胃粘膜加工与胃粘膜制剂 PPT课件.ppt

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1、一、胃蛋白酶一、胃蛋白酶(pepsin)v胃蛋白酶是动物胃液中最胃蛋白酶是动物胃液中最主要的蛋白酶。主要的蛋白酶。它以它以酶原酶原的形式存在于胃粘膜的主的形式存在于胃粘膜的主细胞中，在基部的粘膜中细胞中，在基部的粘膜中含量最丰富。含量最丰富。药用胃蛋白酶是胃液中多药用胃蛋白酶是胃液中多种蛋白水解酶的混合物，种蛋白水解酶的混合物，含有胃蛋白酶、组织蛋白含有胃蛋白酶、组织蛋白酶和胶原蛋白酶等。酶和胶原蛋白酶等。本品为助消化药，用于本品为助消化药，用于缺乏胃蛋白酶或病后消缺乏胃蛋白酶或病后消化机能减退引起的消化化机能减退引起的消化不良症。不良症。(一一)化学组成和性质化学组成和性质 药用胃蛋白酶为粗

2、酶制剂，外观为淡黄色粉末，具有肉药用胃蛋白酶为粗酶制剂，外观为淡黄色粉末，具有肉类特殊的气味及微酸味，吸湿性强，易溶于水，水溶液类特殊的气味及微酸味，吸湿性强，易溶于水，水溶液呈酸性反应，难溶于乙醇、氯仿或乙醚等有机溶剂。呈酸性反应，难溶于乙醇、氯仿或乙醚等有机溶剂。结晶胃蛋白酶呈针状或板状，经电泳可分出结晶胃蛋白酶呈针状或板状，经电泳可分出4个组分。个组分。pI为为pHl.0，最适，最适pHl.52.0。可溶于。可溶于70乙醇和乙醇和pH4的的20乙醇中。乙醇中。胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物，如胶原蛋白、胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物，如胶原蛋白、粘蛋白、精蛋白等，尤其对两个相邻芳

3、香族氨基酸构成粘蛋白、精蛋白等，尤其对两个相邻芳香族氨基酸构成的肽键最为敏感。的肽键最为敏感。药用胃蛋白酶为粗酶制剂，外观为淡黄色粉末，具有肉药用胃蛋白酶为粗酶制剂，外观为淡黄色粉末，具有肉类特殊的气味及微酸味，吸湿性强，易溶于水，水溶液类特殊的气味及微酸味，吸湿性强，易溶于水，水溶液呈酸性反应，难溶于乙醇、氯仿或乙醚等有机溶剂。呈酸性反应，难溶于乙醇、氯仿或乙醚等有机溶剂。结晶胃蛋白酶呈针状或板状，经电泳可分出结晶胃蛋白酶呈针状或板状，经电泳可分出4个组分。个组分。pI为为pHl.0，最适，最适pHl.52.0。可溶于。可溶于70乙醇和乙醇和pH4的的20乙醇中。乙醇中。胃蛋白酶能水解大多数

4、天然蛋白质底物，如胶原蛋白、胃蛋白酶能水解大多数天然蛋白质底物，如胶原蛋白、粘蛋白、精蛋白等，尤其对两个相邻芳香族氨基酸构成粘蛋白、精蛋白等，尤其对两个相邻芳香族氨基酸构成的肽键最为敏感。的肽键最为敏感。(二二)加工工艺加工工艺v单产胃蛋白酶工艺过程单产胃蛋白酶工艺过程v(1)(1)激活提取激活提取 水水100100公斤及化学纯盐酸公斤及化学纯盐酸3600360040004000毫升，搅匀，加热至毫升，搅匀，加热至5050时，加时，加入入200200公斤胃粘膜，保持在公斤胃粘膜，保持在45454848消化消化3 34 4小时，用纱布过滤除去未消小时，用纱布过滤除去未消化的组织蛋白。化的组织蛋白

