饲料中氟虫腈的测定 液相色谱—串联质谱法.doc

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1、ICS 65.120B 46DB37山东省 地方标准DB 37/T 36292019饲料中氟虫腈的测定 液相色谱串联质谱法2019 - 07 - 23 发布2019 - 08 - 23 实施山东省市场监督管理局 发 布DB37/T 36292019I目 次前言.II1 范围.12 规范性引用文件.13 原理.14 试剂或材料.15 仪器设备.26 样品.27 试验步骤.27.1 提取.2 7.2 净化.2 7.3 标准工作曲线的制备.2 7.4 仪器测定.28 试验数据处理.49 精密度.4附 录 A （资料性附录） 氟虫腈标准溶液图谱.5DB37/T 36292019II前 言本标准按照GB

2、/T 1.12009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：山东省饲料质量检验所，青岛市华测检测技术有限公司。 本标准主要起草人：张芸、刘涛、刘雪芹、孙延军、莫贞峰、李斌、李俊玲。DB37/T 362920191饲料中氟虫腈的测定 液相色谱串联质谱法1 范围本标准规定了饲料中氟虫腈的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和植物源饲料原料中氟虫腈的测定。 本标准氟虫腈的检出限为0.002 mg/kg，定量限为0.

3、005 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备3 原理样品用乙腈提取，经C18固相萃取柱、液液分配净化后，液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂或材料除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 水：GB/T 6682，一级。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 乙酸铵：色谱纯。 4.5 甲酸：色谱纯。 4.6 80 %乙腈水溶液

4、：将 80 mL 乙腈与 20 mL 水混合均匀。 4.7 80 %甲醇水溶液：将 80 mL 甲醇与 20 mL 水混合均匀。 4.8 0.1 %甲酸水溶液（含 4 mmol/L 乙酸铵）：称取 0.308 g 乙酸铵于适量水中，准确加入甲酸 1 mL，用水定容至 1 000 mL。 4.9 氟虫腈标准储备液（1 mg/mL）：称取氟虫腈对照品（CAS：120068-37-3，纯度不低于 98.7 %） 10 mg(准确至 0.01 mg)于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇(4.2)溶解定容。-18 避光保存，有效期为 1 年。 4.10 氟虫腈标准工作液(100 g/mL)：准确移取氟虫

5、腈标准储备液（4.8）1 mL 于 10 mL 棕色容 量瓶中，用甲醇稀释定容。28 保存，有效期为 1 个月。 4.11 氟虫腈标准工作液(1 g/mL)：准确移取氟虫腈标准工作液（4.9）0.1 mL 于 10 mL 棕色 容量瓶中，用甲醇稀释定容。28 保存，有效期为 1 个月。 4.12 C18固相萃取柱：1 000 mg/6 mL，或性能相当者。DB37/T 3629201924.13 微孔滤膜：0.22 m，有机系。5 仪器设备5.1 液相色谱串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 5.2 电子天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 mg。 5.3 旋涡混合器。 5.4 离心

6、机：转速不低于 10 000 r/min。 5.5 固相萃取装置。 5.6 超声波振荡器。 5.7 氮吹仪。6 样品按GB/T 20195制备样品，至少200 g，粉碎过0.42 mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中避 光保存备用。7 试验步骤7.1 提取平行做两份试验。称2 g（准确至0.01 g）样品于50 mL离心管，准确加入25 mL乙腈(4.3)，振荡 提取20 min，4 500 r/min离心5 min，取上层乙腈2.5 mL于15 mL的离心管，加入0.5 mL水，涡旋混匀 待用。7.2 净化C18固相萃取柱分别用6 mL乙腈和6 mL水活化，接收加载液，于50 mL离心管

7、中，近自然滴干时， 再加入12 mL 80 %乙腈水(4.6)，并同时接收于上述离心管中，加入约1.5 g NaCl使上述溶液饱和，振 荡，4 500 r/min离心5 min，取上层乙腈层浓缩至干。准确加入4 mL 80 %甲醇水(4.7)溶液定容，过 0.22 m滤膜，待测。7.3 标准工作曲线的制备准确量取适量标准工作液，用80 %甲醇水溶液(4.7)稀释成浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 g/L的标准溶液，现用现配，供液相色谱-串级质谱仪测定。 对于基质效应较大的样品，采用基质空白溶液配制标准溶液进行定量。7.4 仪器测定7.4.1 液相色谱参考条件色谱柱：BEH C1

8、8柱，长50 mm，内径2.1 mm，粒径1.7 m，或性能相当者。 柱温：40 。 流速：0.3 mL/min。 进样量：1 L。 流动相：A为甲醇（4.2）；B为0.1 %甲酸水溶液（4.8），梯度洗脱条件见表1。DB37/T 362920193表 1 梯度洗脱程序表时间，min流速,mL/minA，%B，%1initial0.3109021.50.395533.50.395543.510.310907.4.2 质谱参考条件离子化模式及扫描方式：电喷雾负离子扫描（ESI-）。 检测方式：多反应检测（MRM）。 气帘气(Curtain GAS) 35 Psi。 碰撞气( Collision

9、GAS) 8 Psi。 喷雾电压(IonSpray Voltage) -2 500 V。 雾化源温度(Temperature) 400 。 雾化气(Ion Source GAS1) 55 Psi。 辅助加热气（Ion Source GAS2) 55 Psi。 定性离子对、定量离子对及电压、碰撞能量见表2。表 2 质谱参数名称离子对（m/z）DP(V)CE（V）定量离子434.9329.9-65-24 氟虫腈 定性离子434.9249.9-65-367.4.3 定性测定在相同试验条件下，待测物在样品中的保留时间与标准工作液中的保留时间相对偏差在2.5 %之 内，并且色谱图中定性离子对的相对丰度与

10、浓度接近的标准工作液中相应定性离子对的相对丰度进行 比较，若相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差7.4.4 定量测定在仪器最佳工作条件下，将标准工作溶液（从低浓度到高浓度）和试样溶液上机测定，以标准工 作液中氟虫腈定量离子的峰面积为纵坐标，氟虫腈浓度为横坐标绘制标准工作曲线，对样品进行定量。 试样溶液中氟虫腈的响应值应在标准工作曲线测定的线性范围内。超出线性范围的则用80 %的甲醇水 溶液（4.7）适当稀释后再进样分析。在上述色谱-质谱条件下，氟虫腈标准工作液特征离子的多反应 监测（MRM）色谱图参见附录A。相对离子丰度（

11、%）502050102010允许的相对偏差（%）20253050DB37/T 3629201948 试验数据处理试样中氟虫腈的含量以质量分数计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，多点校准按式(1)计算：.(1)式中： C 从标准曲线查得的试样溶液中氟虫腈的浓度，单位为微克每升（g/L）； V 上机液定容体积，单位为毫升（mL）； V1 提取液体积，单位为毫升（mL）； V2 分取体积，单位为毫升（mL）； m 试样的质量，单位为克（g）； n 上机测定的试样溶液超出线性范围后，进一步稀释的倍数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留3位有效数字。9 精密度在重复性条件下两次独立测试结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10 %。DB37/T 362920195A A附 录 A （资料性附录） 氟虫腈标准溶液图谱氟虫腈标准溶液的MRM色谱图见图A.1、图A.2。图 A.1 氟虫腈定量离子标准色谱图（浓度为 1 ng/mL）图 A.2 氟虫腈定性离子标准色谱图（浓度为 1 ng/mL）_