血清人附睾蛋白4在卵巢良_恶性肿瘤诊断的临床价值_杨芸.docx

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1、 分类号： R71 学校代码 10062 密级： 学号 20093181 学位类别：科学学位口 专业学位 0 学科门类：医学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取 得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不 包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： Th日期：如年 , 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定， 即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进

2、行检索，并采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有 关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。 保密 ，在 _ 年解密后适用本授权书。 本论文属于 不保密 E。 (请在相对应的方框内打 “ v ” ） 学 位 论 文 作 者 签 名 ： 円 期 . 月士肖 导 师 签 名 ： F 丨期 : 厂月卜日 中文摘要 目的： 对卵巢癌、卵巢良性肿瘤和健康妇女的血清 HE4 浓度进行研究，并与血清 CA125 浓度比较，分析血清 HE4 浓度与年龄、绝经状态、卵巢癌病理分期、组织 分型的关系，探讨其对卵巢癌鉴别诊断及早期诊断的临床价值，以期对 HE4 作一 较为客观全面的

3、评价。 方法： 采用血清肿瘤标志物检测方法对 294 例卵巢癌、卵巢良性肿瘤和健康妇女 HE4 及 CA125 浓度进行分析。检测结果以中位数表示，血清 HE4 和 CA125 正常值 分别为 0-150pmoL/L和 0-35U/mL,标志物高于正常值即定为阳性；二者联合 检测时任一标志物髙于正常上限即为阳性值。本研究采用 SPSS 13.0 软件进行统 计学处理，数据非正态分布，用非参数检验 Mann-Whitney U 和 Kruskal-Wallis H 检验比较（健康对照组、卵巢癌组和卵巢良性肿瘤组）各组的血清 HE4 及 CA125 中位数是否具有统计学的意义 （ /?)，装液性卵

4、巢癌血清 114、匚八 125 浓度中位数 高于其它组织分型的卵巢癌，差异比较有显著性（ /?50 year-old) was higher than that in the younger age-group (p 中位数 范围 中位数 范围 全部 294(100) 28.14 5.59-4407 45.28 3.00-1486.87 分组 健康对照组 50 (17.0) 21.00 10.65-32.18 23.77 7.04-49.64 良性肿瘤组 167 (56.9) 26.25 5.59-1163 41.54 3.91-238.27 卵巢癌组 77(26.1) 80.78 7.87-

5、4407 69.56 3.00-1486.87 P 值 35kU/L 为界值，其敏感性、特异性、准 确性分别为 57. 7%、 76. 5%、66. 7% 5。在卵巢上皮性癌中，大约 80%患者 CA125 升高，早期卵巢癌患者中 ，CA125 阳性率不足 50%，特异度也仅 75%。而且，还 有诸多因素影响 CA125 的检测，包括腹部手术、多次进行肿瘤细胞的放射免疫显 像以及大量放腹水。大量研究转向多项标志物或标志物和成像方法联合筛查以提 高早期卵巢癌的检出率，然而反复的血清学检测使筛查策略变得复杂而且提高了 成本。卵巢癌处于早期阶段是一 个相对可控的恶性肿瘤，但晚期发现时，预后总 是较差

6、。研究人员一直在积极致力于发现 一 个更可靠的生物指标，来帮助早期发 现卵巢癌以及治疗、监测。近 5 年研究发现 HE4 对卵巢癌的早期诊断和鉴别具有 重要价值，被誉为 25 年来第一个有效的新的卵巢癌标志物。 2 HE4 的结构、功能及其在组织中的表达 HE4 基因，又称为 WFDC 2 (WAP four-disulfide core domains 2,WAP 4 个二硫 键核结构域 ） ，是 Kirchhoff 等 6m于 1991 年在人附睾远端上皮细胞中发现的，并 认为 HE4 为 WFDC2 基因的编码产物，是一个酸性、小的单信号肽和半胱氨酸丰富 的多肽为特点的分泌蛋白，是乳酸蛋