5、。v(2)(2)脱脂、分层脱脂、分层 滤液降温至滤液降温至3030以下，加入以下，加入15152020氯仿或乙醚，搅匀后转入沉淀氯仿或乙醚，搅匀后转入沉淀脱脂器内，静置脱脂器内，静置24244848小时。小时。v(3)(3)干燥干燥 分取脱脂后的酶液，在分取脱脂后的酶液，在4040以下干燥（真空浓缩、热风干燥、离心喷以下干燥（真空浓缩、热风干燥、离心喷雾干燥），干品球磨至雾干燥），干品球磨至8080100100目细粉，即为胃蛋白酶原粉。目细粉，即为胃蛋白酶原粉。胃蛋白酶原在体内受盐酸和自胃蛋白酶原在体内受盐酸和自身的催化后激活成胃蛋白酶。身的催化后激活成胃蛋白酶。二、胃膜素二、胃膜素v胃膜素是

6、从猪胃粘膜中提取的一种以粘蛋白为主要成分的胃膜素是从猪胃粘膜中提取的一种以粘蛋白为主要成分的药物。药物。v从胃粘液中分离出来的一种粘蛋白分子量高达从胃粘液中分离出来的一种粘蛋白分子量高达2 210106 6，从，从猪十二指肠中分离出一种，其分子量为猪十二指肠中分离出一种，其分子量为1.51.510106 6。v胃膜素遇热不凝固，在溶液中能被胃膜素遇热不凝固，在溶液中能被6060以上乙醇或丙酮沉以上乙醇或丙酮沉淀。胃膜素与酸较长时间作用，能分解成各种蛋白质和淀。胃膜素与酸较长时间作用，能分解成各种蛋白质和多糖组分。多糖组分。v胃膜素的等电点为胃膜素的等电点为3.33.35 5。临床应用：临床应用

7、：胃膜素中的粘蛋白能抵抗胃胃膜素中的粘蛋白能抵抗胃蛋白酶的消化和吸附胃酸，蛋白酶的消化和吸附胃酸，胃膜素对胃和十二指肠溃疡胃膜素对胃和十二指肠溃疡灶面能起生理上的保护和润灶面能起生理上的保护和润滑作用，临床上用于胃及十滑作用，临床上用于胃及十二指肠溃疡，效果较好。二指肠溃疡，效果较好。零售价：零售价：36.6036.60元元 用于胃及十二用于胃及十二指肠溃疡，胃疼、慢性胃炎、胃指肠溃疡，胃疼、慢性胃炎、胃酸过多引起的胃烧灼感。保护溃酸过多引起的胃烧灼感。保护溃疡、修复溃疡、纯生化制剂。疡、修复溃疡、纯生化制剂。生产工艺：生产工艺：v目前生产胃膜素的工艺有两种：目前生产胃膜素的工艺有两种：v一法

8、是取胃粘膜的盐酸消化液，以乙醇沉淀分一法是取胃粘膜的盐酸消化液，以乙醇沉淀分离而制得，称单产工艺；离而制得，称单产工艺；v另外方法是将胃粘膜的盐酸消化液经氯仿分层另外方法是将胃粘膜的盐酸消化液经氯仿分层后，取上清液，用丙酮后，取上清液，用丙酮(或乙醇或乙醇)分级沉淀，制分级沉淀，制备胃膜素和胃蛋白酶，称联产工艺。备胃膜素和胃蛋白酶，称联产工艺。1.1.单产工艺路线单产工艺路线4 4小时小时 pH4.05.0 6570 2.2.联产工艺联产工艺比重约为比重约为0.91 0.91 联产工艺的原理联产工艺的原理(principle)：v根据胃蛋白酶和胃膜素两种蛋白质在有机根据胃蛋白酶和胃膜素两种蛋白

9、质在有机溶剂中的溶解性不同，利用有机溶剂分步溶剂中的溶解性不同，利用有机溶剂分步沉淀来进行分离纯化的。沉淀来进行分离纯化的。讨论：讨论：（1 1）原料的选择与处理）原料的选择与处理 一般以剥取直径一般以剥取直径1010厘米，深厘米，深2.32.3毫米的胃基底毫米的胃基底部粘膜最适宜，每只猪胃平均剥取粘膜约部粘膜最适宜，每只猪胃平均剥取粘膜约100100克。克。目的以提取胃膜素为主，则可采取全胃粘膜，目的以提取胃膜素为主，则可采取全胃粘膜，以增加原料供应。以增加原料供应。用自然解冻法可提高收率。用自然解冻法可提高收率。v（2 2）激活条件优选）激活条件优选 对激活条件中加盐酸量、温度及时间三个因

