实验室常用培养基的配制方法医学心理学检验医学_医学心理学-基础医学.pdf

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1、 五、实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin（氨卡青霉素）（100 mg/ml）组份浓度 100 mg/ml Ampicillin 配制量 50 ml 配制方法 1.称量 5 g Ampicillin 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml 灭菌水，充分混合溶解后，定容至 50 ml 3.用 0.22 m 过滤膜过滤除菌。4.小份分装（1 ml/份）后,-20T保存。IPTG（异丙基-B-D-硫代半乳糖苷）（24 mg/ml）组份浓度 24 mg/mL IPTG 配制量 50 mL 配制方法 1.称 1.2 g IPTG置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml 灭菌

2、水，充分混合溶解后，定容至 50 ml 3.用 0 22 m 过滤膜过滤除菌。4 小份分装（1 ml，份）后,-20E保存。X-Gal（20 mg/ml）组份浓度 20 mg/ml X-Gal 配制量 50 ml 配制方法 1.称量 I g X-Gal 置于 50 ml 离心管中。2.加入 40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至 50 ml 3.小份分装（1 ml/份）后，-20C避光保存。I D拉差甘 LB 培养基 组份浓度 1%（W/V）Tryptone（胰蛋白胨），0.5%（W/V）Yeast Extract（酵母提取物），1%（W/V）NaCI 配制量 1 L 配制

3、方法 1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Trypt one 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH（约 0.2 m1），调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至 1 L o 5 咼温咼压火菌后，4。C 保存。LB/Amp 培养基 组份浓度 1%(W/V)Trypt one 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二

4、甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存0.5%(W/V)Yeast Extract 1%(W/V)NaCl 0.1 mg/ml Ampicilli n 配制量 1 L 配制方法 1 称取下列试剂，置于 I L烧杯中 Trypt on

5、e 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH(约 0.2 mL)。调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定谷至 1 L o 5.咼温咼压火菌后，冷却至室温。6.加入 1 ml Ampicillin(100 mg/ml)后均匀混合。7.4C保存。TO拉差甘 IB 培养基 1.2%(W/V)Trypt one 2.4%(W/V)Yeast Extract 0.4%(V/V)Glycerol 17mM KH2PO4 72mM K2HPOa 配制量 1.L 配制方法 1.配制磷酸盐缓；中液

6、(0.17 M KH 2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。溶解 2.31 g KH2PC4和 l2.54 g K2HPO4于 90 ml 的去离子水中，搅 拌溶解 后，加去离子水定容至 100 ml，咼温咼压火菌 2.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Trypt one 12 g Yeast Extract 24 g Glycerol 4 m 3.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至 1 L 后，咼温咼压火菌。5.待溶液冷却至 60C以下时，；加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲 液。6.4C保存。TB/Amp 培养基 组份浓度 1

7、.2%(W/V)Trypt one 2.4%(W/V)Yeast Extract 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶

8、解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存0.4%(V/V)Glycerol 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下

9、列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存17 mM KH 2PO4 72 mM K2HPO4 0.1 mg/ml Ampicilli n 1 L 1 配制磷酸盐缓冲液(0.17 M KH 2PO4,0.72 M K2HPO4)100 ml。溶解2.31 g KH2PO4,和 12.54g K2HPO4于 90 ml 的去离子水中，搅 拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml，咼温咼压火菌。2.称取下列试剂，置于 I L烧杯中。Tryptone 12 g Yeast Extract 24 g Glycero

10、l 4 ml 3.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至 I L后，咼温咼压火菌。5.待溶液冷却至 60C以下时，加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲 液。6.均匀混合后 4C保存。在 90 ml 的去离子水中溶解 1.86 g KCl 后，定容至 100 ml。2.配制 2 M MgCl2溶液。在 90 ml 去离子水中溶解 19 g MgCl2后，定容至 100 ml，高温高 4.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。5.量取 10 m1 250 mM KCl溶液，加入到烧杯中。6.滴加 5 N NaOH 溶液(约 0.2 m1)，调节

11、pH 值至 7.0。7.加入去离子水将培养基定容至 l L 0 8.高温高压灭菌后，4C保存。9.使用前加入 5 ml 灭菌的 2 M MgCl 2溶液。配制量 配制方法 SOB 培养基 组份浓度 配制量 配制方法 压灭菌。SOC 培养基 组份浓度 2%(W/V)Trypt one 0.5%(W/V)Yeast Extract 0.05%(W/V)NaCl 2.5mM KCl 10 mM MgCl 2 Trypt one 20 g Yeast Extract 5 g NaCl 0.5 g 1 L 1.配制9 250 mM KCl 溶3.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中 后定容至用过滤膜过滤除

