血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇、异戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析方法.docx

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1、血、尿中乙醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇、异戊醇的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析方法(GA/T105-1995)1顶空气相色谱法1. 1适用范围：适用于低级醇类、醇性饮料中毒或中 毒死亡者的血液和尿液中乙醇对血液、尿液样品中进行乙 醇、甲醇、正丙醇、乙醛、丙酮、异丙醇、正丁醇、异戊醇 的定性分析及乙醇、甲醇、正丙醇的定量分析。1.2 原理：本法利用醇类的易挥发性，以叔丁醇为内标, 用顶空气相色谱火焰离子化检测器进行检测，经与平行操作 的醇类标准品比较，以保留时间定性；用内表法以醇类对内 标物的峰面积比进行定量。1.3 器材与试剂气相色谱仪(配置火焰离子化检测器)；样品瓶(

2、7ml青 霉素瓶)硅橡胶垫；聚四氟乙烯薄膜；铝帽；密封钳；注射器(1ml )；硫酸铁；甲醇标准溶液；叔丁醇1. 4操作步骤1色谱条件a）色谱柱：（1） 5%CARB0WAX20M Carbopack（80-120目）2mm义2m玻璃柱（2） Porapak S（80100 目）2mmX2ni 玻璃柱b）柱温：柱（1）程序升温：始温70,速率5/min, 终点 170 （5min）柱（2）程序升温：始温10CTC,速率15/min,终点 200 （lOmin）c）检测器：火焰离子化检测器（FID）d）检测室温:230e）汽化室温：21CTCf）载气（N2）：流速 20-35ml/min定性分析1

3、.4.2. 1样品制备取待测全血（或尿液）1ml加入样品瓶中，加100ul（2mg/inl）叔丁醇内标液，约1克硫酸铁，瓶口覆盖氟乙烯 薄膜，硅橡胶垫，用密封钳加封铝帽，混匀，置60C水浴中 加热 15-20nlin。同时取空白全血（或尿液）两份，其中一份添加内标溶 液100ul和乙醇标准使用液20ul （20ug）,按上述程序平行 操作以进行空白对照和已知对照分析。1.4. 2. 2 进样用1ml注射器分别吸取检材、空白对照和已知对照瓶内液面上的气体约0. 5ml,注入气相色谱仪中，每个试样进样 23次，并注入醇类标准溶液。1. 4. 2. 3记录与计算分别记录各试样中内标物，醇类标准品和可

4、疑醇峰的保 留时间，填入GC定性分析结果中，计算它们的保留时间平 均值，并以内标物的保留时间为1,计算醇的相对保留时间 值。1.5定量分析5. 1样品制备精密吸取待测全血（或尿液）0.5血两份，分别加入样 品瓶内，加100ul （2mg/ml）叔丁醇内标液,按1. 5. 2. 1密 封瓶口后，混匀，置60水浴中加热1520min。另取空白全血（或尿液）两份，根据检材中醇含量的多 少，添加乙醇（或甲醇、正丙醇）标准使用液20ug2mg, 内标液100ul （200ug）按上述方法平行操作。1. 5. 2检测按1.5项中所述操作进行。2. 5.3记录与计算1. 5. 3. 1记录检材及空白添加标准

5、品中乙醇（或甲醇、 正丙醇）及内标物峰面积值，填入GC定量分析记录表中， 并算出各检材乙醇（或甲醇、正丙醇）及内标物的平均峰面 积值。1. 5. 3. 2计算相对校对因子错误!未找到引用源。/二空白检材中醇添加量义内标物峰面积平均值一 空白检材中内标添加量X醇面积平均值1. 5. 3. 3计算检材中醇含量W （mg/100ml）-X检材中醇峰面积平均值X内标添加量（ug）xlOO -检材中内标物峰面积平均值X检材量X10001.5 . 3. 4计算相对相差相对相差（） =二XxlOO W式中：Wl, W2为两份检材平行定量测定的结果，W为两份检 材平均值。1.6 结果评价6. 1定性结果评价1