10、素进对激活条件中加盐酸量、温度及时间三个因素进行优选的结果是：每公斤猪胃粘膜加盐酸行优选的结果是：每公斤猪胃粘膜加盐酸19.419.4毫毫升，温度升，温度46464747，消化时间，消化时间2.52.53 3小时；或加小时；或加盐酸盐酸1818毫升，温度毫升，温度46464747，消化，消化2.52.53 3小时，小时，都可以得到较好的活力与收率。都可以得到较好的活力与收率。v(3)(3)胃酶脱脂剂胃酶脱脂剂v常用的脱脂剂有乙醚、氯仿、四氯化碳三种。常用的脱脂剂有乙醚、氯仿、四氯化碳三种。v四氯化碳毒性太大，不宜采用。四氯化碳毒性太大，不宜采用。v乙醚脱脂温度需控制在乙醚脱脂温度需控制在282

11、83030，放置，放置24243030小时，小时，分层清楚。乙醚脱脂的收率也比氯仿高。分层清楚。乙醚脱脂的收率也比氯仿高。v氯仿脱脂，沉淀放置时间比乙醚长，有时长达三天。氯仿脱脂，沉淀放置时间比乙醚长，有时长达三天。中等毒性，强麻醉性v单产工艺中消化时，有的也加入少量氯仿防腐，联产单产工艺中消化时，有的也加入少量氯仿防腐，联产工艺用较多氯仿进行处理并分层，使杂蛋白沉淀析出。工艺用较多氯仿进行处理并分层，使杂蛋白沉淀析出。v单产工艺收率较高，联产工艺收率较低但纯度较高。单产工艺收率较高，联产工艺收率较低但纯度较高。v影响收率的主要因素之一是丙酮对蛋白质的变性作用。影响收率的主要因素之一是丙酮对蛋

12、白质的变性作用。v加入丙酮时的操作，直接关联两个产品的分离程度。加入丙酮时的操作，直接关联两个产品的分离程度。v肝素广泛分布于哺乳动物的组织中，如肠粘膜、肝素广泛分布于哺乳动物的组织中，如肠粘膜、十二指肠、肺、肝、心、胰脏、胎盘、血液等。十二指肠、肺、肝、心、胰脏、胎盘、血液等。肝素肝素(heparin)白色粉末、白色粉末、无臭无味，具有强酸性，无臭无味，具有强酸性，高度带负电荷高度带负电荷 。v19161916年在肝中发现了肝素，但不到年在肝中发现了肝素，但不到19331933年，年，从肺中提取的肝素即开始应用，近年来临床从肺中提取的肝素即开始应用，近年来临床使用的肝素，几乎都来自猪肠粘膜。

13、使用的肝素，几乎都来自猪肠粘膜。这些来自肝、肺和肠的肝素，在化学上和生物上是否为同一物质?什么是肝素?v明确明确“肝素肝素”一词的意义应认为是一族化合物的名称，一词的意义应认为是一族化合物的名称，这些化合物不仅分子量不同，其结构和生物活性也不同。这些化合物不仅分子量不同，其结构和生物活性也不同。v此族物质中有的在抗凝血此族物质中有的在抗凝血，有的在脂蛋白脂肪酶释放，有的在脂蛋白脂肪酶释放方面，或在补体的溶细胞体系方面，或在补体的溶细胞体系(Cytolytic System of(Cytolytic System of Complement)Complement)方面具有占优势的活性。方面具有占

14、优势的活性。v不同肝素组分用以治疗血栓栓塞疾病，降血脂和某些免不同肝素组分用以治疗血栓栓塞疾病，降血脂和某些免疫复合体疾病。可以提取具有不同专一活性的肝素，分疫复合体疾病。可以提取具有不同专一活性的肝素，分别在凝血、脂代谢和免疫学领域内应用于治疗。别在凝血、脂代谢和免疫学领域内应用于治疗。肝素钠浓缩设备肝素钠浓缩设备（膜分离）（膜分离）肝素钠空采血管肝素钠空采血管低分子量肝素钠注射液低分子量肝素钠注射液（一）结构（一）结构(structure)v肝素具有由六糖或八糖重复单位组成的线形链状肝素具有由六糖或八糖重复单位组成的线形链状分子，三硫酸双糖是肝素的主要双糖单位，分子，三硫酸双糖是肝素的主要

