dna扩增技术总结.docx

《dna扩增技术总结.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《dna扩增技术总结.docx（20页珍藏版）》请在得力文库 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 dna扩增技术总结_锅炉技术总结范文 技术季度总结 公布时间： 2023.08.12 dna扩增技术总结。 当我们的学习或者工作完毕一段进程的时候，常常会需要写总结。总结写多了，我们就会发觉其中蕴含的规律。每次写总结，都是我们思索的绝好时机：人是可以无限制造价值的存在，我们做的每一件事都值得被仔细对待。那么我们怎么样才能写好一篇总结报告呢？为满意您的需求，小编特地编辑了“dna扩增技术总结”，欢送阅读，盼望您能阅读并保藏。 本页是工作总结之家最新公布的dna扩增技术总结的具体范文参考文章，感觉写的不错，盼望对您有帮忙，为了便利大家的阅读。 篇一：pCR试验技术总结 pCR试验技术总结点击次数

2、：422 ：佚名 发表于：2023-06-15 20:53 转载请注明来自丁香园 来源：互联网 pCR技术简史 一、pCR的最早设想 核酸讨论已有100多年的历史，本世纪60年月末、70年月初人们致力于讨论的体外分别技术，Korana于1971年最早提出核酸体外扩增的设想：“经过DNA变性，与适宜的引物杂交，用DNA聚合酶延长引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因”。 二、pCR的实现 1985年美国pE-Cetus公司人类遗传讨论室的Mullis 等创造了具有划时代意义的聚合酶链。其原理类似于DNA的体内复制，只是在试管中给DNA的体外合成供应以致一种适宜的条件-摸板DNA，寡核苷酸引物

3、，DNA聚合酶，适宜的缓冲体系，DNA变性、复性及延长的温度与时间。 三、pCR的改良与完善 Mullis最初使用的DNA聚合酶是大肠杆菌DNA 聚合酶 I 的Klenog2+1.5mmol/L 加双或三蒸水至100ul 二、pCR反响五要素 参与pCR反响的物质主要有五种即引物、酶、dNTp、模板和Mg2+ （一）引物 引物是pCR特异性反响的关键，pCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 设计引物应遵循以下原则： 1、引物长度： 15-30bp，常用为20bp

4、左右。 2、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。 3、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易消失非特异条带。ATGC最好随机分布，避开5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。 4、避开引物内部消失二级构造，避开两条引物间互补，特殊是3”端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。 5、引物3”端的碱基，特殊是最末及倒数其次个碱基，应严格要求配对，以避开因末端碱基不配对而导致pCR失败。 6、引物中有或能加上适宜的酶切位点，被扩增的靶序列最好有相宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处。 7、引物的特异性

5、：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。引物量： 每条引物的浓度0.11umol或10100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的时机。 （二）酶及其浓度 目前有两种Taq DNA聚合酶供给，一种是从栖热水生杆菌中提纯的自然酶，另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的pCR反响约需酶量2。5U(指总反响体积为100ul时)，浓度过高可引起非特异性扩增，浓度过低则合成产物量削减。 （三）dNTp的质量与浓度 dNTp的质量与浓度和pCR扩增效率有亲密关系，dNTp粉呈颗粒状，如保存不当易变性失去生物学活性。dNT

6、p溶液呈酸性，使用时应配成高浓度后，以1M NaOH或1M Tris。HCL的缓冲液将其pH调整到7.07.5，小量分装，-20冰冻保存。屡次冻融会使dNTp降解。在pCR反响中，dNTp应为50200umol/L，尤其是留意4种dNTp的浓度要相等( 等摩尔配制)，如其中任何一种浓度不同于其它几种时(偏高或偏低)，就会引起错配。浓度过低又会降低pCR产物的产量。dNTp能与Mg2+结合，使游离的Mg2+浓度降低。 （四）模板(靶基因)核酸 模板核酸的量与纯化程度，是pCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采纳SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂

7、类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀；蛋白酶K能水解消化蛋白质，特殊是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于pCR反响。一般临床检测标本，可采纳快速简便的方法溶解细胞，裂解病原 体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于pCR扩增。RNA模板提取一般采纳异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。 （五）Mg2+浓度 Mg2+对pCR扩增的特异性和产量有显著的影响，在一般的pCR反响中，各种dNTp浓度为200umol/L时，Mg2+浓度为1.

8、52.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反响特异性降低，消失非特异扩增，浓度过低会降低Taq DNA聚合酶的活性，使反响产物削减。 三、pCR反响条件的选择 pCR反响条件为温度、时间和循环次数。 （一）温度与时间的设置 基于pCR原理三步骤而设置变性-退火-延长三个温度点。在标准反响中采纳三温度点法，双链DNA在9095变性，再快速冷却至4060，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至7075，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延长。对于较短靶基因(长度为100300bp时)可采纳二温度点法，除变性温度外、退火与延长温度可合二为一，一般采纳94变性，65左右退火与延长（此

9、温度Taq DNA酶仍有较高的催化活性）。 1、变性温度与时间 变性温度低，解链不完全是导致pCR失败的最主要缘由。一般状况下，9394lmin足以使模板DNA变性，若低于93则需延长时间，但温度不能过高，由于高温环境对酶的活性有影响。此步若不能使靶基因模板或pCR产物完全变性，就会导致pCR失败。 2、退火(复性)温度与时间 退火温度是影响pCR特异性的较重要因素。变性后温度快速冷却至4060，可使引物和模板发生结合。由于模板DNA 比引物简单得多，引物和模板之间的碰撞结合时机远远高于模板互补链之间的 篇二：分子生物学技术总结 分子生物学技术总结 姓名：梁潇班级：2班学号：108080006