7、白 （ whey acidic protein,WAP )结构域家族中 天津医科大学硕士学位论文 _ 讨论 的一员， WAP 结构域是由近 50 个氨基酸组成的保守序列和由以 8 个半胱氨酸为特 点的 4 个二硫键核心区组成，其编码产物为具有各种不同功能的。 Hellstrom 等筛 选获得了 HE4 蛋白，同样证明 HE4 是 WFDC2 基因的表达产物，证明在 WAP 结构 域中有一个抑制性的环结构，可以插 入到蛋白酶活性结构区而达到抑制蛋白酶 的作用还有研究表明，卵巢癌分泌的 HE4 是 N-糖基化的分泌型蛋白，其相 对分子质量为 25xl 3，远小于相对分子质量为 （ 200-1000

8、) xl 3的 CA125,这可能 是在卵巢癌早期 HE4 比 CA125 更容易分泌进入外周血的主要原因 2,7。此项研究 结果表明 HE4 可能会在早期诊断中发挥比 CA125 更有效的价值。 Kirchhoff 等 6研究发现 ,HE4 主要表达于附睾的远端上皮细胞和输精管上皮 细胞中 ,HE4mRNA 编码的分泌蛋白与细胞外蛋白酶抑制剂有同源性，且在男 性生殖系统上皮细胞的内质网中合成，推测其可能在精子成熟的过程中有重要 作用。人分泌性白细胞蛋白酶抑制剂 （ secretory leukocyte protease inhibitor, SLPI) 和肺弹性蛋白酶抑制剂 （ elast

9、ase-specific inhibitor;Elafin)是目前研究 4-二硫键核 心家族中最多的 2种蛋白酶抑制剂，他们分别包含了 2个和 1个 WAP结构域。 340 岁女性 35kU/L 为界值，其敏感性、特异性、准 确性分别为 57. 7%、 76. 5%、 66. 7% 5 。在卵巢上皮性癌中，大约 80%患者 CA125 升高，早期卵巢癌患者中， CA125 阳性率不足 50%，特异度也仅 75%。而且，还 有诸多因素影响 CA125 的检测，包括腹部手术、多次进 行肿瘤细胞的放射免疫显 像以及大量放腹水。大量研究转向多项标志物或标志物和成像方法联合筛查以提 高早期卵巢癌的检出率

10、，然而反复的血清学检测使筛查策略变得复杂而且提高了 成本。卵巢癌处于早期阶段是一个相对可控的恶性肿瘤，但晚期发现时，预后总 是较差。研究人员一直在积极致力于发现一个更可靠的生物指标，来帮助早期发 现卵巢癌以及治疗、监测。近 5 年研究发现 HE4 对卵巢癌的早期诊断和鉴别具有 重要价值，被誉为 25 年来第一个有效的新的卵巢癌标志物。 2 HE4 的结构、功能及其在组织中的表达 2. 1 HE4的结构 HE4 基因，又称为 WFDC 2 (WAP four-disulfide core domains 2, WAP 4 个二 硫键核结构域 ），是 Kirchh ff5,6于 1991 年在人附

11、睾远端上皮细胞中发现的，并 认为 HE4 为 WFDC2 基因的编码产物，是一个酸性、小的单信号肽和半胱氨酸丰富 的多肽为特点的分泌蛋白，是乳酸蛋白 （ whey acidic protein,WAP )结构域家族中 的一员 ,WAP 结构域是由近50个氨基酸组成的保守序列和由以 8个半胱氨酸为特 点的 4个二硫键核心区组成，其编码产物为具有 各种不同功能的小分子分泌性蛋 白 7。该基因位于人染色体20ql2-13.1。 Hellstrom 等筛选获得了 HE4 蛋白 ，同 样证明 HE4 是 WFDC 2 基因的表达产物，证明在 WAP 结构域中有一个抑制性的环 结构，可以插入到蛋白酶活性结

12、构区而达到抑制蛋白酶的作用 5689。还有 研究表明，卵巢癌分泌的 HE4 是 N-糖基化的分泌型蛋白，其相对分子质量为 25xl 3， 远小于相对分子质量为 （ 200-1000) xl 3的 CA125,这可能是在卵巢癌早 期 HE4 比 CA125 更容易分泌进入外周血的主要原因 3 6。 天津医科大学硕士学位论文 _ 综述 2. 2 HE4 的功能 附睾是精子成熟的主要场所，一些与 HE4 结构类似的小分子蛋白酶抑制具有 抑制顶体蛋白酶或去获能因子的作用，与受精过程密切相关 140 岁女性 62.4pmol/L， 此参考值和来源于欧美人群的 试剂盒150pmol/L 差距很大。因此仍然

