基因频率与基因型频率计算方法总结(完整资料).doc

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1、基因频率与基因型频率计算方法总结(完整资料）(可以直接使用，可编辑 优秀版资料，欢迎下载）基因频率和基因型频率的计算基因频率和基因型频率的计算（一）。根据基因型或基因型频率计算基因频率：例1。从某个种群中随机抽出00个个体，测知基因型为AA，Aa和aa的个体分别是30、60和10个，求的基因频率。解析：可以通过基因型频率计算基因频率。一对等位基因中的一个基因的频率：基因频率()=对应纯合子(A）基因型频率杂合子（A）基因型频率的1/。 00个个体中A为0个,Aa为个，a为10个，则AA这种基因型的频率为30100=30；同理，Aa为60,aa为0%,则A基因的基因频率为30+601=60,基因

2、的基因频率为106012=0。答案:A基因的基因频率为0，a基因的基因频率为40。变式训练1已知人眼的褐色（A）对蓝色（a)是显性，属常染色体上基因控制的遗传。在一个3000人的人群中，蓝眼的有30人，褐眼的有26400人,其中纯合子有12000人，那么，这一人群中A和a基因的基因频率分别为-（ ）64%和36 B.3%和64 C0%和0 2和1%（二）.在伴性遗传中有关基因频率的相关计算：例.若在果蝇种群中,XB的基因频率为0，Xb的基因频率为1，雌雄果蝇数相等，理论上bXb、XY的基因型比例依次为-( ).1、2 B.0。、 C。0、10 D5%、 05%解析：由于在该果蝇种群中，雌雄果蝇

3、数相等, 所以雌果蝇产生的配子中，XB的基因频率应为9,X的基因频率为10%。雄果蝇产生的配子中,有约1/2的含Y染色体的配子，另有约1/2的含X染色体的配子,在含染色体的雄配子中， 与Xb的基因频率也分别为0和0%。它们配子的结合情况可从下表中得出:雄配子雌配子Y（1/)X（1/2）%Xb(2）10%B 90XBY 45%XBXB 4 XB Xb 4 X 10XbY XBb 4.5X X 05 可见,理论上XB基因型比例为45，XbY的为5，B Xb的为9%，XXb的为.5。答案：B。变式训练2对某校学生进行红绿色盲遗传病调查研究后发现：78名女生中有患者23人，携带者52人，820名男生中

4、有患者6人,那么该群体中红绿色盲基因的频率是-( )A。4 。. C.6.% D。102（三)利用遗传平衡定律求解基因频率和基因型频率1.对遗传平衡的理解：遗传平衡指在一个极大的随机交配的种群中，在没有突变发生,没有自然选择和迁移的条件下，种群的基因频率和基因型频率在一代一代的遗传中可以世代保持不变。在遗传平衡的种群中，某一基因位点上各种不同的基因频率之和以及各种基因型频率之和都等于是1。遗传平衡定律公式的推导和应用在一个遗传平衡的自然种群中,一个位于常染色体上的显性基因A的基因频率为p,与其相对应的隐性基因a的频率为q,则该种群的后代中A、A、a的基因型频率各是多少？三种基因型频率之和为多少

5、?分析：依题意，在一个遗传平衡的自然种群中,显性基因A的基因频率与隐性基因a的基因频率之和（p+q）应等于1，其雌雄个体向后代传递基因A型配子的频率为，与其相对应的传递隐性基因型配子的频率为q,则可用下表表示各类配子的组合类型、子代基因型及其出现的概率: 雄配子雌配子（p)a（q）A（p)A（p)Aa（pq）a（q）Aa（p）Aa(q2）可以得出该种群后代中出现三种基因型AA、Aa、aa，并且三种基因型出现的频率分别为2、2、q2，且它们的频率之和为p2+pq2=(p+q)2=1。又因为该种群是一个处于遗传平衡的自然种群,所以其种群特征应与此一致。这样学生就很容易理解遗传平衡定律了。例3囊性纤

