白、致密颗粒蛋白均不是单一成分，而是由若干种成分组成，它们相互协同，共同发挥作用。 此外，弓形虫表面抗原蛋白SAG1、SAG2、SAG3也与虫体入侵和毒力相关。其中，SAG1是虫体主要的配体，与宿主细胞的葡萄糖胺相结合；与SAG2协同影响虫体的定向。SAG2和SAG3能帮助SAG1，在弓形虫感染的早期，使虫体快速入侵宿主细胞9。 2.2弓形虫在宿主体内慢性感

7、染 弓形虫侵入宿主细胞后，可通过多途径破坏转录通道信号，延迟宿主的免疫应答，促进弓形虫的感染和转移10。弓形虫的毒力可能与其分泌的一种类似穿孔素的蛋白有关，该蛋白可在纳虫空泡膜和宿主细胞膜上形成小孔，破坏宿主细胞并促进虫体转移。 感染弓形虫后，机体的T淋巴细胞和其他白细胞被诱导凋亡，从而抑制宿主的抗弓形蟲免疫应答。弓形虫通过Fas依靠途径和Fas非依靠途径诱导细胞凋亡。动物试验表明，感染弓形虫小鼠的小肠派依尔淋巴结中的T细胞、B细胞的Fas表达水平增高，眼组织细胞的Fas表达水平也增高，提示Fas及其配体的相互作用在弓形虫诱导宿主细胞凋亡中起到重要的作用。体外试验表明，弓形虫感染的人树突细胞可

8、以通过Fas非依靠途径诱导T细胞凋亡11。淋巴细胞的大量凋亡利于弓形虫大量增殖，导致弓形虫在不同组织中的广泛存在，可感染除红细胞外的任何有核细胞。 相反，弓形虫为在宿主细胞内长期生存、繁殖，会阻挡被感染细胞及旁边未感染细胞凋亡。可通过干脆干扰细胞内凋亡信号传递的干脆机制，以及通过细胞因子等间接作用机制而抑制其凋亡11。 对于弓形虫隐性感染对人类的危害，始终以来没有引起重视，弓形虫以包囊形式可长期存在于脑组织中，可能是精神分裂症的发病因素之一，国外资料显示，精神病患者弓形虫的感染率一般在40%50%，国内报道，精神病患者的弓形虫感染率为8%22.4%12。 2.3免疫细胞在弓形虫感染中的作用 弓

9、形虫感染机体后，机体的免疫状态显著影响其结局，尤其细胞免疫与疾病的转归亲密相关。参加细胞免疫的免疫细胞主要有巨噬细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞等。 2.3.1单核巨噬细胞 探讨表明，切断召集炎性单核细胞的信号，将导致弓形虫大量增殖10。激活的巨噬细胞可产生活性氧和活性氮中介物，并能杀伤弓形虫速殖子。IFN-可激活巨噬细胞达到歼灭弓形虫的作用。新发觉的鸟苷三磷酸酶P47家族，可调整宿主体内IFN-，反抗弓形虫感染。当其积聚在弓形虫纳虫空泡中后，纳虫空泡膜裂开，弓形虫破出，可被歼灭。巨噬细胞表面具有多种模式识别受体，可与弓形虫表面配体结合，激活巨噬细胞，也可与相应的细胞因子受体结合，进而激活巨噬细

10、胞反抗弓形虫的感染。 2.3.2 NK细胞 在弓形虫感染早期，NK细胞能够非特异杀伤被感染的细胞。巨噬细胞和DCs分泌的IL-18可以增加NK细胞对靶细胞的杀伤作用，当IL-18和IL-15联合作用时，可促使NK细胞增殖13。NK细胞可移行至感染部位，分泌IFN-，激活巨噬细胞，并促使巨噬细胞表达MHC-II类分子14。进一步促进巨噬细胞的吞噬功能及提高抗原提呈功能。 2.3.3 T淋巴细胞 按其CD分子表型和功能的不同，T细胞分为CD4+T细胞和CD8+T细胞，两者对于宿主反抗弓形虫感染较为重要。CD4+T细胞依据活化后分泌细胞因子的不同分为Th1和Th2细胞。正常状况下，机体的Th1/Th

