WatersevoTQS液相色谱质谱操作.docx

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1、文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-117第 1 页 共 6 页Waters Xevo TQ-S 液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南1. 适用范围：本使用标准适用于有机室所备有的 Waters Xevo TQ-S 液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。2. 仪器设备的主要技术指标：1) 梯度性能：保存时间标准偏差SD0.047min。2) ESI 正离子灵敏度和周密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/l指标要求：平均信噪比S/N3000:1；平均峰面积60000；峰面积相对标准偏差%RS

2、D3.0%；保存时间标准偏差SD0.047min测试结果：信噪比S/N:4500psi；峰面积：120000；峰面积相对标准偏差%RSD：2.5%；保存时间标准偏差SD：0.00min，均符合指标要求。3) ESI 负离子灵敏度和周密度：测试样品：氯霉素(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/l指标要求：平均信噪比S/N400:1；平均峰面积1000；峰面积相对标准偏差%RSD3.0%；保存时间标准偏差SD0.047min测试结果：信噪比 S/N:520psi；峰面积： 1500；峰面积相对标准偏差%RSD：2.8%；保存时间标准偏差SD：0.00min，均符合指标要求。4)

3、系统周密度TUV/PDA：峰面积相对标准偏差%RSD0.5%；峰高相对标准偏差%RSD0.9%。5) NanoFlow 正离子灵敏度指标要求：峰强m/z =785.81107，测试样品： Glu-Fibrinopeptide B，浓度：100fmol/l测试结果：峰强度m/z =785.8：1.48107；符合指标要求。6) TRIZAIC 正离子模式 MS 说明：测试样品：ADH T19, PHO T33, ENL T4, BSA T59, ENL T43, ADH T17, BSA编写日期李秀琴2009.1审核人批准人文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ

4、-117第 2 页 共 6 页T10, PHO T88指标要求：保存时间标准偏差：0.25%测试结果：ADH T19：标准偏差为 0.02% (23.77min)；PHO T33：标准偏差为 0.03% (25.12min)；ENL T4：标准偏差为0.02% (21.83min)；BSA T59：标准偏差为 0.01% (21.58min)；ENL T43：标准偏差为 0.04% (22.33min)；ADH T17：标准偏差为 0.03% (23.31min)；BSA T10：标准偏差为 0.02% (24.41min)；PHO T88： 标准偏差为 0.03% (24.81min)7)

5、系统性能测试一维系统周密度测试：测试样品 17-OHP。一维保存时间重复性(PDA)指标： 保存时间标准偏差(SD): 1.0s；一维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): 0.5%；一维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD):0.9%；二维系统周密度测试：测试样品 17-OHP。二维保存时间重复性(PDA)指标： 保存时间标准偏差(SD): 1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD): 0.5%；二维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差 (%RSD):0.9%；全部检测方式的回收率指标：90.0%3. 仪器设备的使用环

6、境要求：1) 电力要求：仪器室电源要求相对稳定，电压变化要小，最好配备不连续稳压电源，防止意外停电。2) 工作温度：19-22 度，不要超过 25，保持恒温。3) 相对湿度：50%-70%4. 操作程序：4.1 开机4.1.1 翻开电脑，首先翻开自动进样器电源，再逐一翻开质谱电源和UPLC各电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。4.1.2 选择InstrumentMS Tune进入调谐界面。从调谐界面选择Vacuun文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-117第 3 页 共 6 页pump，翻开真空泵，开头抽真空。机械泵和涡轮分子

7、泵开头工作。4.1.3 质谱上的真空灯开头闪耀，当系统到达真空状态，灯变为绿色，不再闪 烁，同时观看调谐界面DiagnosticsTurbo Speed 泵转速到达100%即可，到达试验状态大约要抽真空4小时留意：真空规，测量工具，无特别状况通常无需翻开，尤其在刚开头抽真空时不要翻开。4.1.4 气源压力设置：氮气：90-100psi。氩气：0.05Mpa，不超过0.1Mpa试验前确认氩气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。4.2 预备UPLC系统4.2.1 预备流淌相：用0.22m的膜过滤缓冲液，全部的缓冲液和超纯水都要配制，超纯水和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐肯定要可挥发的，而且浓度在2m

8、M-5mM之间，不要超过10mM注：假设流淌相含有缓冲盐，用完需使用大比例水相长时间冲洗系统和色谱柱，假设流淌相含有酸，必需为挥发性酸，浓度范围为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂。有机相要使用原装进口的色谱纯。2 SW+Purge弱洗： 10%ACN+90%纯水或者与流淌相梯度初始比例一样用于清洗泵头和密封清洗； Wash强洗：90%ACN+10%纯水；3预备样品：全部样品最好都要用流淌相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22m的膜过滤。4.2.2 初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MS Console，进入系统掌握界面，点

9、击左边Quaternary Solvent Manager选择CONTROLPrime A/B/C/D solvent，选择A/B/C/D输入1min，假设更换了流淌相则输入3min，按start。4.2.3 初始化UPLC自动进样器：UPLC掌握台上选择Sample Manager，选择ControlPrime syrings，灌注进样器和洗针系统。选择Sample syringe and syringes， Number of cycles 一般选1，但在更换洗针溶液后选3。完成后，UPLC自动进样器预备好。4.2.4 灌注完泵和自动进样器后UPLC预备好。4.3 建立一个 Project

