藤茶综合开发.pptx

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1、会计学1藤茶综合开发藤茶综合开发1.1.藤茶植物资源藤茶植物资源n n藤茶，学名为显齿蛇葡萄藤茶，学名为显齿蛇葡萄 Ampelopsis grossedentata Ampelopsis grossedentata(Hand-Mazz)(Hand-Mazz)W.T.WangW.T.Wang ，为葡萄科，为葡萄科（Vitaceae MichxVitaceae Michx）蛇葡萄属（）蛇葡萄属（AmpelopsisAmpelopsis）的一种野生的一种野生木质落叶木质落叶藤本植物，属于典型的类茶植物，俗称山甜藤本植物，属于典型的类茶植物，俗称山甜茶、茶、白茶、甘露茶、白毛猴、白茶等，白茶、甘露茶、

2、白毛猴、白茶等，主要分布于我国湖南、湖主要分布于我国湖南、湖北、云南、贵州、广东、广西、福建等地北、云南、贵州、广东、广西、福建等地。藤茶原植物生长于海藤茶原植物生长于海拔拔400400 1300m1300m之间之间 ，集中或散生在山坡的混杂林中，野生贮量大，集中或散生在山坡的混杂林中，野生贮量大，分布和生长规律比较清晰，为可以直接利用的野生植物资源。分布和生长规律比较清晰，为可以直接利用的野生植物资源。第1页/共43页n n我国湖南、广西等地对藤茶植物的开发应用较早，我国湖南、广西等地对藤茶植物的开发应用较早，据资料，据资料，湖南省年产野生显齿蛇葡萄可达湖南省年产野生显齿蛇葡萄可达45045

3、0-500t500t。经过近经过近1010年来的开发，目前已在湖南、湖北等省开年来的开发，目前已在湖南、湖北等省开始人工栽培研究。湖北省内藤茶植物主要分布于鄂始人工栽培研究。湖北省内藤茶植物主要分布于鄂西南山区，特别是恩施州的来凤县大河地区盛产野西南山区，特别是恩施州的来凤县大河地区盛产野生藤茶，该地区除了分布显齿蛇葡萄（藤茶）外，生藤茶，该地区除了分布显齿蛇葡萄（藤茶）外，还分布有同科同属植物大叶蛇葡萄（还分布有同科同属植物大叶蛇葡萄（A.A.megalophylla Dielsmegalophylla Diels）、光叶蛇葡萄、光叶蛇葡萄(A.sinica var A.sinica var

4、 hancei(pl.)W.T.Wanghancei(pl.)W.T.Wang)等等；20002000年开始，当地科研部年开始，当地科研部门联合高校开展藤茶仿野生栽培试验并获成功，结门联合高校开展藤茶仿野生栽培试验并获成功，结果表明，人工栽培藤茶与现有野生藤茶药用品质相果表明，人工栽培藤茶与现有野生藤茶药用品质相同。同。第2页/共43页2.藤茶植物的加工产品藤茶植物的加工产品n n开发藤茶植物资源，目前最主要的加工产品为类茶产品，即冲泡开发藤茶植物资源，目前最主要的加工产品为类茶产品，即冲泡型商品型商品“藤茶藤茶”，各地分别有，各地分别有“藤茶藤茶”、“白猴白猴”、“甘露茶甘露茶”、“茅岩霉茶

5、茅岩霉茶”、“野藤茶野藤茶”、“龙须茶龙须茶”等俗称。通常于春夏季等俗称。通常于春夏季采回植株上的幼嫩茎叶，经炒制加工而成。采回植株上的幼嫩茎叶，经炒制加工而成。商品藤茶加工工艺流商品藤茶加工工艺流程程：原料：原料分级分级清洗清洗摊放摊放杀青杀青揉捻揉捻焖青焖青晒干晒干冷却冷却回润回润密封保存。密封保存。n n其它加工产品主要有：粉沫状的袋泡茶、压榨成型的藤茶饼、与其它加工产品主要有：粉沫状的袋泡茶、压榨成型的藤茶饼、与绿茶或红茶为伍的拼和茶、由藤茶茎叶水提取物浓缩加工的速溶绿茶或红茶为伍的拼和茶、由藤茶茎叶水提取物浓缩加工的速溶茶、藤茶饮料、藤茶含片、果冻、清凉藤茶糖等产品茶、藤茶饮料、藤茶

6、含片、果冻、清凉藤茶糖等产品。第3页/共43页3.藤茶的民间药用途径藤茶的民间药用途径n n藤茶为药食两用植物，最初作为一剂草药应用于民间。藤茶为药食两用植物，最初作为一剂草药应用于民间。我国广西、我国广西、湖南等省区壮族、瑶族和湖北土家族苗族人民常用其幼嫩茎叶入湖南等省区壮族、瑶族和湖北土家族苗族人民常用其幼嫩茎叶入茶茶,夏天泡茶，数日不馊夏天泡茶，数日不馊,有有“神茶神茶”之称，已有数百年的历史。之称，已有数百年的历史。据据中草药汇编中草药汇编等文献记载，该药性味甘淡、清热解毒，主治等文献记载，该药性味甘淡、清热解毒，主治黄疸型肝炎、感冒风热、咽喉肿痛等。民间认为，大凡失音、中黄疸型肝炎、

