动物细胞培养和核移植技术-高二下学期生物人教版选修3.pptx

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1、动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其中其中动物细胞培养动物细胞培养技术是其他技术是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞工程技术的基础.2.2 动物细胞工程动物细胞工程一一.动物细胞培养概念：动物细胞培养概念：1.1.材料：材料：2.2.过程：过程：3.3.目的：目的：4.4.原理：原理：形成组织、细胞（不能形成个体）形成组织、细胞（不能形成个体）细胞增殖细胞增殖动物的组织动物的组织动物的组织动物的组织分散成单个细胞分散成单个细胞放放入培养基入培养基细胞生长和增殖细胞生长和增殖二二.动物细

2、胞培养过程：动物细胞培养过程：阅读课本阅读课本44-4644-46页第一自然段，约页第一自然段，约3 3分钟分钟1.1.应该选择动物的应该选择动物的 组织，原因是组织，原因是 。A.A.胚胎胚胎 B.B.幼龄动物幼龄动物 C.C.性性成熟动物成熟动物 D.D.老龄动物老龄动物2.2.为什么要将动物组织分散成单个细胞？为什么要将动物组织分散成单个细胞？3.3.方法是方法是 .(1)(1)胰蛋白酶的作用是胰蛋白酶的作用是 。（2 2）能否用胃蛋白酶，如若不能，则是因为动物）能否用胃蛋白酶，如若不能，则是因为动物细胞培养的细胞培养的PHPH为为 。A.2.0 A.2.0 B.7.2-7.4B.7.2

3、-7.4 C.5.0-6.1C.5.0-6.1 D.10.2-11.0D.10.2-11.0分解蛋白质，使组织分散成单个细胞分解蛋白质，使组织分散成单个细胞A、BB能保证细胞所需的营养供应。能保证细胞所需的营养供应。能保证细胞内有害代谢产物的及时排出。能保证细胞内有害代谢产物的及时排出。增殖能力强，增殖能力强，分化程度低分化程度低（3 3）细胞膜的主要成份是）细胞膜的主要成份是 ，胰蛋白，胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？在使用时应注意什么问题酶能将细胞消化掉吗？在使用时应注意什么问题？4.4.制成细胞悬液：将分散的细胞进行制成细胞悬液：将分散的细胞进行 。5.5.原代培养：将原代培养：将 放入培养瓶

4、内，置于放入培养瓶内，置于适宜环境中培养。适宜环境中培养。(1)(1)用到的培养基是用到的培养基是 （固体或液体）培养基。（固体或液体）培养基。培养基的成分有培养基的成分有 。蛋白质和磷脂蛋白质和磷脂注意控制时间注意控制时间稀释稀释细胞悬液细胞悬液液体液体营养物质，营养物质，PH等等（2 2）贴壁生长：）贴壁生长：要求培养瓶内表面要求培养瓶内表面 。细胞分裂方式是细胞分裂方式是 。光滑、无毒，光滑、无毒，易于贴附易于贴附有丝分裂有丝分裂（3 3）接触抑制：）接触抑制：概念：概念：细胞分裂细胞分裂 。原因是细胞膜上有原因是细胞膜上有 （物质），（物质），具有黏着性。具有黏着性。正常细胞原代培养时

5、，出现接触抑制，此时正正常细胞原代培养时，出现接触抑制，此时正常细胞会长成常细胞会长成 层。层。如若癌细胞原代培养时，如若癌细胞原代培养时，（是或否）会出（是或否）会出现接触抑制现象，此时癌细胞会长成现接触抑制现象，此时癌细胞会长成 层。层。停止停止糖蛋白糖蛋白一一否否多多6.6.传代培养：传代培养：(1)(1)先用胰蛋白酶等处理先用胰蛋白酶等处理 的细胞，再分的细胞，再分瓶继续培养。瓶继续培养。（2 2）代左右时，细胞增殖缓慢，甚至停止。代左右时，细胞增殖缓慢，甚至停止。（3 3）部分细胞）部分细胞 发生变化，少部分细胞获得发生变化，少部分细胞获得不死性，能无限增殖。这些细胞的遗传物质不死性

6、，能无限增殖。这些细胞的遗传物质 ，称为细胞系。，称为细胞系。贴满瓶壁贴满瓶壁10-50核型核型改变改变原代培养的细胞一般传至原代培养的细胞一般传至1010代左右，细胞生长停代左右，细胞生长停滞，大部分衰老死亡，少数细胞能存活并继续传滞，大部分衰老死亡，少数细胞能存活并继续传至至40-5040-50代，这种传代细胞为代，这种传代细胞为细胞株细胞株。细胞株传至细胞株传至5050代后会再次出现停滞，不能再传代，代后会再次出现停滞，不能再传代，但部分细胞的遗传物质发生了改变，带有癌变特但部分细胞的遗传物质发生了改变，带有癌变特点，可在培养条件下无限制地传下去，这种传代点，可在培养条件下无限制地传下去

7、，这种传代细胞为细胞为细胞系细胞系。细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。去接触抑制，容易传代培养。用于核移植时的供体细胞一般选择用于核移植时的供体细胞一般选择1010代内的细胞。代内的细胞。因为传至因为传至10501050代时，部分细胞核型可能会发生代时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而变化，其细胞遗传物质可能会发生突变，而1010代代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型。原代培养的特点：原代培养的特点：，。归纳归

