研究黄芪精中黄芪甲苷.pptx

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1、一产品概况黄芪精是我公司开发研制的虚症类黄芪精是我公司开发研制的虚症类OTCOTC产品，为补血养气，固本止汗之良药。产品，为补血养气，固本止汗之良药。其疗效佳，口感好，携带方便。其疗效佳，口感好，携带方便。Yangtze River Pharmaceutical GroupYangtze River Pharmaceutical Group扬 子 江 药 业 集 团第1页/共68页二二.小组概况小组概况(一一一一)小组简介小组简介小组简介小组简介 小组名称小组名称飞跃飞跃QCQC小组小组课题注册号课题注册号TZ2005015TZ2005015课题类型课题类型创新型创新型小组成员小组成员8 8人

2、人成立时间成立时间2005.102005.10活动时间活动时间2005.102005.102006.42006.4课题名称课题名称研究黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法研究黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法活动次数活动次数1919次次出勤率出勤率100%100%制表人：张集盘 日期：2006.3.20Yangtze River Pharmaceutical GroupYangtze River Pharmaceutical Group扬 子 江 药 业 集 团第2页/共68页(二二)QC)QC小组成员一览表小组成员一览表序号序号姓名姓名性别性别受教育情况受教育情况职务职务组内分工组内分工1张集盘张

3、集盘男男大专大专标准研究员标准研究员组长，资料整理组长，资料整理2黄新兰黄新兰女女本科，工程师，质量本科，工程师，质量管理工程师管理工程师QC主管主管副组长，技术指导副组长，技术指导3马马 军军男男大专大专标准研究员标准研究员方案实施方案实施4卢晶晶卢晶晶女女本科本科标准研究员标准研究员方案实施，成果汇报方案实施，成果汇报5陆莉娟陆莉娟女女大专大专标准研究员标准研究员方案实施方案实施6祖若玉祖若玉女女大专大专标准研究员标准研究员方案实施方案实施7牛牛 萍萍女女硕士，高工，质量管硕士，高工，质量管理工程师理工程师质管经理质管经理技术指导技术指导8季洪英季洪英女女大专，工程师，质量大专，工程师，质

4、量管理工程师管理工程师质管部长质管部长技术指导技术指导制表人：张集盘 日期：第3页/共68页三选择课题1.薄层扫描法测定黄芪精中黄芪甲苷含量的缺陷分析基线不稳定耗时长易出现鬼峰偏差大缺陷第4页/共68页1.1.扫描时基线不稳定第5页/共68页1.2.容易出现鬼峰第6页/共68页1.3.检测偏差大，方法的准确性较差第7页/共68页1.4.薄层板展开耗时长，且一块薄层板只能点一个批号的供试品，检测批次很有限，导致出成品检测报告的周期较长。1.5.按照部颁标准，以薄层扫描法 （TLCS）对黄芪精中黄芪甲苷进行含量测定，结果如下。第8页/共68页黄芪精按部颁标准含量测定结果批批 号号含量（含量（mgm

5、l-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）相对平均偏差相对平均偏差（%）030301-10.114120.105260.109694.1030401-10.110680.106490.108582.0030501-10.126550.119450.123002.9030601-10.120410.113520.116963.0030702-10.129010.119300.124164.0030801-10.125070.133710.129393.4制表人：张集盘 日期：TLCS法测定本品含量时偏差大，不利于产品质量的控制。第9页/共68页2.课题确定 研究黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法

6、可供直接借鉴的方法少黄芪化学成分复杂黄芪为君药黄芪甲苷为主要有效成分第10页/共68页四.设定目标拟制定黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法的回收率不低于90%；含量测定结果的相对平均偏差小于2.0%。第11页/共68页五提出并选择最佳方案 1.提出方案（1）HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测器）法（2）HPLC-RI（高效液相色谱-示差折光检测器）法（3）HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法第12页/共68页 2.方案的分析、评估与确定序序号号方方 案案 内内 容容原原 理理 分分 析析评估人评估人方方 案案 评评 估估综综合合得得分分方案方案选定选定可操作可操作性性准确准

7、确性性经济经济性性1HPLC-UV（高效液相色谱（高效液相色谱-紫外检测器）紫外检测器）法法利用黄芪甲利用黄芪甲苷在苷在203nm处有末端吸处有末端吸收的原理收的原理,建立以乙腈建立以乙腈-水水（32：68）为流动为流动相的相的HPLC-UV法法张集盘张集盘44因在因在203nm处干处干扰大扰大不选不选黄新兰黄新兰马马 军军卢晶晶卢晶晶陆莉娟陆莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍季洪英季洪英第13页/共68页序序号号方方 案案 内内 容容原原 理理 分分 析析评估人评估人方方 案案 评评 估估综综合合得得分分方案方案选定选定可操作可操作性性准确准确性性经济经济性性2HPLC-RI（高效液相色（高效液相色