7、感冒风热、咽喉肿痛等。民间认为，大凡失音、中暑、口舌生疮、风火牙痛、便秘等症，用开水泡饮藤茶，疗效明暑、口舌生疮、风火牙痛、便秘等症，用开水泡饮藤茶，疗效明显；对马牙疳、脚丫湿疹等用藤茶外敷、外洗，也有一定疗效。显；对马牙疳、脚丫湿疹等用藤茶外敷、外洗，也有一定疗效。藤茶可全株药用，主要采用茎叶或根部，藤茶可全株药用，主要采用茎叶或根部，药用量因加工方法不同药用量因加工方法不同而异，磨服量小而异，磨服量小,代茶冲服量较大。代茶冲服量较大。第4页/共43页4.藤茶化学成分的研究藤茶化学成分的研究n n近近年年来来，关关于于同同科科同同属属不不同同种种的的蛇蛇葡葡萄萄属属植植物物的的化化学学成成分

8、分研研究究，国国内内外外均均有有报报道道。如如日日本本学学者者研研究究了了光光叶叶蛇蛇葡葡萄萄A.brevipedunculataA.brevipedunculata var.var.hanceihancei(pl.)Rehd(pl.)Rehd根根的的甲甲醇醇提提取取物物中中的的化化学学成成分分,从从中中分分离离出出白白藜藜芦芦醇醇苷苷及及蛇蛇葡葡萄萄素素等等成成分分；李李文文武武等等对对羽羽叶叶蛇蛇葡葡萄萄Ampelopsis Ampelopsis chaffanjoniichaffanjonii (Levl.)Rehd.(Levl.)Rehd.进进行研究行研究,从中分离得到酚甙成分蛇葡萄素

9、从中分离得到酚甙成分蛇葡萄素AmpelopsisinAmpelopsisin2020。n n关关于于显显齿齿蛇蛇葡葡萄萄植植物物（藤藤茶茶）化化学学成成分分的的研研究究，目目前前仅仅限限于于国国内内，主主要要针针对对我我国国湖湖南南、广广西西、福福建建、湖湖北北等等省省分分布布的的藤藤茶茶植植物物，包包括括对对藤藤茶茶中中存存在在的的化化学学成成分分种种类类、含含量量分分析析和和主主要要成成分分的的分分离离、鉴鉴定定及及相相关关分分析析方方法法的的建建立立等等，特特别别是是对对藤藤茶茶黄黄酮酮及及其其分分离离成成分分二二氢氢杨杨梅梅素素的的研研究究较较为为系系统统和全面。和全面。第5页/共43

10、页4.14.1藤茶基本化学成分的种类与含量藤茶基本化学成分的种类与含量 n n张友胜等对湖南显齿蛇葡萄幼嫩茎叶的干样进行了较全面的化学张友胜等对湖南显齿蛇葡萄幼嫩茎叶的干样进行了较全面的化学分析，测得粗蛋白含量为分析，测得粗蛋白含量为13.94%,13.94%,水溶性蛋白水溶性蛋白0.55%0.55%，总氨基酸，总氨基酸2.53%2.53%，1717种氨基酸中包含种氨基酸中包含8 8种人体必需氨基酸；总灰分种人体必需氨基酸；总灰分6.80%6.80%，包，包含丰富的无机营养元素；总多酚含丰富的无机营养元素；总多酚18.5%18.5%；特别是水浸出物含量高，；特别是水浸出物含量高，5 5次浸提总

11、浸提率高达次浸提总浸提率高达72.97%72.97%，其中高含量的总黄酮和二氢杨梅素，其中高含量的总黄酮和二氢杨梅素体现了该植物的特点；体现了该植物的特点；对挥发油成分分析显示，其挥发油总得率对挥发油成分分析显示，其挥发油总得率较低，以叶绿醇、正十六酸和雪松醇为主较低，以叶绿醇、正十六酸和雪松醇为主 。第6页/共43页4.2 藤茶黄酮及酚、甙类成分藤茶黄酮及酚、甙类成分n n采用水、乙醇、丙酮等作介质，对不同产地藤茶原料的提取物中经萃取、分采用水、乙醇、丙酮等作介质，对不同产地藤茶原料的提取物中经萃取、分离，主要得到黄酮类化合物，其次是酚类及甙类化合物。覃洁萍等从广西瑶离，主要得到黄酮类化合物

12、，其次是酚类及甙类化合物。覃洁萍等从广西瑶族藤茶的醇提物中分离到双氢杨梅树皮素（族藤茶的醇提物中分离到双氢杨梅树皮素（DL-dihydromyricetin,CDL-dihydromyricetin,C1515H H1212O O6 6）和）和杨梅树皮素（杨梅树皮素（Myricetin,CMyricetin,C1515H H1010O O6 6）两种黄酮物质。袁阿兴等以广西产藤茶地）两种黄酮物质。袁阿兴等以广西产藤茶地上部的水煎液冷却后得到沉淀和水相部分，从沉淀分离得到双氢黄酮醇结晶上部的水煎液冷却后得到沉淀和水相部分，从沉淀分离得到双氢黄酮醇结晶(福建茶素，即蛇葡萄素或称二氢杨梅素福建茶素，