8、纳过程过程取取 的组织、器官的组织、器官细胞悬浮液细胞悬浮液 酶酶 贴满瓶壁的细胞贴满瓶壁的细胞单个细胞单个细胞加入加入 液液动物胚胎或幼龄动物动物胚胎或幼龄动物胰蛋白胰蛋白培养培养接触抑制接触抑制原代原代 培养培养(分装前分装前)1-10代细胞代细胞贴壁生长贴壁生长原代细胞原代细胞培养培养加加 液液4050代细胞代细胞(细胞株细胞株)未未无限传代（无限传代（细胞系细胞系）已已 培养培养胰蛋白胰蛋白 酶酶 练习：分层练习：分层P86:5题。题。传代传代短期和临时性的保存短期和临时性的保存可以采用可以采用一般一般的低温的低温，如哺乳动物的细胞在，如哺乳动物的细胞在44左左右可存活几十天甚至几个月

9、右可存活几十天甚至几个月。长期的保存长期的保存方法目前一般采用方法目前一般采用超低超低温冻存法温冻存法，即将细胞和保护剂放入，即将细胞和保护剂放入-196-196 的的液氮液氮中进行保存。中进行保存。三三.冷冻和复苏：冷冻和复苏：2.复苏：复苏：1.冷冻保存：冷冻保存：随时取出迅速放入随时取出迅速放入3737温水温水中解冻中解冻保存主要措施：降低温度保存主要措施：降低温度目前使用的或冷冻保存的目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常为正常细胞通常为10代以内，代以内，以保持细胞正常的二倍体以保持细胞正常的二倍体核型。核型。1.1.的环境：的环境：（1 1）培养液和所有培养用具进行）培养液和所有培养用

10、具进行 处理。处理。（2 2）抗生素的作用是）抗生素的作用是 。（3 3）应）应 ，以便清除代谢废物。，以便清除代谢废物。2.2.营养：（营养：（1 1）无机物：无机盐、）无机物：无机盐、。（2)2)有机物：有机物：。注：培养基中添加动物血清的原因是：注：培养基中添加动物血清的原因是：四四.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件 阅读课本阅读课本4646页，约页，约2 2分钟分钟血清中含有多种维持细胞正常代谢和生长的物质，血清中含有多种维持细胞正常代谢和生长的物质，如蛋白质、氨基酸和未知的促生长因子。如蛋白质、氨基酸和未知的促生长因子。无菌、无毒无菌、无毒灭菌灭菌避免杂菌污染避免杂菌污染定期更换

11、培养液定期更换培养液微量元素微量元素糖、氨基酸、促生长因子、动物血清糖、氨基酸、促生长因子、动物血清四四.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件3.3.温度和温度和PH PH：温度：温度：36.50.5 36.50.5（一般）（一般）PHPH:7.2-7.47.2-7.44.4.气体环境气体环境:9595的的O O2 2 作用是作用是 。5 5的的COCO2 2作用是作用是 。参与细胞代谢参与细胞代谢维持培养液的维持培养液的PH练习：非常学案练习：非常学案P31:1题。题。1.1.利用动物细胞的大规模培养来生产生物制品。利用动物细胞的大规模培养来生产生物制品。2.2.检测检测 ，判断某种物质的毒

12、性。，判断某种物质的毒性。3.3.动物细胞是基因工程技术中常用的动物细胞是基因工程技术中常用的 。4.4.用于用于 等方面的研究。等方面的研究。五五.动物细胞培养技术的应用：动物细胞培养技术的应用：阅读课本阅读课本46-4746-47页第一自然段，约页第一自然段，约2 2分钟分钟有毒物质有毒物质受体细胞受体细胞生理、病理、药理生理、病理、药理练习：非常学案练习：非常学案P32:3题。题。1 1、在动物细胞培养过程中遗传、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是物质发生改变的细胞是 A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞2 2、动物细胞工程技术

13、的基础是、动物细胞工程技术的基础是 A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD3 3、用于动物细胞培养的组织和、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞主要原因是这样的组织细胞 A.A.容易产生各种变异容易产生各种变异 B.B.具有更强的全能性具有更强的全能性C.C.取材十分方便取材十分方便 D.D.分裂增殖的能力强分裂增殖的能力强D4 4、为使培养的动物组织细胞分、为使培养的动物组织细胞分散开，以便配

14、制成一定浓度的散开，以便配制成一定浓度的细胞悬浮液，选取的动物组织细胞悬浮液，选取的动物组织进行处理时应首先选用下列物进行处理时应首先选用下列物质中的（质中的（）A A胃蛋白酶胃蛋白酶 B B胰蛋白酶胰蛋白酶C C盐酸盐酸 D D胰脂肪酶胰脂肪酶B5 5、关于动物细胞培养的叙述错误的、关于动物细胞培养的叙述错误的是（是（）A A用于培养的细胞大都取自胚胎或用于培养的细胞大都取自胚胎或幼龄动物的器官或组织幼龄动物的器官或组织B B将所取的组织先用胰蛋白酶等进将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞行处理使其分散成单个细胞C C在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D D动物细胞培养只能传动物细胞培养只能传5050代左右，代左右，所培养的细胞会衰老死亡所培养的细胞会衰老死亡D