13、建议各地在以血清 HE4 参考区间作为标准 筛选肿瘤时，应注意使用各自不同的标准。目前，康乃格公司根据近年来众多的 研究报道，正准备将 HE4 试剂盒的参考值调整为 0-75pmol/L。 展望 20%的妇女一生中有患盆腔肿块的可能，因此无创伤方法鉴别诊断良、恶性 盆腔肿块十分重要。综上所述，血浆标志物 HE4 具备了无创伤、相对价格便宜、 高敏感性、高特异性等特点，鉴别卵巢良、恶性肿瘤的敏感度和特异度均优于 CA125,在卵巢癌的早期诊断、疾病监测和盆腔肿块的恶性风险评估方面具有很 好的应用前景。但是，由于卵巢癌的异质性，需要 HE4 和 CA125 结合进行早期筛 查，必要时联合阴道超声及

14、 MRI 检查。将来，我们继续完善对早期卵巢癌筛查的 方法及随访等多方面开展广泛研究，并找出适合我国的 HE4 参考值范围。 综述参考文献 1 Barbieri RL. In women who have a pelvic mass Have you tried this new ovarian C a biomarker? JJ.OBG anagement,2010,22(4);8-12. 2 Pickle LW, Hao Y, Jemal A, et al. A new method of estimating United States and state21evel cancer in

15、cidence counts for the current calendar year J.CA Cancer J Clin,2007,57(1): 30-42. 3 Drapkin R, Lin Y,Mok SC, et al. Human epididymis protein 4 (HE4) is a secreted glycoprotein that is over expressed by serous and endometrioid ovarian carcinom- asJ. Cancer Res, 2005, 65(6): 2162-2169. 4 穆玉兰，刘鸣，汤春生 .

16、卵巢癌筛查研究进展 J.中国实用妇科与产科杂志，2007, 23(10): 804-805. 5 Kirchhoff C? Habben I, Ivell R, et al. A major human epididymis-specific cDNA encodes a protein with sequence homology to extracellular proteinase inhibitors J. Biol Reprod， 1991， 45(2):350-357_ 6 Kirchhoff C. Molecular characterization of epididymal

17、proteinsJ. Rev Reprod, 1998, 3: 86-95. 7 Bingle L? Singleton V, Bingle CD. The putative ovarian tumour marker gene HE4 (WFDC 2), is expressed in normal tissues and under goes com- plex alter- native splicing to yield multiple protein isoforms J.Oncogene, 2002, 21 (17): 2768-2773. 8 Clauss A, Lil ja

18、H, Lundwall A. A locus on human chromosome 20 contains several genes expressing protease inhibitor domains with hom- ology to whey acidic protein J.Biochem J,2002, 368(1): 233-242. 9 Clauss A, Lil ja H, Lundwall A. The evolution of agenetic locus encoding small serine proteinase inhibitorsJ.Biochem

19、Biophys Res Commun, 2005, 333(2): 383- 389. 10 Richardson R, Buckingham L, Boettger H, et al. A monoclonal antibody to a zona pellucida-proteinase inhibitor binding component on murine sperms- tozoaJ. J Reprod Immunol, 1987,11(2): 101-116 . 1 lJTopfer-Petersen E, Ekhlasi-Hundrieser M, Tsolova M, et

20、al.Structure and function of secretory proteins of the male Genital tractJ.And rologia, 2005, 37(6): 202-204 . 12 Bingel L, Cross S S, High A S? et al. WFDC2 (HE4): a potential role in the in- 33 天津医科人学硕士学位论文 _ 综述参考文献 nate immunity of the oral cavity and respiratory tract and the development of aden

21、ocarcinom as of the lungJ.Respir Res, 2006,7:61. 13 Galgano M T, Hampton G M, Frierson H F Jr. Comprehensive analysis of HE4 expression in normal and malignant human tissuesJ .Mod Pathol, 2006,19(6): 847-853. 14 Wang K, Gan L, JefferY E, et al. Monitoring gene expression profile changes in ovarian c

22、arcinom as using cDNA microarrayJ.Gene, 1999, 229(1-2) : 101-108. 15 Schummer M, NG W V, Bumgarner R E, et al. Comparative hybridization of an array of 21， 500 ovarian cDNAs for the discovery of genes overexpressed in ova- rian carcinomasJ.Gene.l999.238 (2): 375-385. 16 Galgano MT? Hampton GM? Frier