15、双糖单位，L-L-艾艾杜糖醛酸是此双糖的糖醛酸。杜糖醛酸是此双糖的糖醛酸。v二硫酸双糖的糖醛酸是二硫酸双糖的糖醛酸是D D葡萄糖醛酸。葡萄糖醛酸。v三硫酸双糖和二硫酸双糖以约三硫酸双糖和二硫酸双糖以约3:13:1的比例交替联结。的比例交替联结。（二）肝素的提取原理（二）肝素的提取原理v肝素的制备，一般包括：肝素的制备，一般包括：肝素肝素-蛋白复合物的提取，肝素蛋白复合物的提取，肝素-蛋白复蛋白复合物的分解和肝素的分级分离三步。合物的分解和肝素的分级分离三步。v1.1.提取提取v采用钠盐的碱性热水或沸水提取。这样的提取物，仍存采用钠盐的碱性热水或沸水提取。这样的提取物，仍存在可溶性肝素在可溶性肝

16、素-蛋白质复合物。蛋白质复合物。v2.2.分解（酶解和盐解）分解（酶解和盐解）v酶解：加蛋白水解酶：胰酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶酶解：加蛋白水解酶：胰酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶v盐解：一般是用碱性食盐水提取，与热变性和凝结剂（明矾、硫酸盐解：一般是用碱性食盐水提取，与热变性和凝结剂（明矾、硫酸铝）等变性措施结合除去蛋白质。铝）等变性措施结合除去蛋白质。v3.3.分级分离分级分离v目前多用强碱阴离子交换剂或长链季铵盐进行分级分离。目前多用强碱阴离子交换剂或长链季铵盐进行分级分离。然后再经乙醇沉淀和氧化剂氧化等步骤，进一步精制。然后再经乙醇沉淀和氧化剂氧化等步骤，进一步精制。除去杂

17、多糖、蛋白除去杂多糖、蛋白质、核酸类物质质、核酸类物质(三三)生产工艺生产工艺（processing technique）v1.1.盐解盐解-离子交换工艺离子交换工艺盐解盐解除去蛋白质、除去蛋白质、多肽、乙酰肝素、多肽、乙酰肝素、透明质酸等透明质酸等沉淀蛋白质、沉淀蛋白质、核酸等杂质核酸等杂质半成品车间半成品车间成品车间成品车间化验室化验室2.2.大孔树脂工艺大孔树脂工艺(四四)肝素钠的精制工艺肝素钠的精制工艺1.H1.H2 2O O2 2脱色法脱色法 将肝素钠溶液（将肝素钠溶液（用用2NaCl水溶液把粗品配成水溶液把粗品配成10肝素钠溶液肝素钠溶液）用）用1:2HCl1:2HCl调调pH1p

18、H12 2迅速过滤。再用氢氧化钠溶液调迅速过滤。再用氢氧化钠溶液调pHpH为为10101212，按按3 3的量加入的量加入3030的过氧化氢的过氧化氢，2525下放下放置置2 2天，并随时校正天，并随时校正pHpH为为10101212。过滤后收集过滤液，。过滤后收集过滤液，用用1:21:2盐酸调滤液盐酸调滤液pHpH为为6 67 7，加入等量的，加入等量的9595乙醇沉淀。乙醇沉淀。次日滤去滤液次日滤去滤液(回收乙醇回收乙醇)，沉淀用丙酮脱水，干燥后得，沉淀用丙酮脱水，干燥后得肝素钠精品。肝素钠精品。2.2.高锰酸钾氧化法高锰酸钾氧化法 在肝素钠溶液在肝素钠溶液(粗品粗品)中，中，加入加入4