13、即蛇葡萄素或称二氢杨梅素)，水相部分经浓缩、乙酸乙酯萃取、，水相部分经浓缩、乙酸乙酯萃取、分离得到分离得到4 4种结晶化合物：龙涎香醇、种结晶化合物：龙涎香醇、-谷甾醇谷甾醇、杨梅黄素（即杨梅素）和杨、杨梅黄素（即杨梅素）和杨梅甙（杨梅素梅甙（杨梅素-鼠李糖甙）。鼠李糖甙）。第7页/共43页n n对藤茶丙酮对藤茶丙酮-水提取物进行分离，乙酸乙酯萃取、聚酰胺柱层析纯水提取物进行分离，乙酸乙酯萃取、聚酰胺柱层析纯化得到化得到1 1种化合物（芦丁）；水相部分经分离得到种化合物（芦丁）；水相部分经分离得到3 3种化合物：没种化合物：没食子酰食子酰-D-D-葡萄糖、没食子酸乙酯和没食子酸。对福建藤茶醇提

14、葡萄糖、没食子酸乙酯和没食子酸。对福建藤茶醇提物再进行乙酸乙酯抽提得到的浸膏，分离出物再进行乙酸乙酯抽提得到的浸膏，分离出9 9种化合物：棕榈酸、种化合物：棕榈酸、-谷甾醇、大黄素、没食子酸甲酯、槲皮素、槲皮素谷甾醇、大黄素、没食子酸甲酯、槲皮素、槲皮素-3-O-3-O-D-D-葡葡萄糖甙、花旗松素、洋芹素和蛇葡萄素；以后再次从醇提物中分萄糖甙、花旗松素、洋芹素和蛇葡萄素；以后再次从醇提物中分离得到离得到2 2种新的甙类化合物：种新的甙类化合物：藤茶甙藤茶甙(grossedentataside)(grossedentataside)和藤茶素和藤茶素（grossedentstasin)gross

15、edentstasin)。第8页/共43页4.3 藤茶黄酮类成分的提取分离及测定方法藤茶黄酮类成分的提取分离及测定方法n n就现有资料显示，黄酮是藤茶中含量最高的一类化合物，就现有资料显示，黄酮是藤茶中含量最高的一类化合物，原料经脱脂脱色后，一般以原料经脱脂脱色后，一般以80%80%95%95%乙醇浸泡或回流提取乙醇浸泡或回流提取得到总黄酮，也可以甲醇回流或用水煎煮法提取得到总黄得到总黄酮，也可以甲醇回流或用水煎煮法提取得到总黄酮粗提物；依据藤茶黄酮溶于热水不溶于冷水、以及两种酮粗提物；依据藤茶黄酮溶于热水不溶于冷水、以及两种组分在乙醇、甲醇、丙酮中的溶解性差异对总黄酮提取液组分在乙醇、甲醇、

16、丙酮中的溶解性差异对总黄酮提取液采用除醇、重结晶、过柱等方法加以分离，可得到二氢杨采用除醇、重结晶、过柱等方法加以分离，可得到二氢杨梅素、杨梅素梅素、杨梅素2 2种主要活性成分。种主要活性成分。n n覃洁萍等以覃洁萍等以ZrOClZrOCl2 2 8H8H2 2O O 为为络合剂，络合剂，以二氢杨梅素为标样，以二氢杨梅素为标样，用差示分光光度法，最大吸收波长为用差示分光光度法，最大吸收波长为318nm318nm，测得广西瑶，测得广西瑶族藤茶精制品中总黄酮含量高达族藤茶精制品中总黄酮含量高达45%45%以上；何桂霞等以同以上；何桂霞等以同样方法对湖南不同产地不同采收期藤茶的叶、茎以样方法对湖南不

17、同产地不同采收期藤茶的叶、茎以95%95%乙乙醇提取总黄酮并进行含量测定，结果以醇提取总黄酮并进行含量测定，结果以5 5月份采集的藤茶月份采集的藤茶叶中总黄酮含量最高，为叶中总黄酮含量最高，为41.241.2 45.345.3，叶中含量高于茎，叶中含量高于茎中中3 3 4 4倍。倍。第9页/共43页n n用甲醇回流提取藤茶黄酮,以二氢杨梅素为标样，用三氯化铝分光光度法，最大吸收波长为294nm，总黄酮含量达45%左右，以薄层色谱法测得二氢杨梅素的含量高达37.438.5；熊皓平等用95%的乙醇回流浸提显齿蛇葡萄幼嫩茎叶中有效成分，以类似方法测得幼叶干样及加工成品中总黄酮含量均在36%以上。第1

18、0页/共43页5 藤茶药理作用与生物活性的研究藤茶药理作用与生物活性的研究n n5.1藤茶水煎剂及藤茶制剂的药理作用与临床应用n n基于藤茶在民间的药用功效，经动物药理试验及临床应用，均显示藤茶水提液、藤茶冲剂或复方藤茶制剂具有增强免疫功能、抑菌、消炎、镇痛、消肿等作用，毒理学试验表明长期饮服藤茶无毒副作用。第11页/共43页5.2 藤茶黄酮成分的生物活性研藤茶黄酮成分的生物活性研究究n n5.2.1 5.2.1 藤茶总黄酮及二氢杨梅素的抑菌作用藤茶总黄酮及二氢杨梅素的抑菌作用n n体外抑菌试验显示，直接作用于金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、乙型溶血体外抑菌试验显示，直接作用于金黄色葡萄球菌、表