6、维变性是一种常染色体遗传病。据统计，在某欧洲人群中，每 500个人中就有一个患此病.现有一对健康的夫妇生了一个患有此病的孩子，此后,该妇女又与健康的男子再婚.则该再婚的双亲生一孩子患该病的概率是多少-( ） A12 B./ .1/100 1/25解析：由于双亲正常,却生一病孩，可推知囊性纤维变性属于常染色体隐性遗传病,如把其控制基因记作a，则该妇女的基因型为，这个妇女（Aa)与另一健康男子结婚,如若也生一病孩,则此健康男子必须是杂舍子（A)才有可能,所以解答本题的关键就在于求出该健康男子是杂合子的概率。根据题意，如果设基因的频率为，则有基因型aa的频率=qq=12 500,可得q=1/50,基

7、因A的频率p=一9/0.这样杂合子Aa的基因型频率=2pq490150/25,又考虑到双亲均为杂合子时后代出现隐性纯合子aa的可能性是14，由此可算出再生一孩患病的可能性为12410.答案：C。变式训练3已知苯丙酮尿症是位于常染色体上的隐性遗传病。据调查，该病的发病率大约为1/00，请问在人群中该丙苯酮尿症隐性致病基因（）的基因频率以及携带此隐性基因的携带者（Aa)基因型频率分别是-（ ） A和0。% B%和。98%C。1%和3。9 D1%和。198%例4.玉米的黄粒()对白粒(r）是显性。现将纯合的黄色玉米和白色玉米交杂，得l全是黄色，F1的黄色玉米自交得F2。让F代的黄粒玉米之间随机交配，

8、则其子代F中黄粒与白粒玉米的比为： 1:1 B2:1 3：1 D.8:解析：解此题用基因频率的方法计算就简单多了。在F2的黄粒玉米中，基因型RR占13，R占,所以在群体中产生的雌配子基因型有二种即和r，其中含基因R的配子比例为2/，含基因的配子比例为1/3；雄配子中含基因R的配子比例为3，含基因的配子比例为1。由于F代的黄粒玉米之间随机交配，雌雄配子的结合是随机的，可以用下表表示：黄粒F的配子雌配子R（23)雌配子（13)雄配子R(23)R（4)Rr（29）雄配子r（/）Rr(2/9）rr（19）从上表可得出子代F3的表现型及比例为:黄粒(R，r)89,白粒（rr）19。答案：。变式训练4.某

9、豌豆基因型为Dd，让其连续两代自花授粉后，进行人工随机授粉，则随机授粉后的子代中dd占的比例为-（ ) A./4 B.1/9 C9/4 D.6三反馈训练:.（007年江苏高考第15题）果蝇的体色由常染色体上一对等位基因控制，基因型BB、Bb为灰身,bb为黑身。若人为地组成一个群体，其中80为B的个体,20为b的个体，群体随机交配,其子代中的比例是 A。5 .2 C50 D64%2.如果在一个种群中，基因型AA的比例占25，基因型Aa的比例占50,基因型的比例占2%。已知基因型a的个体失去求偶繁殖能力,则随机交配一代后，子代中基因型a的个体所占的比例为-（ ）A。1/16 .1/8 C9 D1/

10、4。假设某中心血防站调查了18个MN血型血样本，其中397人是M型（LMLM）,86人是MN型(M),30人是N（ ）型，则L和LN的基因频率分别是-( )A43%、563% B.563、43。7%C。3。7、46。3%D6。3、53.74.（007年广东高考第2题）某常染色体隐性遗传病在人群中的发病率为%，色盲在男性中的发病率为。现有一对表现正常的夫妇,妻子为该常染色体遗传病致病基因和色盲致病基因携带者。那么他们所生小孩同时患上述两种遗传病的概率是A。 1/88 B。 /22 C.72200D 3805经调查统计某地区人群中蓝眼(a）1600人，纯合褐眼（A)10人,杂合褐眼（A）7000人