23、sonHF Jr. Comprehensive analysis of HE4 expression in normal and malignant human tissuesJ . Mod Pathol 2006,1 9(6): 817-853. 17 KbelM, Kalloger SE, Boyd N, et al. Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies J . PlosMed, 2008, 5(12): 232. 18 Moorer G, BrownA

24、K, Miller M C, et al. Utility of a novel serum tumor biomarker HE4 in patients with endometrioid adenocarcinoma of the uteras J. Gynecol Oncol， 2008, 110 (2):196 201. 19 Rustin GJ, Bast RC Jr, Kelloff GJ? et al.Use of CA-125 in clinical trial evaluation of new therapeutic drugs for ovarian cancerJ.

25、Clin. Cancer Res, 2004, 10(11): 3919-3926. 20 Gadducci A, Cosio S, Carpi A， Nicolini A， Genazzani AR. Serum tumor markers in the management of ovarian, endometrial and cervical cancerJ. Biomed Phar- macother,2004,58(l):24-38. 21 Schummer M? Ng WV? Bumgarner RE et al. Comparative hybridization of an

26、array of 21,500 ovarian cDNAs for the discovery of genes over expressed in ovarian carcinomas. Gene,1999,238(2):375*385. 22 Lowe KA, Shah C, Wallace E et al. Effects of personal characteristics on serum CA125, mesothelin, and HE4 levels in healthy postmenopausal women at high- risk for ovarian cance

27、r J. Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev, 2008, 17(9): 2480-2487. 23 Scholler N, Lowe KA, Bergan LA et al. Use of yeast-secreted in vivo biotinyla- 天津医科人学硕士学位论文 _ 综述参考文献 ted recombinant antibodies (Biobodies) in bead-based ELISAJ. Clin. Cancer Res,2008,14(9):2647-2655. 24 Hellstrom I, Raycraft J , Sch

28、ummer M? et al. The HE4 (WFDC2) protein is a biomarker for ovarian carcinoma J. Cancer Res, 2003,63(13):3695-3700. 25 Engelen M J, KosH E, Willemse PH, et al. Surgery by consultant gynecologic oncologists improves survival in patients with ovarian carcinomaJ. Cancer, 2006,106(3): 589-598. 26 Huhtine

29、n K, Suvitie P, H iissa J, et al. Serum HE4 concen tration differentiates malignant ovarian tumours from ovarian endometriotic cystsJ. Br J Cancer, 2009,100(8):1315-1319. 27 刘亚南，叶雪，程洪艳，等 .HE4 联合 CA125 鉴别诊断卵巢子宫内膜异位囊肿 J.中华妇产科杂志 ,2010,5(45):363-366. 28 Barbieri RL. In women who have a pelvic mass Have

30、you tried this new ovarian C a biomarker? J, OBG Management, 2010,22( 4): 8-12. 29 Bromley B, Goodman H? Benacerraf BR. Comparison between sonographic morphology and Doppler waveform for the diagnosis of ovarian malignancyJ.Obst- et Gynecol, 1994,83(3): 434-437. 30 Woolas RPOram DH, Jeyarajah AR， et

31、 al. Ovarian cancer identified through scr， eening with serum markers but not by pelvic imagingJ. Int J Gynecol Cancer, 1999,9(6):497-501. 31 Woolas RP? Xu FJ, Jacobs IJ, et al. Elevation of multiple serum markers in pati ents with stage I ovarian cancerJ. J Nat 1 Cancer Inst,1993,85(21):1748-1751.

32、32 Van Haaften-Day C,Shen Y,Xu F, et al. OVX1, macrophage-colony stimuating factor, and CA-125-II as tumour markers for epithelial ovarian carcinoma: a critical appraisalJ.Cancer, 2001,92(11):2837-2844. 33 Havrilesky L J, Whitehead C M, Rubatt J M, et al.Evaluation of biomarker pan els for early sta

33、ge ovarian cancer detection and monitoring for disease recunence J. Gynecol Oncol,2008,110(3): 374-382. 34 Nolen B,Velikokhatnaya L,Marrangoni A,et al.Serum biomarker panels for the discrimination of benign from malignant cases in patient with an adnexal mass J.Gynecol Oncol,2010,117(3) : 440445. 35

