(5.29)--综合实验1血液凝固及其影响因素.pdf

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1、综合综合实验一实验一 血液凝固及其影响因素血液凝固及其影响因素 【实验目的】【实验目的】通过测定不同条件下的血液凝固时间，了解血液凝固的基本过程及加速和延缓血液凝固的因素。【实验原理】【实验原理】血液由流动的液体状态变成不能流动的凝胶状态的过程称为血液凝固（blood coagulation）。血液凝固的基本过程分为三步：凝血酶原酶复合物的形成；凝血酶原的激活；纤维蛋白（fibrin）的生成。根据凝血酶原酶复合物的形成途径不同，血液凝固可分为内源性凝血和外源性凝血两条途径。内源性凝血（intrinsic pathway）是指参与凝血过程的因子全部来自血液，由因子接触异面被激活而启动；外源性凝血

2、（extrinsic pathway）是指由来自于血液之外的组织因子暴露于血液而启动的凝血过程。某些理化因素和促进或延缓血液凝固。【实验对象】【实验对象】家兔。【实验材料】【实验材料】清洁小试管（107.5mm）1212 支，50ml 小烧杯 1 个，0.5ml 吸管 6 支，10ml 注射器，5号针头，滴管，试管架，恒温水浴器，秒表，哺乳动物手术器械一套，兔手术台，动脉夹，塑料动脉插管，试管刷，棉花。20乌拉坦,富血小板血浆，少血小板血浆，兔肺组织浸液，0.025molCaCl2溶液，生理盐水，肝素 8 单位（置小试管内），3.8%枸橼酸钠，1%草酸钾溶液，1%CaCl2溶液，稀释凝血酶溶液

3、，石蜡油，碎冰块。【实验方法和步骤】【实验方法和步骤】1.前期准备 按备注中的方法提前制备好富血小板血浆、少血小板血浆、肺组织液、凝血酶溶液，置 4低温储存备用。2.试管准备 取 9 支干洁的小试管，编号后按表 12-1-1 的顺序准备不同的实验条件，放于试管架上。3.动物准备 家兔称重后,从耳缘静脉缓慢注入 20乌拉坦（5ml/kg），待其麻醉后背位固定于手术台。剪去颈部的毛，沿正中线切开颈部皮肤约 5cm7cm，分离皮下组织和肌肉，暴露气管，在气管两侧的深部找到颈总动脉。分离出一侧颈总动脉，其下穿过两条丝线。一条将动脉于远心端结扎，另一条备用（固定动脉插管）。在颈总动脉近心端用动脉夹夹闭动

4、脉，然后在远心端结扎点的下方用剪刀作一斜形切口，向心脏方向插入动脉插管，然后用丝线固定。需放血时开启动脉夹即可。4.观察项目（1）观察加速和延缓血液凝固的因素：取干洁的小试管 8 支，按表 13-1-1 准备各种不同的实验条件。由颈总动脉插管放血，各管加血 1ml，即刻开始计时（6、7、8 号试管加入血液后轻轻摇匀，使血液与试剂充分混合），每 30s 倾斜试管一次，直至血液凝固而不再流动为止。表表 1 13 3-1 1-1 1 影响血液凝固的因素影响血液凝固的因素 实验条件 凝血时间 机制 1.对照管 2.石蜡油润滑整个试管内表面 3.放少许棉花 4.37恒温水箱中 5.置于盛有碎冰块的烧杯中

5、 6.肝素 8 单位 7.1%草酸钾溶液 0.1ml 8.3.8%枸橼酸钠 0.2ml （2）观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用：由颈总动脉插管放血 10ml，分别注入两个小烧杯内。一杯静置，观察血液是否发生凝固现象。另一杯用带有橡皮刷的玻棒或竹签不断地搅拌，取出玻棒或竹签，用水洗净，观察缠绕在玻棒或竹签上的纤维蛋白；并观察去除纤维蛋白后的血液是否会发生凝固？（3）Ca2+在血液凝固中的作用：上表 6、7、8 项处理中，如观察 2030min 后血液仍未发生凝固，加入 1%CaCl2 0.1ml，观察血液是否凝固。（4）观察内源性及外源性凝血过程以及血小板在凝血过程中的作用：取干洁的小试管3 支

6、，按表 1-1-2 分别加入试剂，最后同时加入 0.025mol CaCl2溶液，摇匀，每 15s 倾斜一次，分别记录三支试管的血浆凝固时间。表表 1 1-1 1-2 2 内源性和外源性凝血途径的观察内源性和外源性凝血途径的观察 第一管 第二管 第三管 富血小板血浆 0.2ml 少血小板血浆 0.2ml 0.2ml 生理盐水 0.2ml 0.2ml 兔肺组织浸液 0.2ml 1/40molCaCl2 0.2ml 0.2ml 0.2ml 血浆凝固时间 分别比较第二管和第三管、第一管和第二管的血浆凝固时间，分析产生差别的原因。（5）凝血酶时间的测定：取小试管 1 支，加入少血小板血浆 0.2ml、

7、稀释的凝血酶溶液 0.2ml，即刻摇匀置 37恒温水箱中，同时开动秒表。不断倾斜试管，密切观察并记录血浆凝固时间，此即“凝血酶时间”。【注意事项】【注意事项】1.（1）和（2）两个观察项目可同时进行，可只放血一次，如果有必要进行第二次放血时，最先由血管内流出的血液应弃去。2.加强组织工作，合理分工，事先安排好取血顺序和准备各试管实验条件。【讨论题】【讨论题】1.分析本实验每一项结果产生的原因。2.根据本实验观察项目（4）的结果比较血液凝固的内源性途径与外源性途径的区别。3.凝血酶时间延长有何临床意义。【附录】【附录】1.富血小板血浆的制备 取 0.1M 柠檬酸钠抗凝全血（1 份抗凝剂加 9 份

8、静脉血），以1000r/min，离心 10min，取上层血浆。2.少血小板血浆的制备 取上述同样抗凝血以 4000 r/min，离心 30min，取上层血浆。3.肺组织液的制备 取新鲜兔肺，剪成小块研磨成糊。加 23 倍体积的生理盐水，摇匀。静置 6 h 以上，离心，取其上清液。4.凝血酶溶液的制备 取新鲜血浆 100ml，加蒸馏水至 1000 ml，将 2%醋酸溶液 8.5 ml加入稀释的血浆中，使其 pH 约在 5.3 左右，此时产生白色混浊，离心后弃掉上清液。用 25 ml 生理盐水溶解沉淀物，加入 2%Na2CO3 0.25 ml，使其 pH 在 7 左右，再加 0.25M CaCl2 3 ml，用玻璃棒将凝结的纤维蛋白搅去，剩下的溶液即为凝血酶溶液。