19、皮葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌时，藤茶总黄酮有明显抑菌作用，其抑菌浓度多低于性链球菌、大肠埃希菌时，藤茶总黄酮有明显抑菌作用，其抑菌浓度多低于1.0mg.mL1.0mg.mL-1-1；小鼠体内抑菌试验表明；小鼠体内抑菌试验表明,藤茶总黄酮局部给药口腔粘膜藤茶总黄酮局部给药口腔粘膜0.73g.kg0.73g.kg-1 1，对金葡菌和甲型溶血性链球菌感染的小鼠具有一定的保护作用，对金葡菌和甲型溶血性链球菌感染的小鼠具有一定的保护作用,小鼠存活小鼠存活率分别提高率分别提高50%50%和和40%40%左右；金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌、副左右；金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、大肠杆菌

20、、副伤寒沙门氏菌等伤寒沙门氏菌等7 7种致病菌株的抑菌作用显示，二氢杨梅素与盐酸黄连素的抑种致病菌株的抑菌作用显示，二氢杨梅素与盐酸黄连素的抑菌效果相当，酸性和碱性环境下，二氢杨梅树皮素的抑菌效果显著强于中性菌效果相当，酸性和碱性环境下，二氢杨梅树皮素的抑菌效果显著强于中性条件下的抑菌效果。条件下的抑菌效果。第12页/共43页5.2.2 5.2.2 5.2.2 5.2.2 藤茶总黄酮及二氢杨梅素的抗氧化作用藤茶总黄酮及二氢杨梅素的抗氧化作用藤茶总黄酮及二氢杨梅素的抗氧化作用藤茶总黄酮及二氢杨梅素的抗氧化作用n n淋淋淑淑英英等等对对藤藤茶茶黄黄酮酮分分离离成成分分二二氢氢杨杨梅梅素素在在植植物

21、物油油和和猪猪油油体体系系中中的的抗抗氧氧化化效效果果进进行行了了研研究究。以以95%95%纯纯度度的的二二氢氢杨杨梅梅素素添添加加到到猪猪油油体体系系中中，测测定定丙丙二二醛醛吸吸光光值值和和过过氧氧化化物物值值来来评评价价其其抗抗氧氧化化效效果果，结结果果显显示示，二二氢氢杨杨梅梅素素在在猪猪油油体体系系的的抗抗氧氧化化作作用用明明显显，最最优优添添加加量量为为0.04%0.04%；当当同同时时添添加加0.02%0.02%的的抗抗坏坏血血酸酸或或柠柠檬檬酸酸或或EDTAEDTA作作增增效效剂剂时时,可可有有效效地地提提高高二二氢氢杨杨梅梅素素的的抗抗氧氧化化性性能能；在在植植物物油油体体系

22、系中中设设定定DMY(DMY(二二氢氢杨杨梅梅素素)与与其其它它抗抗氧氧化化剂剂浓浓度度为为0.02%0.02%，以以MDAMDA（过过氧氧化化脂脂质质代代谢谢物物-丙丙二二醛醛）作作检检测测指指标标,各各种种抗抗氧氧化化剂剂的的抗抗氧氧化化效效果果依依次次是是:TBHQDMYTBHQDMY儿儿茶茶酚酚 大大豆豆异异黄黄酮酮 葛葛根根异异黄黄酮酮 对对照照；DMYDMY在在0 0 0.1%0.1%的的浓浓度度范范围围内内,其其抗抗氧氧化化效效果果随随浓浓度度增增加加而而增增强强；发发挥挥抗抗氧氧化化效效果果的的适适宜宜pH4pH4 5 5，醇醇溶溶DMYDMY优优于于水水溶溶，低浓度下低浓度下

23、DMYDMY的抗氧化效果受的抗氧化效果受FeFe2+2+影响而降低。影响而降低。第13页/共43页n n何桂霞等何桂霞等研究了藤茶总黄酮及二氢杨梅素清除氧自由基和研究了藤茶总黄酮及二氢杨梅素清除氧自由基和抗脂质过氧化作用。抗脂质过氧化作用。藤茶总黄酮藤茶总黄酮(TCF)(TCF)对黄嘌呤对黄嘌呤-黄嘌呤氧黄嘌呤氧化酶系统产生的化酶系统产生的O O2 2-有显著的抑制作用，存在良好的量效有显著的抑制作用，存在良好的量效关系；关系；TCFTCF对大鼠肝匀浆自氧化的抑制作用在对大鼠肝匀浆自氧化的抑制作用在2.52.5 40.040.0 g.mLg.mL-1-1范围内呈剂量范围内呈剂量-效应关系，效应

24、关系，通过分光光度法测定过氧通过分光光度法测定过氧化产物化产物MDAMDA，研究二氢杨梅素（，研究二氢杨梅素（DMYDMY）的体外抗脂质过氧化）的体外抗脂质过氧化作用，结果显示，作用，结果显示，DMYDMY对离体的大鼠脏器组织匀浆脂质过对离体的大鼠脏器组织匀浆脂质过氧化以及由氧化以及由 FeFe2+2+-VitC-VitC 体系、体系、FeFe2+2+-H-H2 2O O2 2体系、体系、FeFe2+2+-Cys-Cys体体系诱导的组织匀浆及肝线粒体脂质过氧化均有较强的抑制系诱导的组织匀浆及肝线粒体脂质过氧化均有较强的抑制作用，在作用，在DMYDMY终浓度为终浓度为5 5 2020 mol.L