19、4高锰酸钾进行氧高锰酸钾进行氧化化，仍可变为结晶有活性的肝素。将肝素钠粗品溶液，仍可变为结晶有活性的肝素。将肝素钠粗品溶液调调pHpH为为7 79 9，并加热至，并加热至8080，高锰酸钾也先加热到，高锰酸钾也先加热到8080在搅拌下加到肝素钠溶液中，保温在搅拌下加到肝素钠溶液中，保温2 25 5小时，加小时，加滑石粉或纤维素粉助滤，收集滤液。滑石粉或纤维素粉助滤，收集滤液。滤液用滤液用1:21:2盐酸调盐酸调pHpH值值6.46.4，加入，加入1 1倍左右的倍左右的9595乙乙醇，遇冷处理沉淀醇，遇冷处理沉淀8 8小时以上，收集沉淀物，然后分别小时以上，收集沉淀物，然后分别用无水乙醇和丙酮脱

20、水，再干燥即得肝素钠精品。用无水乙醇和丙酮脱水，再干燥即得肝素钠精品。(五五)说明与讨论说明与讨论 1.1.根据目前国内外的情况，肝素的生产工艺，根据目前国内外的情况，肝素的生产工艺，以离子交换树脂法为好。以离子交换树脂法为好。2.2.动态吸附和洗脱有利于提高收率和效价。动态吸附和洗脱有利于提高收率和效价。3.3.掌握好洗脱方法和乙醇浓度是提高效价的关键。掌握好洗脱方法和乙醇浓度是提高效价的关键。4.4.杂质沉淀都应分离除净，这与提高效价关系也很大。杂质沉淀都应分离除净，这与提高效价关系也很大。以过氧化氢的氧化剂，氧化较为温和，以过氧化氢的氧化剂，氧化较为温和，且不增添杂质，两者配合使用结果较

21、好。且不增添杂质，两者配合使用结果较好。5.5.氧化法精制氧化法精制以高锰酸钾为氧化剂，氧化能力较强，但以高锰酸钾为氧化剂，氧化能力较强，但可能使产品含钾量偏高并影响收率；可能使产品含钾量偏高并影响收率；（六）临床应用（六）临床应用v肝素为抗凝血药，能阻止血液的凝结过程，用于防治肝素为抗凝血药，能阻止血液的凝结过程，用于防治血栓的形成。血栓的形成。v在临床上肝素广泛应用于防治血栓栓塞性疾病、弥漫在临床上肝素广泛应用于防治血栓栓塞性疾病、弥漫性血管内凝血的早期治疗及体外抗凝。性血管内凝血的早期治疗及体外抗凝。v肝素的主要不良反应是易引起自发性出血，表现为各肝素的主要不良反应是易引起自发性出血，表

22、现为各种黏膜出血、关节腔积血和伤口出血等。种黏膜出血、关节腔积血和伤口出血等。v肝素的特效解毒剂：鱼精蛋白肝素的特效解毒剂：鱼精蛋白 v目前在全球最大的标准注射级肝素原料药生产供应商目前在全球最大的标准注射级肝素原料药生产供应商是是深圳海普瑞药业有限公司深圳海普瑞药业有限公司。四、盐渍肠衣的加工四、盐渍肠衣的加工(sausage casing)v小肠分层结构：管壁由粘膜，粘膜下层，肌层小肠分层结构：管壁由粘膜，粘膜下层，肌层和浆膜构成。和浆膜构成。其结构特点是管壁有环形皱襞，其结构特点是管壁有环形皱襞，粘膜有许多绒毛，绒毛和肠腺与小肠的消化和粘膜有许多绒毛，绒毛和肠腺与小肠的消化和吸收功能关系

23、密切。吸收功能关系密切。小肠是食物消化吸收的主要场所，盘曲于腹腔小肠是食物消化吸收的主要场所，盘曲于腹腔内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、内，上连胃幽门，下接盲肠，分为十二指肠、空肠和回肠三部分。空肠和回肠三部分。（一）半成品加工（一）半成品加工v1.1.取肠去油取肠去油v2.2.排除小肠内容物排除小肠内容物v3.3.浸泡浸泡：利用微生物的发酵和组织自身的降解，：利用微生物的发酵和组织自身的降解，使肠壁组织适当分离，方便刮离。一般夏天使肠壁组织适当分离，方便刮离。一般夏天2 26h6h，冬天，冬天121224h24h。v4.4.刮肠刮肠：小肠呈薄而透明的衣膜，外无筋络，：小肠呈薄而透明的