11、,那么该地区人群中蓝眼基因和褐眼基因的基因频率分别是-( ）。51和49B和5C32和68D.8%和2%6.(27年唐山二模)某植物种群,A基因型个体占30%，aa基因型个体占20，则: (1）植物的A、a基因频率分别是、。 （）若该植物自交,后代中AA、a基因型个体分别占、。这时，A、a的基因频率分别是。 (3）依据现代生物进化理论，这种植物在两年中是否发生了进化？,原因是。 （4）由此可知，生物进化的基本单位是,进化的原材料由提供，是否发生进化决定于，进化的实质是。参考答案:变式训练:.A C 3.B4A反馈训练：。 2。C 。D4A 5.A6（1）5%、45%（2）42.5% 32.5%

12、 5、45 （)没有发生进化基因频率没有发生改变 （4）种群 突变和基因重组 自然选择 种群基因频率的改变 作者简介： 左延柏,男，中学高级教师,中国教育工作者协会会员，江苏省南京市高三生物教学研究核心小组成员.地址：江苏省南京市大桥南路16号邮编：015 电话：Eml：zb2101516。co选修3易考知识点背诵专题1 基因工程基因工程的概念基因工程的别名基因拼接技术或DNA重组技术操作环境生物体外操作对象基因操作水平DN分子水平基本过程剪切 拼接导入 表达结果产生人类需要的基因产物特点打破种的界限，定向改造生物本质基因重组(一）基因工程的基本工具1。“分子手术刀”限制性核酸内切酶（限制酶）

13、（1）来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DN分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有特异性。（3）结果:经限制酶切割产生的DA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2“分子缝合针”NA连接酶（1)两种DA连接酶(EcoliDN连接酶和DA连接酶)的比较：相同点:都缝合磷酸二酯键.区别:EcoiN连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低.(2）与DA聚合酶作用的异同：.。DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已

14、有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。3.“分子运输车-载体（）载体具备的条件:能在受体细胞中复制并稳定保存.具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入.具有标记基因，供重组DN的鉴定和选择.（2)最常用的载体是。质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。()其它载体： 噬菌体、动植物病毒(二）基因工程的基本操作程序第一步:目的基因的获取1。目的基因是指:是人们所需要转移或改造的基因2。获取目的基因的方法_ _3.原核基因采取直接分离获得，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方

15、法有反转录法_和化学合成法_。4.P技术扩增目的基因（）原理:NA双链复制（2)过程：第一步：加热至095DA解链；第二步:冷却到5560，引物结合到互补A链；第三步：加热至7075，热稳定DA聚合酶从引物起始互补链的合成。第二步:重组DNA分子1。目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。2组成:目的基因+启动子终止子+标记基因复制原点（1)启动子:是一段有特殊结构的N片段,位于基因的首端，是A聚合酶识别和结合的部位,能驱动基因转录出mR,最终获得所需的蛋白质。（2)终止子：也是一段有特殊结构的DA片段,位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是

16、为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来.常用的标记基因是抗生素基因。第三步：转化受体细胞1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。.常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等.将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。此方法的受体细胞多是 受精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是大肠杆菌 ,其转化方法是：先用 C2+ 处理细胞,使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DNA分子溶于缓冲

17、液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收D分子，完成转化过程。3。重组细胞导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测 转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术。2。其次还要检测 目的基因是否转录出了RA,方法是采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交。最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取 蛋白质,用相应的 抗体进行抗原-抗体杂交。4有时还需进行 个体生物学水平的鉴定。如 转基因抗虫植物是否出现抗虫性状.（三）基因工程的应用1。植物基因工程:抗虫、抗病、