10、假设在已有的 Project 下进展试验，此步可以不做。文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-117第 4 页 共 6 页从 Masslynx 主窗口选择 FileProject Wizard，消灭对话窗口，点击 Yes，输入Project Name，选择 Create using existing project as template.点击 Browse 选择project 的模板。4.4 预备质谱假设在已有的 Project 下进展试验，此步可以不做。4.4.1 MS Tune，首先翻开氮气，再开高压红色表示高压已关，绿色表示高压已开。注：肯定要翻开氮

11、气和高压才能开流淌相，关闭流淌相后才能关高压和氮气。4.4.2 点击 ES+ Source. 输入以下各参数: Capillary (kV): 3；Cone (V): 30； DesolvationTemp (): 550；Desolvation(L/hr): 800；Cone (L/Hr): 50；以下参数最好直接使用 intellistart 自动校正仪器质量数时自动生的参数：LM Resolution 1: 3； HM Resolution 1: 15；Ion Energy 1: 0.5；LM Resolution 2: 3；HM Resolution 2: 15； Ion Energy

12、 2: 0.5；Collision: 2。4.5 ESI 调谐调出目标化合物的最正确质谱参数。4.5.1 把调谐液放入 A/B/C 号位注：浓度在 0.1-1ppm 之间，依据实际的灵敏度调整样品浓度。4.5.2 把流淌相的流速设为 0.2ml/min，有机相和水相比例为 1:1。点击 Tune 界面下的 Fluidics，点击 Purge syringe 灌注注射器。设置 Infusion 流速 5uL/min， 依据灵敏度可适当调整。设置 Flow State 模式Infusion:直接进样；Combined: 液相和样品混合进样；LC:液相进样； Waste:废液。4.5.3 选择 Xe

13、vo TQ-S MS Detector 下面的 IntelliStart：Sample Tune and Develop Method 点击 Start，调出界面，输入各参数，系统开头自动优化目标化合物的质谱参数。4.6 建立质谱的 MRM 方法。选择 InstrumentMS Method 进入质谱方法编辑界面。翻开建质谱方法窗口， 再点击 MRM，按调谐结果输入以下参数：离子模式、化合物名称、母离子质量文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-117第 5 页 共 6 页数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和 MRM 运行时间等。4.7 建立

14、UPLC 方法。选择 InstrumentInlet Method 进入 UPLC 方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、自动进样器的方法和紫外检测器的方法等。最终把 UPLC 的方法命名保存。4.8 建立样品运行序列表，运行采集数据。在 Masslynx 主界面上点击 FileNew，建序列表，输入文件名、注释、质谱方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最终把编辑好的序列表命名保存。4.9 处理数据。4.10 关机一般质谱仪局部不需要关机，不用时只要保持在 Standby 状态下即可。但假设长时间不用，或是对仪器进展清洗和修理时需要关机。4.10.1 首先停顿液相色谱流速，假设还需要冲洗色谱柱，可

15、以将液相色谱管路从质谱移开到废液瓶。4.10.2 点击MS Tune进入调谐窗口，点击Standby，关闭高压，让MS进入待机状态时，指示灯会由绿色变成红色。4.10.3 等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。4.10.4 选择OptionVent，这时质谱开头泄真空，待机械泵停顿运行，同时观看调谐界面DiagnosticsTurbo Speed 泵转速为0时即可关闭质谱电源。5. 仪器根本维护与使用留意事项：5.1 仪器室要保持干净、干净、无尘；配套设施布局合理。5.2 开高压之前肯定要先开氮气，关氮气之前肯定要先关高压。5.3 溶剂和流淌相的要求，全部的流淌相都要用0.22m的滤膜过滤，水相要

16、用前配，并不得超过两天。样品必需使用0.22m的滤膜过滤。5.4 ESI 离子化与溶剂亲热相关，在使用某些溶剂和添加物需要留意以下几个方面：三氟乙酸TFA多用于蛋白质和多肽分析，但对 ESI 离子化有抑制效应： 三乙胺TEA在 m/z 102 处有较强的M+H+峰，有可能会抑制某些碱性化合物文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-117第 6 页 共 6 页在正离子 ESI 条件下的离子化，也有可能会增加某些碱性化合物在负离子 ESI 条件下的响应。留意！以下的溶剂添加剂会产生严峻的离子化抑制，建议禁用： 强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸

17、盐等、外表活性剂、离子对试剂。5.5 定期清洗样品锥孔：关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：水：甲酸45:45:10的溶液超声清洗20min，然后分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10 分钟，待晒干后再安装到仪器上。当灵敏度下降时，需要清洗Ion Block、二级锥孔和RF lens。5.6 试验完毕要清洗进样针、进样阀等，用过含酸的流淌相后，色谱柱、离子源都要用甲醇/水冲洗，延长仪器寿命。仪器长时间不用，有管路用纯甲醇灌注。5.7 真空无油泵的密封圈1年更换1次。5.8 系统安全：留意！质谱连接的电脑制止更改网络设置，制止安装防火墙。尽量避开使用U盘等移动存储设备。请使用光盘刻录来完成数据的拷贝。6. 突发状况的处理操作时假设发生电脑死机的状况，一般不需要关闭仪器局部，只需强制关闭电脑主机，重启动电脑，连接工作站，即可恢复正常。假设发生停电事故，一般 UPS 可以保障仪器不会马上断电，但应当依据停电时间长短，实行相应的措施。长时连续电3 小时以上建议停机。