8、谱谱-示差折光检示差折光检测器）测器）法法样品组分折样品组分折射率与流动射率与流动相溶剂折射相溶剂折射率有差异，率有差异，当组分洗脱当组分洗脱出来时，会出来时，会引起流动相引起流动相折射率的变折射率的变化，该变化化，该变化与样品组分与样品组分的浓度成正的浓度成正比比 张集盘张集盘 32因灵因灵敏度敏度不高不高不选不选黄新兰黄新兰 马马 军军 卢晶晶卢晶晶 陆莉娟陆莉娟 祖若玉祖若玉 牛牛 萍萍 季洪英季洪英 第14页/共68页序序号号方方 案案 内内 容容原原 理理 分分 析析评估人评估人方方 案案 评评 估估综综合合得得分分方案选方案选定定可操作可操作性性准确性准确性经济经济性性3HPLC-

9、ELSD（高效液相色（高效液相色谱谱-蒸发光散射蒸发光散射检测器）检测器）法法 ELSD可以可以对所有挥发对所有挥发性低于流动性低于流动相的物质作相的物质作出准确检测出准确检测,而与被检测而与被检测物质的化学物质的化学基团关系不基团关系不大大,响应值与响应值与样品的质量样品的质量成正比成正比张集盘张集盘76因检测因检测范围广、范围广、灵敏度灵敏度高，故高，故选定选定黄新兰黄新兰马马 军军卢晶晶卢晶晶陆莉娟陆莉娟祖若玉祖若玉牛牛 萍萍 季洪英季洪英 备注：可操作性、准确性、经济性三个指标均以1分（一般）、3分（良好）、5分（显著）为评分标准，上述综合得分为QC小组成员所评分数的总和。第15页/共

10、68页3.确定方案的采用顺序（3）HPLC-ELSD（高效液相色谱-蒸发光散射检测器）法（1）HPLC-UV（高效液相色谱-紫外检测器）法（2）HPLC-RI（高效液相色谱-示差折光检测器）法PDCA第16页/共68页六制定对策 根据以上选择的最佳方案制订对策表对对 策策目目 标标措措 施施地地 点点时时 间间负责人负责人色谱条件色谱条件的确定的确定峰形对称，目标峰形对称，目标峰与相邻峰分离峰与相邻峰分离度不小于度不小于1.5，保，保留时间适中留时间适中对不同的色谱柱、流动对不同的色谱柱、流动相、流速等进行摸索，相、流速等进行摸索，尽量与药典中黄芪药材尽量与药典中黄芪药材含量测定的色谱条件划含

11、量测定的色谱条件划一一仪器室仪器室05.11.2105.11.28张集盘张集盘马马 军军供试品前供试品前处理方法处理方法的选择的选择有效地提取目标有效地提取目标物且操作方便物且操作方便摸索科学、准确的供试摸索科学、准确的供试品前处理方法，尽量与品前处理方法，尽量与药典中黄芪药材含量测药典中黄芪药材含量测定的前处理方法划一定的前处理方法划一仪器室仪器室05.12.0505.12.17张集盘张集盘马马 军军卢晶晶卢晶晶陆莉娟陆莉娟第17页/共68页对对 策策目目 标标措措 施施地地 点点时时 间间负责人负责人线性关线性关系的确系的确定定 相关系数大于相关系数大于0.9990配制至少配制至少5个个系

12、列浓度，选系列浓度，选择适当的曲线择适当的曲线拟和类型进行拟和类型进行确定确定 仪器室仪器室 06.01.0506.01.20 张集盘张集盘马马 军军卢晶晶卢晶晶精密度精密度试验试验 峰面积的相对峰面积的相对标准偏差标准偏差RSD2.0%同一供试品至同一供试品至少连续进样少连续进样5次，考查色谱次，考查色谱峰面积的相对峰面积的相对标准偏差标准偏差（RSD）仪器室仪器室 06.02.0506.02.11 张集盘张集盘马马 军军祖若玉祖若玉第18页/共68页对对 策策目目 标标措措 施施地地 点点时时 间间负责人负责人重复性重复性试验试验 含量测定结果的含量测定结果的相对标准偏差相对标准偏差RSD