18、抗逆转基因植物,利用转基因改良植物的品质.2。动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物。3基因治疗:把正常的外源基因导入病人体内，使该基因表达产物发挥作用。（四）蛋白质工程的概念蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成,对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。(基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质）转录 翻译蛋白质的改造大改：设计并制造自然界中不存在的全新蛋白质，使之具有特定的氨基酸序列、空间结构和预期功能中改：在蛋白质分子中替代某一个肽段或一个特定的结构域小改：通过基因工程中的

19、定点诱变技术，有目的改造蛋白质分子中某活性部位的1个或几个氨基酸残基，以改善蛋白质的性质和功能定点诱变技术是改变蛋白质结构的核心之一C技术是基因定点诱变的常用方法蛋白质工程与基因工程的关系蛋白质工程基因工程实质通过改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的蛋白质将目的基因从供体转移到受体细胞,并在受体细胞中表达结果合成自然界不存在的蛋白质只能生产自然界已存在的蛋白质联系蛋白质工程是在基因工程基础上,延伸出的第二代基因工程思考题第二章分子克隆工具酶1简述基因工程研究用的工具酶的类型和作用特点。说明限制性内切核酸酶命名原则(举例)。3.限制内切核酸酶的星活性是指什么？在极端非标准条件下

20、，限制酶能切割与识别序列相似的序列，这个改变的特殊性称星星活性.星星活性是限制性内切酶的一般性质，任何一种限制酶在极端非标准条件下都能切割非典型位点。引起星星活性的因素：甘油浓度高(），酶过量（100U/ml）,离子强度低（2mml/），pH 值过高(8.）,或是加了有机溶剂如MSO（二甲基亚砜)、乙醇、乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺,或是用其它2价阳离子如Mn2+、Cu2+、o2 或2+代替了Mg+。4T4 DNA ga和E。coli lgae 有什么异同?5.连接酶的反应温度如何选择，为什么？连接酶最适的反应温度应是7,但在这一温度下粘性末端的氢键结合不稳定，因此连接反应常采用的最佳温

21、度一般在46间，通常多选用126 30分钟到1小时。6。什么是lenw酶？有什么作用？Kenow D聚合酶是从全酶中除去5外切活性的肽段后的大片段肽段,而聚合活性和 外切活性不受影响.也称为Klenow片段(enowfrgmet），或Ecoli NA聚合酶大片段（E.coi DNApoymraseae fragent).它也可以通过基因工程得到,分子量为76 ka.由于没有53外切活性，使用范围进一步扩大。补平3凹端,如果使用带标记的dN，则可对DNA进行末端标记。抹平DA凸端在35外切活性通过置换反应对DN进行末端标记在cA克隆中合成第二链随机引物标记在体外诱变中，用于从单链模板合成双链DN

22、A7。如何利用工具酶来研究某一个基因内含子的存在？8.哪些工具酶可以用于探针标记？T NA聚合酶的替代合成法标记DNA探针。反转录酶还可利用单链DN或RN作模板合成分子探针.第三章分子克隆载体.基因工程载体应具备哪些特点？能在宿主细胞中独立复制;有一定的选择标记,易于识别和筛选；有合适的限制酶位点,可插入一段较大的外源DNA,而不影响其本身的复制； 最好有较高的拷贝数，便于载体制备。2.作为一个最基本的载体，它必须具备哪些功能元件？能独立复制的单链或双链A;选择标记基因；合适的限制酶位点。3.请简要描述噬菌体溶原状态和裂解循环的基因调控模式及其在构建载体中的作用。4.丝状噬菌体载体克隆中经常遇

