血清-羟丁酸脱氢酶DGKC方法测定.docx

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1、血清a一羟丁酸脱氢酶DGKC推荐方法测定1 .实验原理.德国临床化学学会(DGKC)推荐的连续监测法。2-酮基丁酸 + NADH+M a-HDBH 2-羟丁酸 + NAD+ 2 .标本：3 . 1病人准备：无特殊要求。4 . 2类型：血清，肝素或EDTA血浆。5 .标本存放：3天内的活性损失：28保存：8%； 1525保存：2%。6 .标本运输：常温条件下保存运输。7 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染的标本。8 .实验材料6. 1 试剂：申能 HBDH 测定试齐I盒(141 3207170 1 试齐 1 ( 6X64ml )试齐 lj 2 ( 6X 16ml)6. 1. 1试剂组成试齐 lj

2、 1 (RI)：磷酸盐缓冲液pH7. 850mmol/L2-酮基丁酸3mmo 1 /L试剂2 (R2)：NADH0. 18mmol/L6. 1. 2试剂准备：试剂为即用式。6. 1. 3试剂稳定性与贮存试剂保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。6. 1.4变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时、 表明试剂已变质，不能继续使用。6. 1. 5注意事项 试剂中含叠氮钠(0.95g/L)为防腐剂。不可入口！避免接触皮肤及粘 膜。应采取必要的预防措施使用试剂。6.2校准品 使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，具体参 见生化

3、检验校准品和质控品. S0P文件。6 . 3质控品 具体参见生化检验校准品和质控品.SOP文件。7 .仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪8 .操作步骤8. 1项目基本参数：参见AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件9. 2仪器操作步骤：参见AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件10. 验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2s为质控警告限，3s为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内 质控操作规程.S0P文件。11 .计算方法：以TruCal U复合校准品a-HBDH校准值校准仪器后，在病人结果可报告

4、范 围内，仪器直接报告可靠的检测结果。不使用校准品进行a-HBDH活力检测，可以直接使用 A/min均值乘以计算因子得到结 果。但是这样所得结果的可靠性不如使用校准品。计算a-HBDH活力的计算因子见下表：A A/minX 因子二a-HBDH 活力U/L底物起始的反应（37） 样品起始的反应（37）340nm10079334nm10275365nm1867712.参考值范围成人79358097147140. 9肝损害：a-HBDH/LDH0. 6参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实 验室应建立自己的参考值。13 .临床意义口：a-羟丁酸脱氢酶（a-HBDH

5、）是乳酸脱氢酶的一种同工酶，它以a-羟丁 酸为底物。与乳酸脱氢酶的其它同工酶相比，a-HBDH在心肌组织中含量很高，因此a-HBDH 对心肌梗死的诊断更敏感和更特异。为区别肝脏和心脏疾病，a-HBDH/LDH比率有助于肝病 和心脏疾病的鉴别。实质性肝病的a-HBDH/LDH比率降低；而心肌梗死的a-HBDH/LDH比率 升高。14 .操作性能15 . 1 线性范围：3-1100U/Lo14. 2精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法，AU1000批内精密度小于3%, 总精密度小于3%o用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。批内精密 度 n = 20X(U/L)S(

6、U/L)CV (%)批间精密度 n=20X(U/L)S(U/L)CV (%)样品11002. 212. 20样品197. 82. 202. 25样品21742. 971. 71样品21772. 011. 14样品3884. 201. 08样品33866. 961. 8014 . 3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对64个样品进行a-HBDH 活力检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y = l. OOx-1. 00 （U/L）；.0.99。 14.4灵敏度：本试剂的检测限为3 U/L。15 . 5病人结果可报告范围 本法对a-HBDH活力检测的 A/mi n

7、最大变化在340和334nm 为0.15,在365nm为0.07。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L的氯化钠溶液作 1+9稀释，重新测定，结果乘以10。16 .超出范围结果处理：本法对a-HBDH活力检测的 A/mi n最大变化在340和334nm为 0. 15,在365nm为0. 07。当样品测定值超过上限时，应将样品用9g/L的氯化钠溶液作1+9 稀释，重新测定，结果乘以10。17 .病危报警值的处理：无。18 .方法局限性17 . 1本法对a-HBDH活力检测的A A/min最大变化在340和334nm为0. 15,在365nm为0. 07。 当样品测定值超过上限时，应将样品用9

8、g/L的氯化钠溶液作1+9稀释，重新测定，结果 乘以10。18 . 2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度1704|iniol/L ,胆红素浓度0684|oiol/L,甘油三 酯浓度022.6mmol/L时没有观察到干扰。即使是很低浓度的血红蛋白都会干扰检测结果。19 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。20 .参考文献1. Moss DW, Henderson AR. Clinical enzymology. In: Burt i s CA, Ashwood ER. editors. Tietz Textbook of Clinical Chemi stry. 3ld ed.

9、Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999. P. 617-721.2. Thomas L. Clinical Laboratory Di agnost i cs. 1 ed. Frankfurt: TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998.p.8994.3. Elliot BA, Wilkinson J H. The serum a -hydroxybutyrate dehydrogenase i n d i seases other than myocardial infarct ion. Clin Sc i 1963;24:343-55.20.其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定 执行。