大肠菌群计数检验重点1318.pptx

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1、大肠菌群计数检验大肠菌群计数检验v大肠菌群是指一群在大肠菌群是指一群在37C培养培养24小时能分解乳糖产酸小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。v作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义v食品中大肠菌群数系以每食品中大肠菌群数系以每100g或或mL检样内大肠菌群检样内大肠菌群最可能数最可能数themostprobablenumber-简称简称MPN表示。表示。第一页，共十五页。旧国家标准旧国家标准第二页，共十五页。第一法第一法大肠菌群大肠菌群MPN计数法计数法第三页，共十五页。第二法第二法大肠菌

2、群平板计数法大肠菌群平板计数法第四页，共十五页。第一天第第1、3、5、7小组：小组：使用第一法附带做第二法中，两个平使用第一法附带做第二法中，两个平板接种，以自来水为样品。板接种，以自来水为样品。第第2、4、6小组：小组：使用第二法附带做第一法中，使用第二法附带做第一法中，3个试个试管初发酵试验，以污水为样品。管初发酵试验，以污水为样品。第五页，共十五页。第一法：检样稀释与初发酵试验第一法：检样稀释与初发酵试验vMPN：表示食品中大肠菌群数是以每：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用数。一般采用9管法管法.v一般样品一般样品25M

3、L克克+225ML生理盐水生理盐水=1：10，从，从10-1取样取样1ML，接种到，接种到3管管LST月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤中。月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤中。v从从10-1取样取样1ML+9ML生理盐水生理盐水=1：100，从，从10-2取样取样1ML，接，接种到种到3管管LST中。中。v从从10-2取样取样1ML+9ML生理盐水生理盐水=1：1000，从，从10-3取样取样1ML，接种，接种到到3管管LST中。中。第六页，共十五页。第二法：检样稀释与平板计数第二法：检样稀释与平板计数检样稀释：同上。检样稀释：同上。平板计数：平板计数：1、每个稀释度接种、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿个无菌

4、平皿，每皿1mL稀稀释样品，另外一个平皿加释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空生理盐水作空白对照。白对照。2、及时将、及时将1520mLVRBA结晶紫中性红胆结晶紫中性红胆盐琼脂倾注每个平皿中。盐琼脂倾注每个平皿中。3、待琼脂凝固后，再加、待琼脂凝固后，再加34mLVRBA覆盖表覆盖表层。翻转平板培养。层。翻转平板培养。第七页，共十五页。第二天第二天v第一法第一法 复发酵试验复发酵试验v 用接种环从产气的用接种环从产气的LSTLST肉汤管中分别肉汤管中分别取培养物取培养物1 1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤BGLBBGLB管中，管中，361361培养培养48h2h48

5、h2h，观察，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。第八页，共十五页。v第二法第二法 平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择与证实试验平板菌落数的选择平板菌落数的选择v选取菌落数在选取菌落数在15CFU15CFU150CFU 150CFU 之间的平板，分别计数平板之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm 0.5mm 或更或更大。大。证实试验证实试验v从从VRBA VRBA 平板上挑

6、取平板上挑取1010个不同类型的典型和可疑菌落，分别个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于移种于BGLB BGLB 肉汤管内，肉汤管内，36 1 36 1 培养培养24 h24 h48 h48 h，观，观察产气情况。凡察产气情况。凡BGLB BGLB 肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性性。第九页，共十五页。2原理原理溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变呈蓝紫色，说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说呈蓝紫色，说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖产酸的大肠菌群。明可能出现

7、能分解乳糖产酸的大肠菌群。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。第十页，共十五页。1产气 2不产气杜氏发酵管产气情况杜氏发酵管产气情况第十一页，共十五页。第十二页，共十五页。第四天：大肠菌群计数报告第一法：第一法：确证大肠菌群确证大肠菌群LST阳性管数，检索阳性管数，检索MPN表见附录，报告每表见附录，报告每gmL样样品中大肠菌群的品中大肠菌群的MPN值。值。第十三页，共十五页。第二法：第二法：经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫

8、中性红胆盐琼脂中性红胆盐琼脂VRBAVRBA中计数的平板菌落数，再乘中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每以稀释倍数，即为每g gmLmL样品中大肠菌群数。例：样品中大肠菌群数。例：10-410-4样品稀释液样品稀释液1mL1mL，在，在VRBAVRBA平板上有平板上有100100个典型和可个典型和可疑菌落，挑取其中疑菌落，挑取其中1010个接种个接种BGLBBGLB肉汤管，证实有肉汤管，证实有6 6个阳个阳性管，那么该样品的大肠菌群数为：性管，那么该样品的大肠菌群数为：1006/10104/g1006/10104/gmLmL=6.0105CFU/g=6.0105CFU/gmLmL。第十四页，共十五页。内容总结大肠菌群计数检验。MPN：表示食品中大肠菌群数是以每100ML或克检样内大肠菌群最大可能数。1、每个稀释度接种2个无菌平皿，每皿1mL稀释样品，另外一个平皿加1mL生理盐水作空白对照。3、待琼脂凝固后，再加34mLVRBA覆盖表层。溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变呈蓝紫色，说明无产酸的大肠菌群。分解乳糖产酸产气的大肠菌群，看小倒管中的气体。第二法：第十五页，共十五页。