25、mol.L-1-1的范围内，呈现较明的范围内，呈现较明显的量效关系，对肝组织匀浆的抗氧化效果最显著。显的量效关系，对肝组织匀浆的抗氧化效果最显著。第14页/共43页5.2.3 藤茶总黄酮及二氢杨梅素的降血糖作用藤茶总黄酮及二氢杨梅素的降血糖作用n n钟正贤等将实验小鼠分为正常对照组钟正贤等将实验小鼠分为正常对照组、模型组模型组、二甲双胍二甲双胍(150mg/kg)(150mg/kg)组组,每天灌胃给药每天灌胃给药1 1次，广西藤茶次，广西藤茶总黄酮总黄酮（GXTFGXTF）大小剂量组分别大小剂量组分别125mg125mg/kgkg和和62mg62mg/kgkg，对照组和对照组和模型组给予等体积

26、蒸馏水模型组给予等体积蒸馏水，连续连续7d7d。于末次给药后。于末次给药后1h,1h,小小鼠眼眶静脉丛取血测定血糖水平鼠眼眶静脉丛取血测定血糖水平。与模型组比较与模型组比较，GXTFGXTF大大小剂量组对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高有抑制作用小剂量组对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖升高有抑制作用；于于末次给药后末次给药后1 h 1 h，给药组给药组ip.ip.葡萄糖葡萄糖(2g(2g/kg)kg)溶液或射肾溶液或射肾上腺素上腺素(240(240 g/g/kg)kg)并开始计时并开始计时，于于0.5 0.5、1h1h后后，取血测取血测定血糖值，结果表明定血糖值，结果表明,GXTF GXTF对对0.5,1h

27、0.5,1h葡萄糖引起的血糖升葡萄糖引起的血糖升高具有明显抑制作用，具有明显对抗肾上腺素的升血糖作高具有明显抑制作用，具有明显对抗肾上腺素的升血糖作用；阳性对照药优降糖则有明显地降低正常小鼠血糖作用，用；阳性对照药优降糖则有明显地降低正常小鼠血糖作用，而而GXTFGXTF对正常小鼠血糖值未见明显影响对正常小鼠血糖值未见明显影响；第15页/共43页n n急性毒性试验显示，急性毒性试验显示，GXTFGXTF对正常小鼠无明显毒副作用，对正常小鼠无明显毒副作用，最大灌胃量为最大灌胃量为26.0g26.0g/kg kg。以正常小鼠、四氧嘧啶所致糖尿病小鼠模型及由葡萄糖、肾上腺以正常小鼠、四氧嘧啶所致糖尿

28、病小鼠模型及由葡萄糖、肾上腺素引起的高血糖小鼠模型素引起的高血糖小鼠模型，进行，进行双氢杨梅树皮素的降血糖试验。双氢杨梅树皮素的降血糖试验。以以二甲双胍二甲双胍(0.15g/kg)(0.15g/kg)组组作阳性对照，作阳性对照，每天灌胃双氢杨梅树皮素一次，大小剂量组每天灌胃双氢杨梅树皮素一次，大小剂量组分别分别为为0.25g/kg0.25g/kg和和0.125 g/kg,0.125 g/kg,对照组和四氧嘧啶组给予等体积蒸馏水对照组和四氧嘧啶组给予等体积蒸馏水,连续连续7d7d，末次给药后，末次给药后1h 1h 测定血糖水平测定血糖水平。结果显示，。结果显示，双氢杨梅树皮素对正常小鼠血糖双氢杨

29、梅树皮素对正常小鼠血糖无无明显影响；对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有明显的降血糖作用无无明显影响；对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有明显的降血糖作用,其中高剂量其中高剂量组效果与阳性组对照组的效果相当；大、小剂量的二氢杨梅素组效果与阳性组对照组的效果相当；大、小剂量的二氢杨梅素对葡萄糖、肾对葡萄糖、肾上腺素引起的高血糖模型小鼠也有明显的降血糖效果上腺素引起的高血糖模型小鼠也有明显的降血糖效果。第16页/共43页5.2.4 藤茶总黄酮及二氢杨梅素的降血脂作用藤茶总黄酮及二氢杨梅素的降血脂作用n n动物实验结果表明，动物实验结果表明，GXTFGXTF能降低高血脂症模型小鼠血脂和血糖水能降低高血脂症模型小鼠血脂和

30、血糖水平；明显抑制大鼠体外血小板聚集和体内血栓形成；提高平；明显抑制大鼠体外血小板聚集和体内血栓形成；提高D-D-半乳半乳糖所致衰老模型小鼠血清和肝脏中超氧化物歧化酶糖所致衰老模型小鼠血清和肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)(SOD)活性，抑活性，抑制丙二醛制丙二醛(MDA)(MDA)的生成，说明的生成，说明GXTFGXTF具有降血脂和抗氧化作用、抗血具有降血脂和抗氧化作用、抗血小板聚集和血栓形成的作用。陈晓军等以高脂血症模型小鼠和实小板聚集和血栓形成的作用。陈晓军等以高脂血症模型小鼠和实验性高脂血症鹌鹑进行藤茶总黄酮验性高脂血症鹌鹑进行藤茶总黄酮(TFAG)(TFAG)的降血脂实验，结果表的降血