12、菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存2%(W/V)T

13、rypt one 0.5%(W/V)Yeast Extract 0.05%(W/V)NaCl 2.5 mM KCl 10 mM MgCl2 20 mM Glucose 配制量 100 mL 配制方法 1.配制 I M Glucose溶液。将 18 g Glucose溶于 90 ml 去离子水中，充分溶解后定容至 100 ml。用 0.22 何滤膜过滤除菌。2.向 I 00 ml SOB 培养基中加入除菌的 1 M Glucose溶液 2 ml，均匀 混合。3.4C保存。2 8T 培养基 组份浓度 1.6%(WV)Tryptone,1%(W/V)Yeast Extract,0.5%(W/V)Na

14、CI 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Trypt one 16 g Yeast Extract 10 g NaCl 5 g 2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解 3.滴力卩 5 N NaOH,调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至 1 L o 5.咼温咼压火菌后，4C保存。bx broth 组份浓度 2%(W/V)Tryptone，0.5%(W/V)Yeast Extract，o 5%(W/V)MgSO 4 7H2O 配制量 1 L 配制方法 1.称取下列试剂，置于 l L 烧杯中。Trypt one 20 g Yeast Ext

15、ract 5 g MgSO4 7H2O 5 g 2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解 3.滴加 1 N KOH。调节 pH 值至 7.5o 4.加去离子水将培养基定容至 1 L o 5.咼温咼压火菌后，4C保存。NZCYM 培养基 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于

16、烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存0.5%(WV)Yeast Extract 0.1%(WV)Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）1%(WV)NZ 胺 0.5%(WV)NaCl 0.2%(WV)MgSO4 7HO 1 L 1 称取下列试剂。置于 I L烧杯中 Yeast Extract 5 g Casam ino Acid 1 g NZ 胺 10 g NaCl 5 g Mg

17、SO4 7HO 2 g 2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加 5 N NaOH（约 0.2 ml），调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定谷至 1 L o 5.咼温咼压火菌后，4C保存。NZYM 培养基 组份浓度 0.5%(WV)Yeast Extract 1%(WV)NZ 胺 0.1%(WV)NaCl 0.2%(WV)MgSO4 7HO 配制方法 NZYM 培养基除不含 Casamino Acid外，其他成份与 NZCYM 培养 基相同。NZM 培养基 组份浓度 1%(WV)NZ 胺 0.1%(WV)NaCl 0.2%(WV)MgSO4 7HO 配制方法

18、NZM 培养基除不含 Yeast Extract酵母提取物）外，其他成份与 NZYM 培养基相同。一般固体培养基的配制 配制方法 1.按照液体培养基配方准备好液体培养基，在高温高压灭菌前，加 入下列 试剂中的一种。Agar（琼脂；铺制平板用）15 g/L Agar（琼脂；配制顶层琼脂用）7 g/L Agarose（琼脂糖；铺制平板用）15 g/L Agarose（琼脂糖；配制顶层琼脂用）7 g/L 2.高温高压灭菌后，戴上手套取出培养基，摇动容器使琼脂或琼脂 组份浓度 配制量 配制方法 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分

19、混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存糖充分混匀（此时培养基温度很高，小心烫伤）。3.待培养基冷却至 5060C时，加入热不稳定物质（如抗生

20、素等）,摇动容器充分混匀。4.铺制平板（3035 ml 培养基/90 mm 培养皿）。LB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培 养基 组份浓度 1%(W/V)Trypt one 0.5%(W/V)Yeast Extract 1%(W/V)NaCl 0.1 mg/ml Ampicilli n 0.024mg/ml IPTG 0.04 mg/ml X-GaL 1.5%(W/V)Agar 配制量 1 L 配制方法 1 称取下列试剂，置于 l L 烧杯中 Trypt one 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2.加入约 800 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。3.滴加

21、 5 N NaOH（约 0.2 mL），调节 pH 值至 7.0。4.加去离子水将培养基定容至 1 L 后，加入 15 g Agar。5.高温高压灭菌后，冷却至 60 C左右。6.加入 1 ml Ampicillin（100 mg/ml）、1 ml IPTG（24 mg/ml）、2 ml X-Gal（20 mg/mL）后均匀混合。7.铺制平板（3035 ml/90 mm 培养皿）。8.4C避光保存。TB/Amp/X-Gal/LPTG 平板培 养基 组份浓度 1.2%(W/V)Trypt one 2.4%(W/V)Yeast Extract 0.4%(V/V)Glycerol 17 mM KH

22、2PO4 72 mM K2HPO4 0.1 mg/ml Ampicilli n 0.024 mg/ml IPTG 0.04mg/mL X-GaL 1.5%(W/V)Agar 配制量 1 L 配制方法 1.配制磷酸盐缓冲液（0.17 M KH2PO4，0.72 M K2HPO4）100 ml。溶解 2.31 g KH2PO4和 12.54 g K2HPO4于 90 ml 的去离子水中，搅后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列

23、试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存拌溶解后，加去离子水定容至 100 ml,咼温咼压火菌 2.称取下列试剂，置于 I L烧杯中。Tryptone 12 g Yeast Extract 24 g Glycerol 4 ml 3.加入约 800