11、2细胞处于动态平衡。试验感染弓形虫的BALB/c小鼠，在急性期以Th1细胞应答为主，诱导炎症反应的发生以限制和清除弓形虫的感染；急性期后以Th2细胞应答为主， Th2细胞对Th1细胞应答的抑制减轻了Th1应答介导的免疫病理损伤，有助于小鼠度过急性感染期15。CD4+T细胞被活化后，还通过分泌IL-2，促使CD8+T细胞活化与增殖。CD8+T细胞被活化后，通过分泌IFN-及对弓形虫感染细胞的胞溶作用清除弓形虫10。 核苷酸结合寡聚化结构域蛋白是新发觉的细胞质型模式识别受体，主要识别细胞质中的虫体成分，其中Nod2较为重要。小鼠缺损Nod2后，清除体内弓形虫的实力降低，IFN-产生水平降低9。 调

12、整性T细胞，以发挥免疫抑制作用为主。探讨发觉，在弓形虫感染过程中，机体会产生短暂的免疫抑制。赵俊桃等16用弓形虫成囊株感染小鼠，视察T细胞亚群在感染后不同时期的改变，结果显示，调整性T细胞的高峰期是急性感染后Th1的短暂免疫下调期。提示感染弓形虫后机体没有发生过强免疫应答、没有出现严峻病理损伤的缘由可能是调整性T细胞参加了免疫抑制。此时，抗感染免疫与弓形虫感染处于平衡状态，小鼠进入弓形虫慢性感染状态。 目前对于弓形虫侵入宿主细胞过程的探讨，以及弓形虫致病机理的探讨尚未明确。有些是在动物体内探讨，在人类弓形虫致病机制中是否有类似的作用，有待证明；各种免疫细胞及其分泌的细胞因子虽具有抗弓形虫的免疫

13、反应，但宿主也不能彻底清除弓形虫的感染等很多机制有待进一步探讨。 3 弓形虫病诊断 3.1病原学诊断 3.1.1涂片染色法17 取急性期患者的腹水、羊水、脑脊液、骨髓或血液等，离心后取沉淀物作涂片，或采纳活组织穿刺物涂片，经吉姆萨染色，镜检弓形虫滋养体。该法简便，但阳性率不高。随后在此基础上建立的免疫酶染色试验，是以玻片上的甲醛固定的弓形虫作为抗原，与血清样本中抗体反应，加入酶标二抗及底物，以虫体四周出现完整的淡黄色作为阳性标准。该法简洁、敏感、特异、快速，可在现场运用18。运用弓形虫抗血清的过氧化物免疫酶标记法能够检测到AIDS患者中枢神经系统中存在的弓形虫，对接近炎症灶的组织包囊检查可进行

14、急性感染和潜藏感染的诊断19。 3.1.2动物接种分别法或细胞培育法 将待检样本接种于小鼠腹腔，1周后剖杀，取其腹腔液镜检滋养体，待检样本也可接种于离体培育的单层有核细胞17。该方法难以与自然感染区分，自然界中存在的弱毒株感染可导致假阴性。 3.2免疫学诊断 3.2.1弓形虫染色试验 为经典的血清学方法，具有良好的特异性、敏感性和重复性。感染后数天即可出现抗体，可用于早期诊断20。但由于需用活虫做试验，临床实际很难获得，故此方法应用很少。 3.2.2间接血凝试验 感染弓形虫后一个月左右IHA出现阳性，血清抗体效价可推断其感染状态。1：64为既往感染，1：256为近期感染，1：1024为现症患者