13、2.0%同一批号的供同一批号的供试品同一人同试品同一人同一仪器平行操一仪器平行操作作6份，考查含份，考查含量测定结果的量测定结果的相对标准偏差相对标准偏差（RSD）仪器室仪器室 06.02.1306.02.18 张集盘张集盘稳定性稳定性试验试验峰面积的相对标峰面积的相对标准偏差准偏差RSD2.0%同一供试品分同一供试品分别在别在0、2、4小时进样小时进样分析，考查色分析，考查色谱峰面积的相谱峰面积的相对标准偏差对标准偏差（RSD）仪器室仪器室 06.02.2006.02.23 张集盘张集盘马马 军军卢晶晶卢晶晶祖若玉祖若玉 第19页/共68页对对 策策目目 标标措措 施施地地 点点时时 间间负

14、责人负责人方法回收方法回收率试验率试验 方法回收率不低方法回收率不低于于90%同一批号已知同一批号已知含量的供试品含量的供试品加入适量的对加入适量的对照品（或对照照品（或对照品溶液）平行品溶液）平行操作操作6份，考查份，考查方法回收率方法回收率 仪器室仪器室 06.02.2506.03.10张集盘张集盘马马 军军陆莉娟陆莉娟 制表人：张集盘 日期：第20页/共68页七对策实施实施一：色谱条件的确定1.仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪；Attech2000蒸发光散射检测器；梅特勒AG285电子天平。黄芪精；天津农药总厂D101型大孔吸附树脂；甲醇、乙腈为色谱纯；95%乙醇为分析纯

15、；水为超纯水。第21页/共68页2.对照品溶液的制备取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解，配制成0.1 mgml-1的对照品溶液。3.供试品溶液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇10ml使溶解，0.45 m有机系微孔滤膜滤过，即得。第22页/共68页4.色谱条件的确定第23页/共68页色谱条件筛选图1色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：1.2mlmin-1min246

16、81012mAu100200300400500600700 ADC1 A,ADC1 CHANNEL A(ZJPHQJ21528.D)1.405 7.917第24页/共68页色谱条件筛选图2色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：1.0 mlmin-1第25页/共68页色谱条件筛选图3色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：0.9 mlmin-1第26页/共68页色谱条件筛选图4色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）流

17、动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：0.9 mlmin-1第27页/共68页色谱条件筛选图5色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5m）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40流速：1.0 mlmin-1第28页/共68页色谱条件筛选图6色谱柱：Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）流动相：乙腈-水(32：68)柱温：40流速：1.0 mlmin-1第29页/共68页色谱条件筛选图7色谱柱：Dikma DiamonsilTM（钻石）C18柱(4.6250 mm,5 m)流动相：乙腈-水(40：60)柱温：40流速：1.0 mlmin-1第

18、30页/共68页色谱条件选择情况汇总表制表人：马军 日期：色谱柱色谱柱流动相流动相不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的对照品溶液色谱峰分离情况对照品溶液色谱峰分离情况不同流速（不同流速（mlmin-1）下的）下的供试品溶液色谱峰分离情况供试品溶液色谱峰分离情况0.91.01.20.91.01.2Agilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水(40：60)峰形对称；目标峰与相邻峰峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于分离度大于1.5，保留时间适，保留时间适中中峰形对称；目标峰与相邻峰峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于分离度大于1.5，保留时间适，保留时间适

19、中中Dikma DiamonsilTM（钻石）（钻石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水(40：60)峰形对称；目标峰与相邻峰峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于分离度大于1.5，tR R10min10min峰形对称；目标峰与相邻峰峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于分离度大于1.5，tR R10min10minAgilent XDB-C18柱（柱（4.6150 mm，5 m）乙腈乙腈-水水(32：68)峰形对称；目标峰与相邻峰峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于分离度大于1.5，tR R10min10min峰形对称；目标峰与相邻峰峰形对称；目标峰与相邻峰分离度大于分离度大于1.