24、衣膜，外无筋络，内无杂质为止。认真检查肠衣有无破洞，薄皮、内无杂质为止。认真检查肠衣有无破洞，薄皮、软砂眼，批头、肥头等。软砂眼，批头、肥头等。v5.5.配量尺码配量尺码v将刮制好的肠衣对着量码尺进行配量尺码将刮制好的肠衣对着量码尺进行配量尺码（每（每lOOmlOOm配成一把，每把最多不超过配成一把，每把最多不超过1414节，节，节数以少为好，最短的不得短于节数以少为好，最短的不得短于lmlm）。扎把。）。扎把。v6.6.盐腌：盐腌：每把肠衣的用盐量为每把肠衣的用盐量为0.70.70.9kg0.9kg。可以使用一般食用。可以使用一般食用盐，但不得含有硝酸盐。一次用盐，但不得含有硝酸盐。一次用足

25、盐，盐过少或腌不均，都会使足盐，盐过少或腌不均，都会使肠衣变质，盐过多也会产生盐蚀肠衣变质，盐过多也会产生盐蚀和走色和走色(黄色黄色)。v7.7.贮藏：贮藏：腌好后的肠衣，即为半腌好后的肠衣，即为半成品成品(光肠光肠)。可以贮藏在缸内或。可以贮藏在缸内或者桶内。者桶内。（二）成品加工（二）成品加工 1.1.浸漂拆把：浸漂拆把：将半成品肠衣放入清水中浸泡、将半成品肠衣放入清水中浸泡、拆把、洗涤、反复换水。漂至肠衣散开、无血拆把、洗涤、反复换水。漂至肠衣散开、无血色、洁白即可。色、洁白即可。2.2.灌水分路：灌水分路：肠衣抄水后，两手紧握肠衣，双肠衣抄水后，两手紧握肠衣，双手持肠距离手持肠距离30

26、3040cm40cm，中间依肠自然弯曲成弓，中间依肠自然弯曲成弓形，对准分路卡，测量肠衣口径的大小，满卡形，对准分路卡，测量肠衣口径的大小，满卡而不碰卡为本路肠衣。分路时也要检查肠衣有而不碰卡为本路肠衣。分路时也要检查肠衣有无破伤、漏洞等。无破伤、漏洞等。猪肠衣分路标准路分路分1 12 23 34 45 56 67 7口径口径（mmmm）2424262626262828282830303030323232323434343436363636以上以上v3.3.配码：配码：将同一路的肠衣，在配码台上进行量码和搭将同一路的肠衣，在配码台上进行量码和搭配。配。v配把要求：小把每把两根，每根配把要求：小

27、把每把两根，每根12.5m12.5m，每根不超过三，每根不超过三节节(三段三段)，每节不短于，每节不短于1m1m。大把要求每把长。大把要求每把长91.5m91.5m，节，节头不超过头不超过1818节，每节不短于节，每节不短于1.37m1.37m。v4.4.盐腌：盐腌：每大把肠衣用精盐每大把肠衣用精盐1kg1kg。腌制时将肠衣的结折。腌制时将肠衣的结折散，然后均匀上盐，再重新打好把结，散，然后均匀上盐，再重新打好把结，v5.5.扎把：扎把：将肠衣从筛内取出，一根根理开，去其经衣，将肠衣从筛内取出，一根根理开，去其经衣，然后扎成大把或小把。然后扎成大把或小把。v6.6.装桶包装：装桶包装：每桶每桶150150把，装足后注入清洁热把，装足后注入清洁热盐卤盐卤(24Be)(24Be)。最后加盖密封，并注明肠衣种。最后加盖密封，并注明肠衣种类、口径、把数、长度、生产日期等。类、口径、把数、长度、生产日期等。v7.7.贮藏：贮藏：肠衣装在木桶内，木桶横放贮藏，每肠衣装在木桶内，木桶横放贮藏，每周滚动一次，使桶内卤水活动，防止肠衣变质。周滚动一次，使桶内卤水活动，防止肠衣变质。温度要求在温度要求在0 01010，相对湿度，相对湿度85859090。保定恒通肠衣有限公司保定恒通肠衣有限公司