34、 Miriam Lenhardl, Petra Stieber, Linda Hertleinl et al. The diagnostic accuracy 天津医科大学硕士学位论文 _ 综 述 参考 文献 two human epididymis protein 4 (HE4) testing systems in combination with CA125 in the differential diagnosis of ovarian massesJ.Clin Chem Lab Med, 2011,49(12):976-984. 36 Martina Montagnanal, Eli

35、sa Danesel, Orazio Ruzzenentel et al. The ROMA (Risk of Ovarian Malignancy Algorithm) for estimating the risk of epithelial ovarian cancer in women presenting with pelvic mass: is it really useful? J.Clin Chem Lab Med， 2011,49(3):521-525. 37 成夜霞 ,昌晓红，叶雪，等 .血清 HE4 和 CA125 联合检测预测盆腔包块患者卵巢癌 的风险 J 现代妇产科进

36、展 ,2009， 18(12): 261-265. 38 Andersen MR, Goff BA, Lowe KA, et al. Use of a Symptom Index, CA125, and HE4 to predict ovarian cancerJ. Gynecol Oncol,2010,l 16(3): 378-383. 39 Nyvang GB, Mogensen O, Bichel P, et al. Combined prognostic importance of CA125, histopathologic grade and DNAindex in advance

37、d ovarian cancerJ. Eur J Gynaecol Oncol, 2000, 21(6):569-572. 40 Low RN, Saleh F, Song SY, et al. Treated ovarian cancer:comparis on of MR imaging with serum CA-125 level and physical examination - A longitudinal studyJ, Radiology, 1999,211(2):519-528. 41 卢仁泉，郭林，沈烨红 .HE4 在卵巢癌诊治中的临床应用评价 J,中国癌症杂 志， 2

38、10,20， (9):680-685. 42 王术艺，谢永红，张杰，等 .HE4 和 CA125 联合检测在卵巢癌手术前后临床 价值评价 J.河北医药杂志， 2009,31(5): 564-565. 43 Havrilesky LJ, Whitehead CM, Rubatt JM? et al. Evaluation of biomarker panels for early stage ovarian cancer detection and monitoring for disease recurrence J. Gynecol Oncol,2008?110(3):374-382. 44

39、 Anastasi E, Marchei GG, Viggiani V, et al. HE4 : a new potential early biomar ker for the recurrence of ovarian cancerJ.Tumour Biol, 2010,31(3): 113- 119. 45 程洪艳 ,刘亚南，叶雪，等 .血清人附睾分泌蛋白 4 (HE4)和 CA125 在卵巢癌患者 手术及化疗前后的变化 J.中国妇产科临床杂志 ,2011,12(3):212-215. 46 Dong L,Chang XH, Ye X ?et al. The values of ser

40、um human epididymis 医学杂志 ,2009,32(12):1376-1378. 天津医科大学硕士学位论文 致谢 值此论文完成之际，感谢老师张虹主任对我的培养，我每一次进步的取得 都离不开她辛勤的教育和悉心的指导，同时她敏锐的学术思维、严谨求实的治 学态度、忘我的工作热情、渊博的学识、独到的见解和宽以待人的处世态度深 深影响和教育着我，使我受益匪浅并将获益终生，永远鞭策我勇攀新的高峰。 在这里我谨向张虹老师表示衷心的感谢和崇高的敬意。 衷心感谢天津市中心妇产科医院肿瘤科曲芄亢主任、高燕主任、赵桂玲主 任在实验及临床实习过程中给予我的指导。每当我遇到困难时，她们的热情鼓 励是我现在以至将来前进的不竭动力。 衷心感谢在天津市中心妇产科医院妇科、产科、肿瘤科、计划生育科学习、 工作期间各位主任、同事给予我的关心和指导。 衷心感谢天津市中心妇产科医院检验科对我实验工作的大力支持与帮助。 感谢我的家人，是他们给予我事业上不断进取、学业上不断追求的巨大动 力。本人的点滴成功都凝聚着他们的鼓励。 感谢研究生院全体老师三年来给予我的培养。 感谢所有曾经关心我、鼓励我、帮助我的老师、同事、同学和亲友，愿他 们身体健康！ 最后，对百忙中参与评审论文的各位专家表示感谢。