抗体的人工制备PPT讲稿.ppt

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1、抗体的人工制备第1页，共49页，编辑于2022年，星期日人工制备抗体人工制备抗体n n多克隆抗体（polyclonalantibody）n n单克隆抗体（monoclonalantibody）n n基因工程抗体（geneticengineeringantibody)第2页，共49页，编辑于2022年，星期日（一）（一）多克隆抗体多克隆抗体（polyclonal antibody(PcAb)n n用传统方法将抗原物质免疫动物用传统方法将抗原物质免疫动物用传统方法将抗原物质免疫动物用传统方法将抗原物质免疫动物,由于这些物质由多种由于这些物质由多种由于这些物质由多种由于这些物质由多种抗原分子组成或由

2、多种抗原决定簇组成抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成抗原分子组成或由多种抗原决定簇组成,可刺激不同淋可刺激不同淋可刺激不同淋可刺激不同淋巴细胞克隆巴细胞克隆巴细胞克隆巴细胞克隆,产生多种产生多种产生多种产生多种Ig,Ig,Ig,Ig,即多克隆抗体。即多克隆抗体。即多克隆抗体。即多克隆抗体。n n由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具由此获得的抗血清是一种多克隆的混合抗体，具有高度的异质性。有高度的异质性。有高度的异质性。有高度的异质性。第3页，共49页，编辑于2022年，星

3、期日缺点n n它不能针对某一特定表位，特异性不高，它不能针对某一特定表位，特异性不高，常出现交叉反应；常出现交叉反应；n n同时也不易大量制备，其应用受到限制。同时也不易大量制备，其应用受到限制。第4页，共49页，编辑于2022年，星期日多克隆抗体主要来源于n n动物免疫血清n n恢复期患者血清n n免疫接种人群第5页，共49页，编辑于2022年，星期日PcAb制备的基本过程n n抗原制备n n动物免疫n n试血测定抗体效价n n血清分离与保存n n多抗纯化与标记第6页，共49页，编辑于2022年，星期日用于制备抗血清的动物n n小鼠、n n大鼠、n n兔、n n羊、n n马等大动物。第7页，

4、共49页，编辑于2022年，星期日（二）单克隆抗体（monoclonalantibody，McAb）n n由单一B细胞克隆针对某一抗原决定簇产生的完全均一的只对某一抗原决定簇起反应的特异性抗体,即为单克隆抗体。n n通过杂交瘤技术获得。第8页，共49页，编辑于2022年，星期日n n针对一个抗原决定簇针对一个抗原决定簇n n由一个由一个B B细胞分化、细胞分化、增殖产生的子代细胞集团产增殖产生的子代细胞集团产生的，生的，n n针对一个抗原决定簇的抗体，即由单一针对一个抗原决定簇的抗体，即由单一B B细胞克隆合细胞克隆合成的抗体。成的抗体。第9页，共49页，编辑于2022年，星期日第10页，共4

5、9页，编辑于2022年，星期日第11页，共49页，编辑于2022年，星期日第12页，共49页，编辑于2022年，星期日第13页，共49页，编辑于2022年，星期日特点：1.1.高度均一性高度均一性 2.2.高度专一性高度专一性3.3.大量产生大量产生4.4.及稳定性及稳定性第14页，共49页，编辑于2022年，星期日应用n n作为诊断试剂用于许多血清学检测作为诊断试剂用于许多血清学检测;n n已广泛应用于疾病的诊断、已广泛应用于疾病的诊断、n n特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、特异性抗原或蛋白的检测和鉴定、n n疾病的被动免疫治疗疾病的被动免疫治疗n n 或与核素、毒素、化学药物偶联导向药或与核

6、素、毒素、化学药物偶联导向药物物,用于肿瘤治疗。用于肿瘤治疗。第15页，共49页，编辑于2022年，星期日单克隆抗体的生产n n动物体内生产系统n n细胞培养生产系统第16页，共49页，编辑于2022年，星期日动物体内生产系统n n将杂交瘤细胞注入小鼠腹腔，杂交瘤细胞可在小鼠腹腔中无限繁殖，导致腹水产生，每毫升腹水可获得520mg的单克隆抗体，一般一次可收腹水510mL,间隔34d采一次，可多次反复采集。第17页，共49页，编辑于2022年，星期日选择培养基n n 常用常用HATHAT选择培养基，选择培养基，H H为次黄嘌呤（为次黄嘌呤（hypoxanthinehypoxanthine）,T,

7、T为胸腺为胸腺嘧啶核苷（嘧啶核苷（thymidine)thymidine)，二者都是旁路合成，二者都是旁路合成DNADNA的原料；的原料；A A是氨是氨基喋呤（基喋呤（aminoplerinaminoplerin）,是细胞合成是细胞合成DNADNA的阻断剂。的阻断剂。n n在在DMEMDMEM培养基中加入培养基中加入 H H、A A、T T三种成分即制成三种成分即制成HATHAT选择培养基，选择培养基，在该培养基中，未融合的骨髓瘤细胞不能生长，因它缺乏在该培养基中，未融合的骨髓瘤细胞不能生长，因它缺乏HGPRTHGPRT酶酶下能利用旁路途径合成下能利用旁路途径合成DNADNA，内源性的合成又受