23、到哪些问题?丝状噬菌体载体的优点可产生单链DNA或双链DNA，分别用于不同的目的单链:为丝状噬菌体，可分泌到细胞外，用于测序或制备探针双链：为含双链RF DN存在于细菌菌落中，可供基因操作，如酶切,重组、提取、转化均应为双链DN。具有质粒的优点丝状噬菌体所能包装的DNA长度没有一定的限制,有些噬菌体颗粒可包装比野生型丝状噬菌体DNA 长7倍的DNA。缺点a。较大的外源DA片段被克隆以后,在噬菌体扩增过程中往往不稳定，很容易发生缺失的现象，这可能是由于感染较短的噬菌体比长的噬菌体更具竞争优势所致。b单链载体分子感染的细胞中往往单双链混杂，纯化某种类型的分子（尤其是双链分子）比较费力,同时由于重组

24、 DNA容易产生缺失,培养时间不能长，故所得N的量有限。c.重组中，经常出现一些能以两种可能方向插入的载体却仅以一种特定方向插入外源DN片段的情况，这是因为外源DA反向链的序列，在不同程度上干扰了载体基因间区域的功能所致。克服“缺失的办法.侵染菌应避免在液体培养基中连续继代培养.应用贮存于-70,重组hage感染细菌后铺板，再从噬菌斑中央部分挑取细菌后进行小规模培养c。培养时间应尽可能短（通常48h) d。收获噬菌体的培养液不能再做为原液继续培养 (因在重组子和野生型噬菌体共培养中，野生型具有选择优势,几代培养后可消除重组子)。第四章人工染色体载体1.大容量克隆载体有哪些种类,各有何特点？2。

25、简述利用YAC克隆载体构建基因文库的原理。简述黏粒、YC、BAC克隆载体、P1噬菌体载体的基本构成元件.4.黏粒载体具有哪些优缺点?怎样克服其缺点?黏粒的优点（1)同时具有噬菌体和质粒载体的特性（2)具有高容量的克隆能力柯斯质粒的缺点a.两个粘粒之间，当存在同源序列时，可能会发生重组,结果使克隆的外源DNA片段重排或丢失。b。含不同重组DA的菌落生长速度不一。当柯斯质粒文库复制扩增时，由于不同的插入片段对宿主细胞作用的情况不同,结果会出现各种外源DA 片段间的比例失调。另外不同重组柯斯质粒的产量相差悬殊。c。包装蛋白制备过程较复杂,每批包装蛋白的包装效率不稳定。而且，购买包装蛋白的费用较高.第

26、五章表达载体1。以大肠杆菌为例，表达载体比克隆载体多了哪些功能元件,各有什么生物学功能？2。简述利用7噬菌体启动子的T系列表达载体的工作原理。3。何为穿梭载体，在遗传结构上有何特点？4。将人的某个基因在大肠杆菌中表达应注意哪些问题?5.分泌表达载体需要哪些基本元件?6。什么是融合表达?有什么优点？第8章PC技术及其应用。简述C扩增的原理和过程？P反应特点:特异性强灵敏度高简便、快速对标本的纯度要求低PR的基本原理是什么？用PCR扩增时,必须预先得知什么信息？a.DA的半保留复制原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸.至少要知道足够合成一对引物的靶N序列。过程：。变性(deaturaon)

27、：将模板D置于96,使NA在高温下解链成为DN，且热变性不改变其化学性质；b.退火（nnealin）:将温度降至3772，使引物与模板的互补区相结合；c.延伸(extension):在72条件下,DNA聚合酶将dNTP连续加到引物的3-H端，合成A。这三个热反应过程的重复称为一个循环，经过20-40个循环可扩增得到大量位于两条引物之间序列的DN片段。PCR引物有哪些基本要求?在多数试验中人们习惯使用的引物浓度为各1M，即1pmo/l，在10 l反应体系中相当于61013个分子.如果用于扩增1 b的NA片段，可得到3.3的产物，足以用于常规分析。引物设计要考虑的几个问题长度:至少16 p，通常为

