DB1301_T238-2017水貂阿留申病碘凝集试验操作规程.docx

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1、B 41DB1301石家庄市地方标准DB 1301/T 2382017水貂阿留申病碘凝集试验操作规程2017-10-10 发布2017-11-30 实施石家庄市质量技术监督局发布DB 1301/T 2382017前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由石家庄市农业局提出。本标准起草单位：石家庄市农林科学研究院。本标准起草人：任二军、刘洁、刘进军、李伟、韩学良、荣敏、涂剑峰、邵西群、邢立民。DB 1301/T 2382017水貂阿留申病碘凝集试验操作规程1 范围本标准规定了水貂阿留申病碘凝集试验操作过程中材料准备、血样采集及碘凝集试验操作技术等内容。本标准适用于水貂养

2、殖场阿留申病的初筛。2 术语和定义下列术语和定义适用于本文件。2.1 阿留申病阿留申病又称浆细胞增多症，是由一种主要侵害水貂免疫细胞的阿留申病毒（ADV）引起的，导致自身免疫系统紊乱、缓慢发展的进行性衰弱的疾病，同时并发强烈的自身免疫的慢性传染性疾病。3 材料准备及血样采集3.1 材料毛细采血管（20 uL肝素钠抗凝的毛细玻璃管，长度75 mm，直径1.55 mm）、玻璃板（10 cm10 cm）、毛细管盒、记号笔、标签纸、指甲刀、工业橡皮泥、10 uL移液器、牙签。3.2 血样采集3.2.1 采血时间每年结合选种工作采血3次，采血次序及时间见表1。表1采血次序及时间表采血次序采血时间第1次分

3、窝初选时第2次9-11月份终选时第3次翌年2月份配种前3.2.2 编号将水貂以12只为一组与毛细管盒一一对应进行编号，编号方法为栋舍号+笼号。3.2.3 采血1DB 1301/T 23820173.2.3.1 水貂保定保定者戴上棉手套从笼内抓取水貂，在该笼的产箱上进行保定。3.2.3.2 血样采集术者一手固定水貂后爪，另一手取灭菌的指甲刀在趾甲与趾垫的结合处剪断趾甲，弃去第一滴血，然后将毛细采血管一端轻触血滴，待血流入管的2/3处，用手指堵住毛细采血管的上端，另一端垂直插入工业用橡皮泥进行封口。3.2.3.3 血样保存采血管按照编号顺序放入毛细管盒中，将毛细管封口端朝下竖直放置，如果不能及时检

4、测，宜放置在4 冰箱中保存。4.1.1 备检血浆的制备采集的血样可用毛细采血管专用离心机2500 rpm3000 rpm离心10 min，也可在室温或4 冰箱内放置过夜析出血浆。溶血的血样应弃去，重新采集。4 碘凝集试验4.1 试剂4.1.1 鲁戈氏碘液使用市售鲁戈氏碘液，保存方法按说明书要求操作。4.1.2 自配试剂称取碘化钾4 g、碘颗粒2 g、蒸馏水30 mL，先将碘化钾用少量的蒸馏水溶解于玻璃烧杯中，再加入碘颗粒，震荡使其充分溶解，最后加入剩余的蒸馏水，充分混匀，放置于棕色瓶，静置24 h即可使用，4 冰箱保存。4.2 操作方法将干净的玻璃板平放，划成24个方格，横数4个格，纵数6个格

5、，每格2.5 cm1.5 cm，用砂轮轻划毛细采血管血浆与红细胞界面，掰断毛细管，用10 uL的移液器将血浆吹出，按顺序滴到玻璃方格内，每滴血浆旁加10 uL的碘凝集试剂，然后用牙签将二者混匀，每个血样更换一个牙签。4.3 结果判定混匀后，1分钟内进行观察，结果判定见表2。表2碘凝集试验结果判定序号现象结果判定结果记录1出现显著的棕色不规则絮状或颗粒状沉淀物强阳性+2有明显颗粒状沉淀物阳性+3有微弱的颗粒状沉淀物阳性+2DB 1301/T 23820174无颗粒状沉淀物，但颜色与碘凝集试剂不同疑似5无颗粒状沉淀物，颜色与碘试剂颜色相同阴性-4.4 记录记录内容包括血样编号、结果、检测时间、检测人等。3