31、脂实验，结果表明明TFAGTFAG高、低剂量高、低剂量(400,200mg/kg)(400,200mg/kg)均有降低实验动物血清均有降低实验动物血清TCTC、TGTG及及AIAI和升高血清和升高血清HDL-CHDL-C的作用的作用,可抑制肝脏脂肪化病变动脉粥样硬可抑制肝脏脂肪化病变动脉粥样硬化。化。第17页/共43页5.2.5 藤茶总黄酮及其主要成分的保肝护肝作用藤茶总黄酮及其主要成分的保肝护肝作用n n对实验小鼠连续灌胃藤茶总黄酮对实验小鼠连续灌胃藤茶总黄酮(TCF/800(TCF/800，400400，200mg/kg)7d200mg/kg)7d，再，再腹腔注射腹腔注射0.1%CCl0.

32、1%CCl4 4的花生油溶液致小鼠急性肝损伤，的花生油溶液致小鼠急性肝损伤，16h16h后测定肝后测定肝损伤鼠血清谷丙转氨酶损伤鼠血清谷丙转氨酶(ALT)(ALT)和谷草转氨酶和谷草转氨酶(AST)(AST)活性、肝中超氧活性、肝中超氧化物歧化酶化物歧化酶(SOD)(SOD)活性和肝中丙二醛活性和肝中丙二醛(MDA)(MDA)生成量，结果表明，生成量，结果表明，TCFTCF可降低肝损伤小鼠血清可降低肝损伤小鼠血清ALTALT、ASTAST值，减少肝组织匀浆值，减少肝组织匀浆MDAMDA的生成，增强的生成，增强SODSOD的活性，呈剂量依赖关系；病理学检查显示的活性，呈剂量依赖关系；病理学检查显

33、示TCFTCF对肝脏细胞的病理损伤有减轻作用；郑作文等证实广西藤茶双氢对肝脏细胞的病理损伤有减轻作用；郑作文等证实广西藤茶双氢杨梅树皮素对四氯化碳和半乳糖胺致小鼠急性肝损伤具有保护作杨梅树皮素对四氯化碳和半乳糖胺致小鼠急性肝损伤具有保护作用。用。第18页/共43页5.2.6 藤茶黄酮类成分的其它药理作用藤茶黄酮类成分的其它药理作用n n曾曾春春晖晖等等对对小小鼠鼠脾脾细细胞胞体体外外培培养养试试验验显显示示，藤藤茶茶二二氢氢杨杨梅梅素素(APS)(APS)对对ConAConA诱诱导导的的小小鼠鼠淋淋巴巴细细胞胞增增殖殖有有明明显显的的增增强强作作用用，提提示示APSAPS有有免免疫疫增增强强功

34、功能能；藤藤茶茶总总黄黄酮酮在在最最大大无无毒毒浓浓度度(62.5(62.5 g.mLg.mL-1-1)下下，对对HBVHBV基基因因转转染染的的人人肝肝癌癌细细胞胞系系22152215细细胞胞分分泌泌乙乙型型肝肝炎炎病病毒毒HBsAgHBsAg和和HBeAgHBeAg的的抑抑制制率率分分别别为为43.14%43.14%和和33.76%33.76%，同同时时可可一定程度地抑制一定程度地抑制HBVDNAHBVDNA的合成。的合成。n n在在前前人人研研究究基基础础上上，以以鄂鄂西西藤藤茶茶为为原原料料研研究究了了藤藤茶茶总总黄黄酮酮与与水水溶溶性性多多糖糖的的综综合合提提取取工工艺艺，并并证证实

35、实该该工工艺艺提提取取的的藤藤茶茶总总黄黄酮酮具具有有显显著著的的体体内内外外抗抗氧氧化化、降降血糖、抗肿瘤活性。血糖、抗肿瘤活性。第19页/共43页5.3 5.3 藤茶多糖的生物活性研究藤茶多糖的生物活性研究n n由于藤茶植物中黄酮类物质的高含量，我国目前对藤茶植物成分的研究主要集中在藤茶黄酮方面，关于藤茶多糖的研究报道不多。从鄂西藤茶中提取藤茶水溶性多糖，其多糖粗品得率可达7%左右，经脱蛋白等初步纯化处理后得藤茶多糖AGP得率约为4.5%，该多糖具有一定的抗氧化活性，并具有增强免疫与抗肿瘤效果。第20页/共43页6.6.6.6.藤茶水溶性多糖及总黄酮的提取工艺研究藤茶水溶性多糖及总黄酮的提

36、取工艺研究藤茶水溶性多糖及总黄酮的提取工艺研究藤茶水溶性多糖及总黄酮的提取工艺研究n n6.16.16.16.1原料原料原料原料n n鄂西产藤茶（保健茶成品），由鄂西藤茶公司藤茶研究所鉴定为鄂西产藤茶（保健茶成品），由鄂西藤茶公司藤茶研究所鉴定为Ampelopsis grossedentataAmpelopsis grossedentata。经粉碎并过。经粉碎并过2020目筛得藤茶粗粉，密目筛得藤茶粗粉，密封备用。封备用。n n6.26.26.26.2主要试剂与设备主要试剂与设备主要试剂与设备主要试剂与设备n n工业乙醇工业乙醇(95%(95%以上以上)，浓硫酸、葡萄糖、苯酚、氯仿、正丁醇等均