28、1830 bp,更短的引物一般会降低扩增的特异性，但会提高扩增的有效性。解链温度（Tm值):两个引物之间的Tm值差异最好在2-5。避免引物内部或引物之间存在互补序列（3个碱基） 含量尽量控制在40%之间，4种碱基的分布应尽可能均匀.尽量避免嘌呤或嘧啶的连续排列,以及在3末端的重复排列。引物的3末端最好是G或，但不要GC连排。PR技术产生污染的主要原因和预防方法？污染原因:1、样本间交叉污染2、PCR试剂污染3、R扩增产物污染4、实验室中克隆质粒的污染预防方法：A。防止污染：试剂小量分装,吸头及管一次性使用；器皿及工作区域要分开;无菌操作B、设立对照:阳性对照阴性对照包括:标本对照和试剂对照.P

29、CR技术有哪些应用？2/A克隆的基本原理是什么？第九章 NA序列分析1.简述化学降解法测序的基本原理以及主要应用范围.a。原理：将待测DNA片段的端磷酸基团作放射性标记，再分别采用不同的化学方法对特定碱基进行化学修饰并在该位置打断核酸链，从而产生一系列长度不一且分别以不同碱基结尾的NA片段，这些以特定碱基结尾的片段群通过并列点样（laeby-lan）的方式用凝胶电泳进行分离,再经放射自显影,即可读出目的NA的碱基序列。核心原理:特定化学试剂可对不同碱基进行特异性修饰并在被修饰的碱基处（5或）打断磷酸二酯键，从而达到识别不同碱基种类的目的。化学降解测序法的基本步骤包括： （）对待测DN片段的端磷

30、酸基团作放射性标记；（2）用化学修饰剂修饰特定碱基;（3）凝胶电泳分离和放射自显影显示出各片段的长度（）读序,由于在同一反应体系中,各DNA片段的标记端相同、起始位点相同,所以,根据断裂部位至标记端起始部位之间的距离(片段长度)，即可得出碱基顺序.化学降解测序法的应用MxmGlbert化学降解测序法不需要进行酶催化反应，因此不会产生由于酶催化反应而带来的误差；a。对未经克隆的DNA片段可以直接测序.b化学降解测序法特别适用于测定含有如5-甲基腺嘌呤、+含量较高的DN片段以及短链的寡核苷酸片段的序列。c测定长度大约250个碱基。简述ane双脱氧链终止法测序的原理。双脱氧核苷酸分子的脱氧核糖的3位

31、置的 OH缺失，致使下位核苷酸的磷酸基团无法与之结合。一旦双脱氧核苷酸整合到正在合成的DNA链中,该股NA的合成就到此终止.3.试述化学降解法和双脱氧链终止法的异同点。第十一章 DN文库的构建和目的基因的筛选1。基因组DNA文库有哪些类型？其相关的特点是什么？质粒文库质粒是最早用于构建基因组文库的载体,质粒载体所容纳的外源NA片段一般在10 b以内。这类基因组A文库一般应用于“鸟枪法全基因组测序研究和用于构建亚克隆文库或亚基因组文库。噬菌体文库噬菌体文库是以细菌噬菌体基因组衍生的一系列载体系统构建的，常用的有l噬菌体载体、M1单链噬菌体载体、P噬菌体载体及由噬菌体衍生的质粒载体。M13载体所容

32、纳的外源片段较小,一般用于构建cNA文库或AC和PAC亚克隆文库。噬菌体文库中应用最广泛的是l噬菌体。由于其有利于利用分子杂交的方法进行筛选，用l噬菌体构建的基因组DN文库在小基因组物种的基因克隆中起着重要作用.黏粒文库黏粒又称柯斯质粒，是由噬菌体的co序列、质粒的复制序列及抗生素抗性基因构建而成的一类特殊的质粒载体。黏粒载体和噬菌体载体类似，主要用于构建小基因组物种的基因组DNA文库。利用它们在筛选上的优势来分离单个基因或构建一定区间范围的亚基因组DN文库等.人工染色体文库包括酵母人工染色体文库、细菌人工染色体文库和1人工染色体文库,也称为大片段基因组NA文库，容纳的外源DNA片段为10 k