6、.6. 1.1本法血、尿中乙醇、甲醇的最低检出限为 lug/mlo正丙醇的最低检出限为10 ug/ml。如果添加于空白 检材中20ug乙醇出现相应的色谱峰，而检材未出现相应的 醇类色谱峰，可以认为检材中不含醇类，阴性结果可靠。如 果添加于空白检材中20ug乙醇未出现相应的色谱峰，而检 材未出现醇类色谱峰，属操作有误，阴性结果不可靠，应重 新检验。1.7. 1.2如果空白检材未见出醇类色谱峰，而检材有醇 类色谱峰时。说明空白无干扰，阳性结果可靠，经不同的色 谱条件，结果一致时一般可以认定检材中含有某种醇类物 质。必要时，用GC/MS确证。1.8. 2定量分析结果评价两份检材的相对差若不超过15%

7、时，结果按两份检材含 量的平均值计算，相对相差若超过15%,需重新进行测定。2直接进样气相色谱法1原理本法利用蛋白沉降剂，使蛋白凝固，经离心后取含醇类 化合物的上清液用气相色谱火焰离子化检测器进行检测，与 平行操作的醇类标准品比较，以保留时间或相对保留时间定 性，用内标法以醇类内标物的峰面积比进行定量。2. 2试剂与仪器气相色谱仪（配置火焰离子化检测器）；漩涡振荡器； 离心机（4000r/min）；具塞离心管（5ml）；微量进样器3. 标准溶液；叔丁醇；6%高氯酸3操作步骤2. 3. 1样品制备取待测全血（或尿液）0.5ml于离心管内，加50ul（2mg/ml）叔丁醇内标液，血样加0. 5ml

8、6%高氯酸，用漩涡 振荡器混匀，以3000i7niin速度离心。同时取空白全血（或尿液）两份，其中一份添加内标溶液50ul和乙醇标准使用液20ul （20ug）,按上述程序平行操 作以进行空白对照和已知浓度对照。2. 4检测1色谱条件色谱柱：（1） 5%CARB0WAX20M Carbopack（80-120 目）2mm 2m玻璃柱（2） Porapak S（80-100 目）2mm义2m 玻璃柱 柱温：柱（1）程序升温：始温7CTC,速率5。/屁11,终点 170 （5min）柱（2）程序升温：始温10CTC,速率15oC/min,终 点 200C（lOmin）检测器：火焰离子化检测器（FI

9、D）检测室温：230汽化室温：21（TC载气（N2）：流速 20 35ml/min燃气（H2）和空气：流速根据仪器条件选定2. 4. 2进样用10ul微量进样器分别吸取检材的空白对照和已知对 照管内上清液lul注入气相色谱仪中，每个试样进样三次， 并注入醇类标准溶液。2. 4. 3记录与计算记录检材及空白添加标准品中乙醇（或甲醇、正丙醇） 及内标物峰面积值，填入GC定量分析记录表中，并算出各 检材乙醇（或甲醇、正丙醇）及内标物的平均峰面积值。2. 5定量分析2. 5. 1样品制备精确吸取待测全血（或尿液）0.5ml两份，分别加入离 心管内，加50ul叔丁醇内标液，按2.3. 1沉淀蛋白，离心。

10、同时取空白全血（或尿液）两份，根据检材中醇含量的 多少，添加乙醇（或甲醇、正丙醇）标准使用液20ug2mg, 内标液50ul （100ug）按上述方法平行操作。2. 5. 2检测按2. 4项中所述操作进行2. 5. 3记录与计算按 2. 4. 32. 6结果评价2. 6. 1本法血、尿中乙醇、甲醇的最低检出限为10ug/mlo 如果添加0. 5ml空白检材中20ug乙醇未出现相应的色谱峰, 而检材未出现醇类色谱峰，属操作有误，阴性结果不可靠， 应重新检验。2. 6. 2如果空白检材未见出醇类色谱峰，而检材有醇类 色谱峰时。说明空白无干扰，阳性结果可靠，经不同的色谱 条件，结果一致时一般可以认定检材中含有某种醇类物质。 必要时，用GC/MS确证。2. 6. 3定量分析结果评价同