37、，浓硫酸、葡萄糖、苯酚、氯仿、正丁醇等均为为ARAR级。级。n n植物组织粉碎机、电热恒温水浴锅、离心机、真空浓缩器，植物组织粉碎机、电热恒温水浴锅、离心机、真空浓缩器，UV-UV-VISVIS分光光度计等。分光光度计等。第21页/共43页6.3 方法方法n n6.3.1 藤茶多糖与总黄酮的综合提取藤茶多糖与总黄酮的综合提取n n根据藤茶总黄酮的溶解特性，本文通过以根据藤茶总黄酮的溶解特性，本文通过以下工艺比较醇提黄酮再水提多糖（路线下工艺比较醇提黄酮再水提多糖（路线1）和同时热水浸提黄酮与多糖（路线和同时热水浸提黄酮与多糖（路线2）两条）两条工艺路线的总黄酮、粗多糖得率，以比较工艺路线的总黄

38、酮、粗多糖得率，以比较两条综合提取工艺路线的优劣。两条综合提取工艺路线的优劣。第22页/共43页路线路线1 1：n n藤茶粗粉按藤茶粗粉按1:31:3料液比加入石油醚回流料液比加入石油醚回流2 2次，次，1h/1h/次，残渣以次，残渣以1:31:3料料液比加液比加95%95%乙醇回流提取乙醇回流提取2 2次，次，1h/1h/次，合并醇提液，除去乙醇，加次，合并醇提液，除去乙醇，加适量蒸馏水加热溶解并趁热过滤，滤液冷却析出晶体，离心，收适量蒸馏水加热溶解并趁热过滤，滤液冷却析出晶体，离心，收集沉淀，再复溶析晶一次，干燥得总黄酮粗粉，按原料重计算得集沉淀，再复溶析晶一次，干燥得总黄酮粗粉，按原料重

39、计算得率。率。n n收集醇提后的残渣，挥干乙醇后，按收集醇提后的残渣，挥干乙醇后，按1:301:30料液比加入蒸馏水于料液比加入蒸馏水于9595水浴提取多糖水浴提取多糖2 2次，次，1h/1h/次，收集滤液并浓缩为小体积，加入次，收集滤液并浓缩为小体积，加入3 3倍体积的工业乙醇混匀后静置倍体积的工业乙醇混匀后静置24 h24 h，离心收集沉淀并以无水乙醇，离心收集沉淀并以无水乙醇洗涤沉淀洗涤沉淀2 2次，干燥得粗多糖，按原料重计算得率。次，干燥得粗多糖，按原料重计算得率。第23页/共43页路线路线2 2：n n藤茶粗粉按藤茶粗粉按1:31:3料液比加入石油醚加回流料液比加入石油醚加回流2 2

40、次，次，1h/1h/次。残渣按次。残渣按1:30 1:30 料液比加入蒸馏水于料液比加入蒸馏水于9595水浴浸提水浴浸提2 2次，次，1h/1h/次。趁热过滤，浓缩次。趁热过滤，浓缩滤液为小体积后、冷却低温放置滤液为小体积后、冷却低温放置2-3d2-3d，充分析出晶体。离心并收，充分析出晶体。离心并收集沉淀（同路线集沉淀（同路线1 1），得到总黄酮粗粉。），得到总黄酮粗粉。n n对离心后的上清液加入对离心后的上清液加入3 3倍体积的工业乙醇，混匀后静置倍体积的工业乙醇，混匀后静置24 h24 h（同（同路线路线1 1），得粗多糖。），得粗多糖。第24页/共43页6.3.2 多糖含量的测定与提取

41、效果的两种表示方法多糖含量的测定与提取效果的两种表示方法n n苯酚苯酚苯酚苯酚-硫酸法测定多糖含量硫酸法测定多糖含量硫酸法测定多糖含量硫酸法测定多糖含量7777。n n多多多多糖糖糖糖得得得得率率率率表表表表示示示示方方方方法法法法：以以以以葡葡葡葡萄萄萄萄糖糖糖糖制制制制作作作作标标标标准准准准曲曲曲曲线线线线，回回回回归归归归方方方方程程程程为为为为A A A A490490490490=0.0235X+0.0039=0.0235X+0.0039=0.0235X+0.0039=0.0235X+0.0039，r=0.9995r=0.9995r=0.9995r=0.9995。测测测测定定定定多

42、多多多糖糖糖糖粗粗粗粗提提提提液液液液中中中中多多多多糖糖糖糖含含含含量量量量后后后后，换换换换算算算算成成成成原原原原料料料料多多多多糖糖糖糖得得得得率率率率，用用用用以以以以表表表表示示示示少少少少量量量量原原原原料料料料的的的的多多多多糖糖糖糖提取效果。计算公式为提取效果。计算公式为提取效果。计算公式为提取效果。计算公式为 多糖得率多糖得率多糖得率多糖得率(%)=(%)=(%)=(%)=（Xa0.910Xa0.910Xa0.910Xa0.910-4-4）/W/W/W/W X-X-X-X-由由由由粗粗粗粗提提提提液液液液吸吸吸吸光光光光度度度度据据据据标标标标准准准准曲曲曲曲线线线线回回回