20、5，tR R10min10minDikma DiamonsilTM（钻石）（钻石）C18柱柱（4.6250 mm，5 m）乙腈乙腈-水水(32：68)峰形较对称；目标峰与相邻峰形较对称；目标峰与相邻峰分离度大于峰分离度大于1.5，tR R10min10min峰形较对称；目标峰与相邻峰形较对称；目标峰与相邻峰分离度大于峰分离度大于1.5，tR R10min10min第31页/共68页 因此，可以选择Agilent XDB-C18柱（4.6150 mm，5 m）、以乙腈-水(32：68)为流动相，流速为1.0 mlmin-1进行后续试验。第32页/共68页实施二：供试品前处理方法的选择1.供试品溶

21、液的制备精密量取本品10ml，置分液漏斗中，加水10ml，摇匀，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱，以水50ml洗脱，弃去水液，再用A乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用B乙醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。第33页/共68页2.提取分离条件的确定收集上述水液和各拟弃去的乙醇洗脱液，蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液C按照上述色谱条件分别进样20 l，记录色谱峰面积。第34页/共68页各拟弃去的乙

22、醇洗脱液蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液各拟弃去的乙醇洗脱液蒸干，加甲醇适量使溶解，得溶液C水液水液30%40%50%60%70%80%95%黄芪甲黄芪甲苷峰检苷峰检出情况出情况未检未检出出未检未检出出检出检出量较量较小小检出检出量较量较大大检出检出量最量最大大未检未检出出未检未检出出未检未检出出制表人:卢晶晶 日期第35页/共68页试验结果表明：（1）弃去的水液中目标物无损失；（2）当A=40，即采用40%乙醇洗脱时，目标物有损失；（3）当B=60，即继续采用60%乙醇洗脱时，则目标物洗脱不完全。因此确定A%、B%的最佳值分别为：30%、70%，并以此值确定的提取分离条件进行后续方法学的验证。

23、第36页/共68页实施三：线性关系的确定取黄芪甲苷对照品适量，加甲醇溶解并稀释至8个系列浓度,分别进样10 l，测定峰面积，以对照品浓度X(mgml-1)的lg值为横坐标，峰面积积分值Y的lg值为纵坐标进行线性回归，得回归方程：第37页/共68页工作曲线评价：结果表明黄芪甲苷在255.20 gml-1 范围内线性关系良好。第38页/共68页实施四：精密度试验取同一供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6次，每次10 l，测得黄芪甲苷色谱峰峰面积平均值为，RSD为0.5%。第39页/共68页制表人：祖若玉 日期：进样次数进样次数峰面积峰面积峰面积平均值峰面积平均值RSD（%）1977.094429

24、78.578830.52980.079413975.409004986.095835976.362926976.43140第40页/共68页绘图人：祖若玉 日期：评价：精密度良好，达到预期目标。第41页/共68页实施五：重复性试验取同一批号样品，制备6份供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液10l、20l，供试品溶液10l，注入液相色谱仪，测定峰面积值，以外标两点法对数方程计算，即得黄芪甲苷的含量。第42页/共68页重复性试验结果试验次数试验次数含量含量（mgml-1）含量平均值含量平均值（mgml-1）RSD（%）10.1234380.1223571.20.12196820.1233660.12

25、376830.1238620.12227040.1211760.12373450.1211650.11947860.1209460.123113制表人：张集盘 日期：第43页/共68页 绘图人：张集盘 日期：评价：重复性试验RSD为1.2%，达到预期目标。第44页/共68页实施六：稳定性试验取同一供试品溶液，于0、2、4、6、12、14 h分别精密吸取10 l注入液相色谱仪分析，测得峰面积值，计算RSD。第45页/共68页稳定性试验结果进样时间进样时间（h）峰面积峰面积峰面积平均值峰面积平均值RSD（%）01071.514771069.388771.821064.4517841077.6015

26、661053.73657121098.48413141043.48083制表人：卢晶晶 日期：第46页/共68页绘图人：卢晶晶 日期：评价：上述结果表明供试品溶液在14 h内稳定性良好。第47页/共68页实施七：方法回收率试验 精密吸取已知含量同一批号样品5 ml，6份，分别精密加入已知浓度的对照品溶液5 ml，制备溶液，分别进样10 l，测得峰面积值，计算平均回收率和RSD。第48页/共68页回收率测定结果（n=6）取样量取样量（ml）样品含量样品含量（mg）加入量加入量（mg）测得量测得量（mg）回收率回收率（%）平均值平均值（%）RSD（%）50.8219550.52701.316889

27、3.9196.761.911.3248795.4350.8219550.52701.3455599.351.3418698.6550.8219550.52701.3305796.511.3396498.2350.8219550.52701.3352697.401.3371497.7650.8219550.52701.3218994.861.3219794.8850.8219550.52701.3432198.911.3241195.29制表人：张集盘 日期：第49页/共68页评价：平均回收率为96.76%，RSD为1.91%，表明方法准确度良好，可以用于本品的定量分析。第50页/共68页评价1

