荧光衍生试剂在高效液相色谱和电泳中应用.pptx

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1、 衍生的目的 衍生发应方式 荧光衍生试剂的构成引 言第1页/共31页衍生化反应方式衍生化反应方式 在线 (on line)离线 (off line)从衍生反应的场所来分 柱前衍生化(pre-column derivatization)柱上衍生化(on-column derivatization)柱后衍生化(post-column derivatization)从是否与仪器联机的角度来分 从是否形成共价键来分 标记 非标记 第2页/共31页荧光衍生试剂的基本构成荧光衍生试剂的基本构成取代基荧光团（试剂分子母体）反应基团胆磺酰肼 DNS-H第3页/共31页I I 胺类化合物的衍生试剂胺类化合物的衍

2、生试剂 芳香邻二醛类 OPA 异硫氰酸酯类 FITC 酰氯类 FMOC 活性卤类 NBD-Cl N-羟基琥珀酰亚胺活性酯类 AQC 第4页/共31页邻苯二甲醛 OPA4-氯-7-硝基-2,1,3-苯并恶二唑 NBD-Cl荧光素异硫氰酸酯FITCFMOC芴代甲氧基酰氯 6-氨喹啉基琥珀酰亚胺碳酸酯AQC常用胺的衍生试剂常用胺的衍生试剂 分子式分子式第5页/共31页邻苯二甲醛邻苯二甲醛 OPA OPA 衍生分离氨基酸的色谱图衍生分离氨基酸的色谱图J Chromatorgr.1990,499:557第6页/共31页集成化微流控芯片氨基酸分析仪集成化微流控芯片氨基酸分析仪 高等学校化学学报 2004,

3、25:189190第7页/共31页FMOC FMOC 衍生分离氨基酸的色谱图衍生分离氨基酸的色谱图J Chromatorgr.1990,499:557第8页/共31页FMOCFMOC与与CEOCCEOC衍生分离氨基酸的比较衍生分离氨基酸的比较Anal.Biochem 2003,313 1727第9页/共31页图3 CEOC 衍生胺类化合物色谱分离图（23种）图2 FMOC 衍生胺类化合物色谱分离图（23种）FMOCFMOC与与CEOCCEOC衍生分离脂肪胺的比较衍生分离脂肪胺的比较第10页/共31页II II 醇、酚的衍生试剂醇、酚的衍生试剂 羰基氯类：FMOC CEOC 磺酰氯类:DNs-C

4、l 卤代三嗪类:EDTN 1-乙氧基-4-(二氯-三嗪)萘（EDTN）第11页/共31页CEOC CEOC 衍生醇类荧光检测色谱分离衍生醇类荧光检测色谱分离分析化学 2003,31,6265第12页/共31页1.苯酚 2.对氯苯酚 3.2,5-二甲基苯酚 4.2,4-二氯苯酚 5.1,4对苯二酚CEOC CEOC 衍生酚类荧光检测色谱分离衍生酚类荧光检测色谱分离第13页/共31页III III III III 羰基化合物的衍生试剂羰基化合物的衍生试剂 肼类 DNs-H CEOC-HDNs-H CEOC-H 氨基类 氨基甲基芘 第14页/共31页肼和胺与羰基化合物的反应肼和胺与羰基化合物的反应第

5、15页/共31页1.乳糖 2.甘露糖 3.葡萄糖 4.鼠李糖 5.山梨糖(FL detection)咔唑-9-9-乙氧基羰基肼(CEOC-H)(CEOC-H)柱前衍生中性糖高效液相色谱分离第16页/共31页IV IV 羧酸类化合物的衍生试剂 溴甲基类 BrMMC 哌嗪基类 DBD-Pz 重氮甲烷基类 ADAM 其它类 9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素(ADMC)7-N-哌嗪-4-二甲氨基苯并呋喃9-蒽重氮甲烷9-蒽重氮甲烷(4-溴甲基-7-甲氧基香豆素)第17页/共31页荧光衍生试剂与羧酸的反应第18页/共31页4-4-氨甲基-6,7-6,7-二甲基香豆素 (

6、ADMC)(ADMC)衍生羧酸 色谱分离图第19页/共31页Fig.1 胆汁酸分离色谱图（荧光检测）.衍生物的激发和发射波长分别为 ex=404,em=440nm9-(2-9-(2-羟乙基)-)-吖啶酮 HEA HEA 衍生胆汁酸 色谱分离图第20页/共31页V V 分离对映体的手性荧光衍生试剂 第21页/共31页Toshimasa Toyooka Japan 手性荧光衍生试剂 R(-)DBD-PyNCS R(-)DBD-PyNCS 衍生分离DLDL氨基酸第22页/共31页OPA OPA 与手性硫醇 衍生分离DLDL氨基酸N-异丁酰基-D(L)-半胱氨酸(IBDC和IBLC)第23页/共31页

7、VI VI VI VI 蛋白质的衍生试剂蛋白质的衍生试剂目前常用衍生蛋白质的荧光标记试剂有：邻苯二甲醛 (OPA)(OPA)4-4-氟-7-7-硝基苯并恶二唑 (NBD-F)(NBD-F)荧光素异硫氰酸酯 (FITC)(FITC)3-3-呋喃甲酰喹啉-2-2-羰醛 (FQ)(FQ)第24页/共31页邻苯二甲醛邻苯二甲醛 OPA OPA OPA OPA 衍生马心肌红衍生马心肌红蛋白质蛋白质毛细管电泳分离毛细管电泳分离Fig.5 OPA 柱后标记马心肌红蛋白质毛细管电泳图第25页/共31页3-3-3-3-呋喃甲酰喹啉呋喃甲酰喹啉-2-2-2-2-羰醛羰醛 FQ FQ FQ FQ 衍生衍生蛋白质蛋白

8、质毛细管电泳分离毛细管电泳分离第26页/共31页VII VII VII VII 核酸核酸的衍生试剂的衍生试剂DNA序列分析中所用的四种荧光衍生试剂Nature 1986,327:674Nature 1986,327:674第27页/共31页DNA DNA DNA DNA 测序仪及电泳图测序仪及电泳图第28页/共31页展展 望望分析化学中的有机试剂在分析化学中占有与分析仪器同等重要的地位，荧光衍生化试剂则是有机分析试剂的一类重要分支。性能优良的荧光衍生化试剂可能将成为某些物质的高灵敏高选择性分析的关键，荧光衍生试剂的开发与应用也正朝这个方向发展。在实际工作中将可能遇到各种现有荧光衍生试剂所不能解决或不能很好解决的问题。有必要根据实际工作的需要来开发研究新型的荧光衍生试剂第29页/共31页Thank You!第30页/共31页感谢您的观看！第31页/共31页