43、回归归归归方方方方程程程程求求求求得得得得的的的的糖糖糖糖含含含含量量量量(g)(g)(g)(g)；a-a-a-a-取样体积倍数；取样体积倍数；取样体积倍数；取样体积倍数；W-W-W-W-原料重原料重原料重原料重(g)(g)(g)(g)；0.9-0.9-0.9-0.9-葡萄糖对多糖的换算系数；葡萄糖对多糖的换算系数；葡萄糖对多糖的换算系数；葡萄糖对多糖的换算系数；10101010-4-4-重量单位换算系数。重量单位换算系数。重量单位换算系数。重量单位换算系数。第25页/共43页6.4 结果与分析结果与分析n n6.4.1 浸提单因素对水溶性多糖得率的影响浸提单因素对水溶性多糖得率的影响n n6

44、.4.1.16.4.1.16.4.1.16.4.1.1浸提时间的影响浸提时间的影响浸提时间的影响浸提时间的影响 设定提取温度设定提取温度设定提取温度设定提取温度90909090，水料比，水料比，水料比，水料比20:120:120:120:1，提取，提取，提取，提取1 1 1 1次，不同浸提时间的水次，不同浸提时间的水次，不同浸提时间的水次，不同浸提时间的水溶性多糖得率如图溶性多糖得率如图溶性多糖得率如图溶性多糖得率如图1 1 1 1所示。随提取时间的延长而得率增加，但总的所示。随提取时间的延长而得率增加，但总的所示。随提取时间的延长而得率增加，但总的所示。随提取时间的延长而得率增加，但总的来看

45、增加幅度不大。来看增加幅度不大。来看增加幅度不大。来看增加幅度不大。第26页/共43页第27页/共43页6.4.1.2 6.4.1.2 水料比的影响水料比的影响n n图图2 2所示，固定提取温度所示，固定提取温度9090，浸提时间为，浸提时间为2h2h，提，提取取1 1次，水溶性多糖得率最初随水料比的增加而提次，水溶性多糖得率最初随水料比的增加而提高高,30:1,30:1时达到最高时达到最高,而后有所下降而后有所下降,可能与同一可能与同一水浴加热时水料比大者升温慢有关。水浴加热时水料比大者升温慢有关。第28页/共43页6.4.1.3 6.4.1.3 温度的影响温度的影响n n固定水料比固定水料

46、比30:130:1，浸提时间为，浸提时间为2h2h，提取，提取1 1次，不同温度下的多糖得率次，不同温度下的多糖得率如图如图3 3所示。水溶性多糖得率随温度的上升而逐渐增加，并且在设定所示。水溶性多糖得率随温度的上升而逐渐增加，并且在设定的温度范围内，相邻两温度间的得率相差不大，但间隔的温度范围内，相邻两温度间的得率相差不大，但间隔20203030的处的处理间多糖得率差异明显。出于对常规提取时温度的可控性考虑，未对理间多糖得率差异明显。出于对常规提取时温度的可控性考虑，未对100100以上的温度进行实验。以上的温度进行实验。第29页/共43页6.4.1.4 6.4.1.4 6.4.1.4 6.

47、4.1.4 提取次数对多糖提取率的影响提取次数对多糖提取率的影响提取次数对多糖提取率的影响提取次数对多糖提取率的影响n n设定提取温度设定提取温度9090，水料比，水料比30:130:1，提取时间，提取时间2h2h，少量原料，少量原料提取提取3 3次，分别测定每次提取的多糖含量。如图次，分别测定每次提取的多糖含量。如图4 4所示，若所示，若以以3 3次提取总量合为次提取总量合为100%100%提取率，第提取率，第1 1次提取率为次提取率为91.04%,91.04%,第第1 1、2 2次提取率之和达到次提取率之和达到97%97%以上。所以在优化其它因素以上。所以在优化其它因素以后，选择提取以后，

48、选择提取2 2次为宜，既减少后期浓缩的困难，又节次为宜，既减少后期浓缩的困难，又节省能耗。省能耗。第30页/共43页6.4.2 6.4.2 中心组合试验结果与回归方程的拟合中心组合试验结果与回归方程的拟合n n参考单因素试验结果，以温度、料液比和浸提时间作主要因素，中心组合设计（CCD）参照文献方法，因素与水平配制如表1。为避开二次提取时残渣转移的损失所带来的影响，每个组合仍以提取1次的多糖得率计算。第31页/共43页表表表表1 1 1 1 中心组合设计的因素与水平表中心组合设计的因素与水平表中心组合设计的因素与水平表中心组合设计的因素与水平表Tab.1 Factors and levels

49、table of central composite Tab.1 Factors and levels table of central composite Tab.1 Factors and levels table of central composite Tab.1 Factors and levels table of central composite design(CCD)design(CCD)design(CCD)design(CCD)因素与水平温度X1（）水料比X2浸提时间X3（h）-16515:11.008025:12.5+19535:14.0第32页/共43页表表表表2 2

50、 2 2 中心组合试验方案与结果中心组合试验方案与结果中心组合试验方案与结果中心组合试验方案与结果Tab.2 Experimental design and results of the CCDTab.2 Experimental design and results of the CCDTab.2 Experimental design and results of the CCDTab.2 Experimental design and results of the CCD试验号X1X2X3多糖得率Y(%)Y预测值(%)1-1-102.532.622-10-12.572.603-1013.