15、。该法操作简便，敏感性高20。 3.2.3间接荧光抗体试验 IFAT法既可检测血清中的抗体，也可检测组织内的虫体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。但若有类风湿因子、抗核抗体可出现假阳性，结果判定易带有主观性。 3.2.4酶联免疫吸附试验 ELISA是当前诊断弓形虫感染应用最广的技术。可检测弓形虫抗体及Cag抗原。近年来，应用重组抗原作为诊断抗原诊断弓形虫病，具有较高的敏感性19。ELISA又衍生出多种改进的方法，如斑点酶联-免疫吸附試验、桥联法、PCR-ELISA法、SPA-ELISA等，具有较高的敏感性与特异性。 3.3核酸检测 3.3.1核酸探针技术 本方法可干脆检测出寄生虫基因，与病原

16、学诊断效果相当。也用于寄生虫虫种鉴定、种群分类等方面。 3.3.2 PCR及其衍生技术 已广泛应用于弓形虫病诊断。包括一般PCR技术、PCR-RFLP技术、原位PCR、套式PCR等多种技术与方法。具有快速、灵敏、特异、操作简便等优点。 弓形虫病检测方法有许多，病原学检测仍是确诊弓形虫病最牢靠的方法，但其检出率低。血清学诊断可用于现场检测，可检测血清中抗体及循环抗原，有些方法可检测动物的潜藏感染、现症感染乃至先天感染，但是，血清学诊断不适用于免疫抑制患者，有些易出现假阳性，有些方法还不太成熟。现代PCR方法，可检测病原体的核酸，精确牢靠，对免疫系统低下或丢失的患者是一个很好的诊断方法，弥补了血清

17、学诊断的不足，但价格昂贵。因此，找寻快速、精确、经济的诊断试剂盒已燃眉之急。 4 弓形虫病的防治 目前，弓形虫病以西医治疗为主。治疗药物有螺旋霉素、乙胺嘧啶、磺胺等。这些药物仅能杀灭部分滋养体，减弱繁殖、改善症状。不能阻挡包囊形成，更不能使包囊内的虫体死亡。感染动物的试验治疗表明，绝大部分抗生素、化学制剂对弓形虫感染的治疗无效21。 长期以来，很多学者致力于弓形虫病中药治疗的探讨。王秀琴等21通过小白鼠人工感染弓形虫病的方法，从12种中药及配方中筛选了3种平安有效的药物或配方，对滋养体杀灭率达96.95%101%。张步彩等22评价了蟾酥、桦褐孔菌、黄皮叶、垂花香薷、白牛胆等5种中药对急性感染弓

18、形虫小鼠的治疗效果，并与磺胺间甲氧嘧啶钠的治疗结果相比较，结果显示，蟾酥、桦褐孔菌与磺胺间甲氧嘧啶钠组的小鼠平均存活时间、腹腔液中虫体数和血清SOD活性相近。吕江等23自拟复方中药对人工感染弓形虫的小鼠进行复方中药的筛选试验。结果表明，自拟方剂经口灌服能明显削减感染小鼠腹水中虫体数量，能明显抑制弓形虫的繁殖，而对正常小鼠无明显的毒害作用。此外，细胞因子在弓形虫病治疗中也有肯定的作用。 对于弓形虫感染，至今尚未研发出行之有效的疫苗。因此，弓形虫病防控的关键是预防，然而，大多人群及医疗机构对本病不够相识或相识不足，导致其发病率呈上升趋势。随着科学技术的发展、人们对于弓形虫病探讨的深化，信任在不久的

19、将来，有关弓形虫病的致病机理、诊断、治疗会有较大的突破。 特殊感谢吕昌龙老师对本次探讨的大力支持及对于论文写作的指导。 参考文献： 1刘侠，阚松鹤，林青.弓形虫病探讨进展J.动物医学进展，2022，36：101-105. 2兰炜明，戴坤教，曾小军，等.临床疑似弓形虫病患者血清流行病学调查J.2022，29：473-473. 3许郑林，孙凤娥，胡秀敏，等.沧州市人群弓形虫感染血清流行病学调查J.环境与健康， 2022，26：151-152. 4王跃兵，杨向东，杨国荣，等.云南不同生态环境地区人群弓形虫病现况探讨J.好用预防医学，2022，22：918-910. 5霍守梁，宋壮志，张斌，等，内蒙古

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