33、b- Mb。主要用于大基因组物种的基因克隆、物理图谱构建和基因组测序等，在基因组研究中应用越来越广泛.亚基因组文库亚基因组文库是相对于基因组文库提出的，文库的对象不是全基因组范围，而是基因组的某一区段，如基因组DNA某一特定大小酶切片段的组合、一条染色体或更小的区段（如一个YC或BAC克隆等）。2。构建大片段基因组文库过程中需要注意哪些问题?.均一化cN文库构建的基本原理是什么？mRAcDNA杂交方法的原理是用过量的驱动mRNA 与供体的cDNA文库质粒反复多轮杂交，去除驱动和供体共同表达的基因,构建均一化的、扣除杂交cNA文库.4。扣除cDNA的基本原理是什么?扣除杂交技术（uracebrd

34、ization)将含目的基因的组织或器官的mRNA群体作为待测样本(tester），将基因表达谱相似或相近但不含目的基因的组织或器官的mRNA群体作为对照样本(drver）。将teter和dve的DN进行多次杂交，去掉在二者之间都表达的基因，而保留两者之间差异表达的基因，使低丰度基因在文库中的比例大大提高，筛选到差异表达的基因的可能性也大大提高。5。全长cDNA文库构建的原理？。酵母双杂交的基本原理?酵母双杂交系统简称双杂交系统(ohbri tm）,也叫相互作用陷阱(interation ta)，是根据真核生物转录调控的特点创建的一种体内鉴定基因的方法。其筛选的基因不是探针的直接编码物，而是能

35、够与其相互作用的蛋白质的编码基因，即筛选与已知基因的产物发生相互作用的蛋白的编码基因.酵母双杂交系统的基本原理来自酵母转录激活因子（ranscitioa actiator)4是一种典型的转录因子，有两个功能域: 一是NA结合结构域(DNAbnding domn, BD）靠近羧基端,含有几个锌指结构,可与DN序列中半乳糖苷酶的上游激活序列(pstrem activangsquee， A)结合；二是转录激活结构域（ctiai domin, AD）, 可与RN聚合酶或转录因子FI相互作用,提高RA 聚合酶的活性。这两个结构域的功能是独立的.酵母双杂交系统利用融合蛋白的策略,将要筛选的“探针”蛋白X与

36、D融合为BD-X（通常称为诱饵, bat)；将所要筛选的对象Y与D构建成融合蛋白的DY DNA文库（即将目的NA与D基因构建融合基因文库),通常称Y为猎物(pry)；将它们导入酵母细胞中共表达,如果X与Y相互作用，则会导致D和AD在空间上接近形成一个有功能的转录激活因子，激活下游报告基因的表达.第十三章植物基因工程1植物基因转化受体系统具备的条件？.高效稳定的再生能力。较高的遗传稳定性c具有稳定的外植体来源d。对选择抗生素敏感e.对农杆菌有敏感性f是否具有经济价值或有潜在的生产应用价值.植物基因工程常用的受体系统有哪些?a.愈伤组织再生系统b。直接分化再生系统c原生质体再生系统生殖细胞受体系统

37、3.植物基因转化方法有哪些？a。原生质体介导法包括：PEG介导的基因转化脂质体介导基因转化电激法介导基因转化显微注射介导的基因转化激光微束介导的基因转化b。基因枪法c.根癌农杆菌介导法.农杆菌转化的基本原理?5什么是二元载体？和一元载体比有什么优点？二元载体(bnry ect)系统是指由两个分别含-DNA和Vir区的相容性突变质粒构成的双质粒系统因为其-DA与i基因在两个独立的质粒上，通过反式激活T-DNA转移，故称之为反式载体(trnsvetr).二元载体较一元载体有更多的优点：a.首先，二元载体的构建较为方便；而一元载体还需在根癌农杆菌中进行共整合，构建效率相对较低。其次，二元载体的外源基