8、到氨基喋呤的阻，内源性的合成又受到氨基喋呤的阻断；至于未融合的脾细胞则在断；至于未融合的脾细胞则在2 2周内自然死亡所以只有融合的周内自然死亡所以只有融合的杂交瘤细胞才能在该培养基中生长。杂交瘤细胞才能在该培养基中生长。第18页，共49页，编辑于2022年，星期日细胞培养生产系统n n悬浮培养系统n n细胞固定化培养系统第19页，共49页，编辑于2022年，星期日单克隆抗体应用单克隆抗体被广泛用作诊断检测试剂，提高了常规免疫学检测技术在疾病诊断和分析研究中的敏感性、特异性、准确性和检测速度。单克隆抗体可与同位素、毒素、细胞毒类药物通过化学偶联制备成导向药物（生物导弹），用于肿瘤、自身免疫性疾病

9、治疗和防治移植排斥反应等。第20页，共49页，编辑于2022年，星期日单克隆抗体应用单克隆抗体可用作生物活性药物的纯化试剂。第21页，共49页，编辑于2022年，星期日单克隆抗体与多克隆抗体比较单克隆抗体与多克隆抗体比较性性性性 状状状状多克隆抗体多克隆抗体多克隆抗体多克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体产生抗体的细胞来产生抗体的细胞来产生抗体的细胞来产生抗体的细胞来 源源源源多株多株B B细胞及其子代细胞细胞及其子代细胞 人或动物免疫血清，恢人或动物免疫血清，恢复期血清复期血清 单株单株B B细胞及其子代细胞细胞及其子代细胞B B细胞杂交瘤的小鼠腹腔细胞杂交瘤的小鼠腹腔（或上清液

10、）（或上清液）有效抗体含量有效抗体含量有效抗体含量有效抗体含量0.10.11.0mg/ml1.0mg/ml血清血清0.50.55.0mg/ml5.0mg/ml小鼠腹水小鼠腹水抗体成分及性质抗体成分及性质抗体成分及性质抗体成分及性质 能识别多种抗原决定簇能识别多种抗原决定簇的各类及各亚类的各类及各亚类Ig Ig 只识别一种抗原决定簇只识别一种抗原决定簇的同一亚类的同一亚类IgIg，其分子结构纯一，独特其分子结构纯一，独特性完全相同性完全相同第22页，共49页，编辑于2022年，星期日单克隆抗体与多克隆抗体比较单克隆抗体与多克隆抗体比较性性性性 状状状状多克隆抗体多克隆抗体多克隆抗体多克隆抗体单克

11、隆抗体单克隆抗体单克隆抗体单克隆抗体用用用用 途途途途用于常规多价抗用于常规多价抗原的免疫学检测、原的免疫学检测、易出现交叉反应易出现交叉反应 ；用于紧急预防及用于紧急预防及治疗各种微生物、治疗各种微生物、外毒素引起的疾病外毒素引起的疾病 作为第一抗体，作为第一抗体，用用ELISAELISA、放免、免、放免、免疫酶联等方法检测疫酶联等方法检测微量抗原，可避免微量抗原，可避免交叉反应交叉反应；将肿瘤特异性将肿瘤特异性McAbMcAb与药物连结，与药物连结，用于治疗肿瘤用于治疗肿瘤 第23页，共49页，编辑于2022年，星期日n n但是由于人-人杂交瘤的技术限制，目前绝大多数单克隆抗体是鼠源性的。

12、n n由于是异种抗原，重复体内使用鼠源性抗体将促使机体产生抗鼠Ig的抗体，不仅降低临床疗效，亦可能引起严重的超敏反应，因而限制了其临床应用。第24页，共49页，编辑于2022年，星期日（三）基因工程抗体（三）基因工程抗体:n n人人-鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗鼠嵌合抗体、改型抗体、双特异性抗体、小分子抗体、人源化抗体。体、小分子抗体、人源化抗体。n n可保持单克隆抗体均一性、特异性强的可保持单克隆抗体均一性、特异性强的优点优点,又能克服其为鼠源性的不足。又能克服其为鼠源性的不足。第25页，共49页，编辑于2022年，星期日第26页，共49页，编辑于2022年，星期日n n 由基因重组技术

13、制备的抗体称为基因工程抗体由基因重组技术制备的抗体称为基因工程抗体(gene(geneengineeringantibodyengineeringantibody，GeAb)GeAb)，也称第三代人工抗体。，也称第三代人工抗体。n n其原理是由其原理是由B B细胞获得编码抗体的基因，或以聚合细胞获得编码抗体的基因，或以聚合酶链反应酶链反应(PolymeraseChainReaction(PolymeraseChainReaction，PCR)PCR)体外体外扩增抗体基因片段，经体外扩增抗体基因片段，经体外DNADNA重组后，转化受重组后，转化受体细胞，使其表达特定抗体。体细胞，使其表达特定抗体