24、 ml 的去离子水，充分搅拌溶解。4.加去离子水将培养基定容至 1 L 后。加入 I 5 g Agar。5 高温高压灭菌后，冷却至 60C左右。6.加入 100 ml 的上述灭菌磷酸盐缓冲液、I ml Ampicillin（100mg/ml）、1 ml IPTG（24mg/mL）、2 ml X-Gal（20 mg/ml）后均匀混合。7.铺制平板（3035 ml/90 mm 培养皿）。8 4 C避光保存。六、抗生素的贮存溶液及其工作浓度 抗生素 贮存液*1 工作浓度 浓度 保存条件 严紧型质粒 松弛型质粒 氨苄青霉素 50 mg/ml（溶于水）-20 C 20(g/ml 60 g/ml 羧苄青霉

25、素 50 mg/mL（溶于水）-20 C 20(g/ml 60 g/ml 氯霉素 34 mg/mL（溶于乙醇）-20 C 25(g/ml l70 g/mL 卡那霉素 10 mg/mL（溶于水）-20 C 10(g/ml 50 g/ml 链霉素 10 mg/mL（溶于水）-20 C 10(g/ml 50 g/ml 四环素*2 5 mg/mL（溶于乙醇）-20 C 10(g/ml 50 g/mL *1以水为溶剂的抗生素贮存液应通过 0.22 m 滤器过滤除菌。以乙醇为溶剂的抗 生素溶液无须除菌处理。所有抗生素溶液均应保存于不透光的容器中。*2镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐

26、的培养基（如 LB 培养基）。七、SDS-PAGE 浓缩胶（5%Acrylamide）配方表 各种组份名称 各种凝胶体积所对应的各种组份的取样量 1 m1 2 m1 3 m1 4 ml 5 ml 6 m1 8 m1 10 mL H2O 0.68 1.4 2.1 2.7 3.4 4.1 5.5 6.8 30%Acrylamide 0.17 0.33 0.5 0.67 0.83 1.0 1.3 17 1.0M Tris-HCI(pH6.8)0.13 0.25 0.38 0.5 0.63 0 75 1.0 l.25 10%SDS 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0 06 0.08

27、0.1 10%过硫酸铵 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.08 0.1 TEMED.0.001 0.002 0.003 0.004 0.005 0.006 0.008 0.01 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加

28、约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存 5m1 10m1 15m1 20 mI 25m1 30m1 40m1 50 mI 6%Gel H2O 2.6 5.3 7.0 10.6 13.2 15.9 21.2 26.5 30%Acrylamide 1.0 2.0 3 0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 1.5 M Tris-HCI(pH8.8)1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 10

29、%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED.0-0.004 0.008 0.012 0.015 0.02 0.024 0.032 0.04 8%Gel H2O 2.3 4.6 6.9 9.3 11.5 13.9 18.5 23.2 30%AcryIamide 1.3 2.7 4.0 5.3 6.7 8.0 10.7 13.3 1.5M Tris-HCI(pH8 8)1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 10%SDS 0.05 0

30、.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.0.05 0.1 0.15 0 2 0.25 0.3 0 4 0.5 TEMED 0.003 0.006 0.009 0.0I2 0.015 0.018 0.024 0.03 10%GeL H2O 1.9 4.0 5.9 7.9 9.9 14.9 15.9 19.8 30%AcryIamide 1.7 3.3 5.0 6.7 8.3 10.0 13.3 16.7 1.5 M Tris+HCI(pH8.8)1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.

31、2 0.25 0 3 0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0 008 0.01 0.01 2 0.0I 6 0.02 12%GeL H2O 1.6 3.3 4.9 6.6 8.2 9.9 13.2 16 5 30%AcryIamide 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 I2.0 16.0 20.0 1.5 M Tris-HCI(pH8.8)1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 12.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3

32、0.4 0.5 10%过硫酸铵 0.05 0.1 0 15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 15%GeI H2O 1.1 2.3 3.4 4.6 5.7 6.9 9.2 11.5 30%AcryIamide 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 20.0 25.0 1.5M Tris-HCI(pH8.8)1.3 2.5 3.8 5.0 6.3 7.5 10.0 I2.5 10%SDS 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 10%过硫酸

33、铵 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.4 0.5 TEMED 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.016 0.02 各种组份名称 各种凝胶体积所对应的各种组份的取样量 后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存异丙基硫代半乳糖苷组份浓度配制量配制方法称置于离心管中加入灭菌水充分混合溶解后定容至用过滤膜过滤除菌小份分装份后保存组份浓度配制量配制方法称量置于离心管中加入二甲法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加去离子水将培养基定容至咼温咼压火菌后保存培养基组份浓度配制量配制方法称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解滴加约调节值至加盐缓中液溶解和于的去离子水中搅拌溶解后加去离子水定容至咼温咼压火菌称取下列试剂置于烧杯中加入约的去离子水充分搅拌溶解加去离子水将培养基定容至后咼温咼压火菌待溶液冷却至以下时加入的上述灭菌磷酸盐缓冲液保存