38、因的转化效率要高于一元载体。所以目前在植物基因工程研究中主要使用二元载体系统。6植物转化常用的选择基因和报告基因有哪些？报告基因有什么特点?植物基因工程中的选择标记基因主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因.选择基因:与外界存在的筛选压力如抗生素等相互作用,以筛选出被转化的细胞；最常用的有新霉素抗性基因(neor）、庆大霉素抗性基因（gnt)、潮霉素磷酸转移酶(HPT）基因（hpt）,以及膦丝菌素乙酰转移酶基因（a）等。报告基因是指其编码产物能够被快速测定、常用于判断外源基因是否成功地导入受体细胞(器官或组织），是否启动表达的一类特殊用途的基因。提供一种快速测定外源基因是否成功导入的

39、检测手段，它的应用不依赖于外界选择压力的存在。理想的报告基因具备的基本要求报告分子不存在于宿主中或易于与内源性基因相区别;应有一个简单、快捷、灵敏及经济的分析方法；报告基因的分析结果应具有很强的线性范围，便于分析启动子活性的大小变化;报告基因的表达必须不改变受体细胞或生物体生理活动.最常用的报告基因葡萄糖甘酸酶基因（gus）氯霉素乙酰转移酶基因(ct）荧光素酶基因(luc绿色荧光蛋白（GFP）基因(gfp)等。7。转基因植株的鉴定方法有哪些,作为一组完整的转基因植株鉴定数据至少应包含哪些参数？a。PCR检测外源基因的整合b。Southrn杂交检测外源基因的整合cRT-PC 检测外源基因的表达d

40、Nortern杂交检测外源基因的表达e.Wete杂交检测外源基因表达的产物第十四章动物基因工程.简述反转录病毒在动物基因工程中的作用。2。试述基因敲除与基因敲入的区别.3质粒载体与病毒载体有何异同？表达载体:（1)带有原核复制区（2）带有选择性标记基因保证重组DN分子能够在大肠杆菌中扩增(3)必须包括能在真核细胞表达的相关组件一般包括转录外源DN序列的启动子元件、转录产物有效地加上p（)尾巴所必需的信号序列、真核细胞中的选择性标记，以及一些附加元件，如增强子、内含子、剪接供体与受体点，以保证外源基因的高效表达.病毒载体：携带外源基因并能包装成病毒颗粒;介导外源基因的转移与表达；对机体不致病。4

41、。简述转基因小鼠的制备过程.DNA显微注射法制备转基因小鼠胚胎干细胞法制备转基因小鼠D显微注射法制备转基因小鼠超数排卵对年轻、健康未孕母鼠（-5周龄）注射促性腺激素，诱导超数排卵，与种公鼠合笼交配。从输卵管的壶腹部收集原核期受精卵,排卵率一般可达30枚以上，但具体排卵多少受激素种类和小鼠品种影响较大.基因准备从整合率上看线形NA分子要好于环形DNA,而环形DNA在细胞内的半衰期较长，适用于瞬间表达与基因治疗。尽管载体序列不影响外源DA的整合效率,但载体序列能抑制转基因的表达，因此应尽量去除转基因结构中的载体部分。显微注射（)外源DNA进入原核(2）培养液中培养（3）进行冷冻保存，或直接用于移植，或继续培养发育到囊胚后再移植.胚胎移植胚胎：囊胚期或囊胚期之前的胚胎，可依据早期胚胎的发育阶段和物种的不同决定移植的部位。注射后的单细胞至桑葚期的胚胎应移植到05 假孕鼠的输卵管内，而达到囊胚期的胚胎则须转移至2。5 d假孕鼠子宫内。未经注射的新鲜胚胎的移植成功率为50%7，注射胚胎移植后的受胎率有所下降，仅为10%30%。转基因个体鉴定接受胚胎移植的假孕鼠产下的幼鼠是否含有外源基因？