14、。n n目前已成功表达的基因工程抗体有嵌合抗体、重构建目前已成功表达的基因工程抗体有嵌合抗体、重构建抗体、单链抗体等，其中嵌合抗体研究较多。抗体、单链抗体等，其中嵌合抗体研究较多。第27页，共49页，编辑于2022年，星期日n n另外重组噬菌体抗体(recombinantphageantibody)是近年以重组噬菌体展示系统制备的GeAb。n n将抗体VH、VL基因经体外PCR扩增后与噬菌体外壳编码基因连接，重组后可在噬菌体表面表达抗体融合蛋白，经固相抗原吸附技术很容易筛选出表达特异抗体的噬菌体用以大量表达和制备抗体。第28页，共49页，编辑于2022年，星期日抗体基因片段的获得n n从B细胞

15、DNA库中筛选；n n用探针从杂交瘤细胞、免疫脾细胞的DNA库或cDNA库中筛选；n n以PCR法直接扩增。第29页，共49页，编辑于2022年，星期日一、嵌合抗体（Chimericantibody)n n是指在同一抗体分子中含有不同种属来源抗体片段的抗体，又称杂种抗体。n n迄今构建的嵌合抗体多为“鼠-人”类型，也就是抗体的Fab或F(ab)2来源于鼠类。而Fc片段来源于人类。第30页，共49页，编辑于2022年，星期日重构抗体第31页，共49页，编辑于2022年，星期日第32页，共49页，编辑于2022年，星期日第33页，共49页，编辑于2022年，星期日第34页，共49页，编辑于2022

16、年，星期日第35页，共49页，编辑于2022年，星期日第36页，共49页，编辑于2022年，星期日第37页，共49页，编辑于2022年，星期日第38页，共49页，编辑于2022年，星期日第39页，共49页，编辑于2022年，星期日第40页，共49页，编辑于2022年，星期日第41页，共49页，编辑于2022年，星期日Iadviseyoutobuyouthisallshareofpower.我建议你买下他的全部股权。n nbuyout买断全部股份、商业股权或利息（Topurchasetheentirestock,businessrights,orinterestsof）。n n例句：Wearen

17、owfinanciallysoundenoughtobuyoutthenextfailure.如今，我们（公司）财务运营足够健全，承担得起再一次的失败。第42页，共49页，编辑于2022年，星期日Iwouldnotwishtobeinferiortoothers.我不希望自己比别人差。n nbeinferiorto，比差，劣于，次于，不如n n例句Heisinferiortoothersinmanyrespects.他在许多方面不如别人。第43页，共49页，编辑于2022年，星期日Ihatetoseeyouinsuchlowspirits.我讨厌看到你这么情绪低落。n n主要是注意spirit

18、这个词的复数形式。作为“精神、心灵”意义的时候，是不可数名词；而作为“情绪，心情”的意义时，则一般都使用复数形式。n n例句：Hefeltinexcellentspiritswhenhearrivedhome.他回到家里时情绪非常好。第44页，共49页，编辑于2022年，星期日Itsverycreepytowalkaloneat1am.凌晨一点一个人走很害怕。n nCreepyCreepy和和scaryscary这两个形容词都是用来形容令人这两个形容词都是用来形容令人“害怕害怕”的感觉。但这两者其实有些小小的差异。的感觉。但这两者其实有些小小的差异。CreepyCreepy的的话是指话是指“心

19、里毛毛的心里毛毛的”那种感觉，而那种感觉，而scaryscary则是真则是真的令人感到害怕，所以在程度上来说的令人感到害怕，所以在程度上来说scaryscary比比creepycreepy还要来得恐怖些。比方说像是看恐怖电影，也许还要来得恐怖些。比方说像是看恐怖电影，也许你可以说你可以说 Itscreepy.Itscreepy.和和 Itsscary.Itsscary.都可以，但是都可以，但是如果像是去从事高空弹跳如果像是去从事高空弹跳(bungeejump)(bungeejump)，我想对，我想对大部分的人来说都是大部分的人来说都是scaryscary而不只是而不只是creepycreepy

20、了。（本了。（本句选自句选自小笨霖英语笔记本小笨霖英语笔记本）第45页，共49页，编辑于2022年，星期日Pleasehandthedocumentintome.请把那份文件交给我。n nhandin“提交，交出，递交”。这个句子也可以说成，Pleasesubmitthedocumenttome.n n例句：Pleasehandyourhomeworkinatonce.请把你们的家庭作业立刻交上来。第46页，共49页，编辑于2022年，星期日Amanisassistingpolicewiththeirinquiries.Amanisassistingpolicewiththeirinquiries.一名男子协助警方调查一名男子协助警方调查。Assistwith/in协助，帮助。例：Ateamofnursesassistedthedoctorinperformingtheoperation.一组护士协助医生施行手术。第47页，共49页，编辑于2022年，星期日Heminutesproceedingsofthemeeting.他作会议记录。n nWhoisgoingtotaketheminutes?谁来做会议记录？第48页，共49页，编辑于2022年，星期日第49页，共49页，编辑于2022年，星期日