28、.初步评价建立了黄芪精中黄芪甲苷含量测定的新方法，方法学研究符合中国药典2005年版（一部）附录“中药质量标准分析方法验证指导原则”。第51页/共68页2.综合评价 取本品3批，将两法的含量测定结果进行对比。第52页/共68页批号批号含含 量（量（mgml-1）相对平均偏差（相对平均偏差（%）TLCS法法平均值平均值HPLC-ELSD法法平均值平均值TLCS法法HPLC-ELSD法法060313010.133960.1393240.1304560.1352832.60.70.1332480.127400.1381040.139324060314010.152920.1585610.144187

29、0.1512221.91.20.1442410.147310.1578980.158561060315010.148710.1541390.1454340.1496721.80.70.1460540.143720.1530620.154139第53页/共68页绘图人：陆莉娟 日期：第54页/共68页评价：采用HPLC-ELSD法测定黄芪精中黄芪甲苷含量比采用TLCS法测定时的相对平均偏差小，测定的结果较理想。第55页/共68页八.效果检查1.效果验证取不同批号的黄芪精，依法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进样10 l，测得峰面积值，并计算黄芪甲苷含量。10批样品含量测定结果见下表。第56页/共

30、68页10批样品含量测定结果（n=4）批号批号含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相对平均偏差相对平均偏差（%）06010201060102010.1573570.1573570.1586400.1586401.11.10.1565360.1565360.1602440.1602440.1604240.16042406012001060120010.1554750.1554750.1555660.1555660.60.60.1556130.1556130.1539920.1539920.1571840.1571840602020106020201

31、0.1634490.1634490.1643910.1643911.41.40.1611400.1611400.1659520.1659520.1670230.167023第57页/共68页批号批号含量含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值含量平均值（mgmlmgml-1-1）相对平均偏差相对平均偏差（%）06020301060203010.1523720.1523720.1525030.1525030.50.50.1513820.1513820.1527150.1527150.1535440.15354406020401060204010.1433190.1433190.1428430.

32、1428430.80.80.1435370.1435370.1405860.1405860.1439300.14393006020402060204020.1326390.1326390.1327960.1327960.40.40.1321470.1321470.1335680.1335680.1328280.132828第58页/共68页批号批号含量（含量（mgmlmgml-1-1）含量平均值（含量平均值（mgmlmgml-1-1）相对平均偏差（相对平均偏差（%）06020501060205010.1460670.1460670.1468010.1468010.60.60.1458130.1

33、458130.1478130.1478130.1475110.14751106010101060101010.1093570.1093570.1095220.1095220.30.30.1096420.1096420.1098900.1098900.1091980.10919806020601060206010.1413060.1413060.1419910.1419910.50.50.1426570.1426570.1414910.1414910.1425110.14251106010301060103010.1100480.1100480.1092400.1092400.80.80.110

34、0940.1100940.1085230.1085230.1082950.108295第59页/共68页上表数据反映出新的分析方法测定结果 较理想，QC活动取得了良好的效果。第60页/共68页2.效果二活动前后相对平均偏差柱状图 绘图人：张集盘 日期：第61页/共68页3.效果三(社会效益)此次QC活动,解决了薄层扫描法进行黄芪精中黄芪甲苷含量测定时基线不稳定、易出现鬼峰、检测耗时长及偏差大等问题,有助于正确地评价该产品的质量和稳定性。同时，本次QC活动的成果已形成“部颁标准升国家标准”的材料供药检所审核。第62页/共68页成果确认表第63页/共68页九.标准化将新的检测方法形成文件，载入企业

35、内控质量标准，其编号由“SM-0613-04”变更为“SM-0613-05”。组织仪器组化验员对新方法进行理论和实践操作的培训，以提高操作技能。并将考试结果纳入当月绩效考核中。在实际工作中严格按此企业内控质量标准执行，并由QC主管严格考核其执行情况。第64页/共68页十.总结及今后打算1总结此次QC活动的开展，调动了每个成员参与的积极性和主动性,增强了全面质量管理意识和团队协作精神,培养了发现问题、分析问题和解决问题的能力,提高了科学的创新意识。第65页/共68页2今后打算 将成果进一步推广应用到其他品种的方法学验证,并拟下一QC活动课题为“建立金胆片含量测定的分析方法”,以全面实现扬子江药业产品的质量“飞跃”。第66页/共68页Yangtze River Pharmaceutical GroupYangtze River Pharmaceutical Group扬 子 江 药 业 集 团敬请各位评委、专家、同仁批评指正！谢 谢！飞跃QC小组第67页/共68页感谢您的观看！第68页/共68页