10、6 一、核酸/蛋白分别技术 1DNA分别：破裂细胞抽提蛋白质DNA沉淀乙醇洗除盐琼脂糖凝胶电泳检测 用细胞裂解液裂解细胞膜，收集细胞核，参加SDS裂开核膜，用蛋白酶K使核蛋白降解成小片段并从DNA是上解离下来，经苯酚、氯仿抽提去除蛋白质，无水乙醇沉淀DNA，75%乙醇洗涤DNA沉淀，真空枯燥后，溶解于TE缓冲液中即得到相对分子量高的DNA。 2RNA分别：抑制RNase抽提去蛋白质DNase消化DNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳 3蛋白分别： （1）层析法 离子交换层析 亲和层析 （2）电泳分别：聚丙烯酰胺凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳是网状构造，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶，在

11、电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的外形及其所附带的电荷量而渐渐呈梯度分开。而SDS-pAGE仅依据蛋白质亚基分子量的不同就可以分开蛋白质。此鉴定方法中，蛋白质的迁移率主要取决于它的相对分子质量，而与所带电荷和分子外形无关。 应用：分别蛋白质和寡糖核苷酸 二、基因克隆技术 1pCR：在模板DNA、引物和4种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依靠于DNA聚合酶的酶促和反响，pCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。反响分为三步：1）变性（9295） 2）退火 3）延长 pCR各步骤的目的 （1）预变性：破坏DNA中可能存在的较难破坏的二级构造。使DNA充分

12、变性，削减DNA 简单构造对扩增的影响，以利于引物更好的和模板结合，特殊是对于基因组来源的DNA模板，最好不要吝啬这个步骤。此外，在一些使用热启动Taq酶的反响中，还可激活Taq酶，从而使pCR反响得以顺当进展。 （2）变性-退火-延长循环：模板DNA的变性：模板DNA经加热至93左右肯定时间后，使模板DNA双链或经pCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反响做预备；模板DNA与引物的退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；引物的延长：DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTp为反响

13、原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保存复制原理，合成一条新的与模板DNA 链互补的半保存复制链。 （3）pCR仪扩增循环后72度延长10分钟：用pCR仪扩增时,(变性.退火,延长)循环完成后,连续72度延长了10分钟的缘由：延长时间取决于待扩增DNA片段的长度。（固然是在反响体系肯定的条件下）依据延长速率推得，扩增1kb以内的DNA片段1min即可，而3-4kb则需要3-4min，依次照推。通常在最终一轮要适当的将延长时间延长至4-10min，这样做是使pCR反响完全以提高扩增产量 连续72度延长了10分钟除了可以使pCR反响完全以提高扩增产量外，还有一个作用是：在用一般Taq酶进展pCR扩增

14、时在产物末端加A尾的作用，可以直接用于TA克隆的进展。 基因组pCR pCR RT-pCR（含有内含子的基因） RACE/Gene RNA）及其含量。 2（半）定量RTpCR：半定量RT-pCR一般是在没有条件做实时pCR 的状况下使用，用于测定体内目的基因的表达增加削减与否，即通过目的基因跑出来的电泳带与管家基因（如-actin）的电泳带的相对含量比拟，观测目的基因表达增减，另外还要做一个-actin的内参照对比。 （四）生物功能分析 1过表达分析： 2基因抑制或敲除分析：某一突变基因的表型效应由于其次个突变基因的消失而恢复正常时，称后一突变基由于前者的抑制基因。回复突变使突变基因的脱氧核糖

15、核酸（DNA）分子构造恢复正常；抑制基因则并不转变突变基因的DNA分子构造，而只是使突变型的表型恢复正常。抑制基因一般用符号Su代表。当抑制作用发生在同一基因中时，这种抑制作用称为基因内抑制，属于不同基因的抑制作用则称基因间抑制。 （五）蛋白定位 GFp融合表达亚细胞定位：亚细胞定位是指某种蛋白或表达产物在细胞内的详细存在部位。例如在核内、胞质内或者细胞膜上存在。GFp是绿色荧光蛋白，在扫描共聚拢显微镜的激光照耀下回发出绿色荧光，从而可以准确地定位蛋白质的位置。GFp，实际是给你要讨论的物质加上标记，在此相当于报告蛋白的作用。使用GFp必需构建融合蛋白载体，并在转染之后有效表达。这样，若在荧光

16、显微镜下看到细胞内某一部位存在GFp信号，说明和GFp融合的蛋白也存在于该部位，这样就到达了确定某物质亚细胞定位的目的。应用DNA亚克隆技术，将目的基因与GFp基因构成融合基因，通过愈伤组织转化法、基因枪、显微注射、电激转化等方法转化适宜的细胞，利用目的基因的基因表达调控机制，如启动子和信号序列来掌握融合基因的表达，在荧光显微观看系统下监测融合蛋白在细胞内的存在状态。 篇三：随机扩增多态dna技术 创新助手报告 主题分析报告 创新助手平台供应 北京万方软件股份有限公司 2023-06-26 报告名目 报告核心要素.I 一、主题简介.1 二、主题相关科研产出总体分析.1 2.1 文献总体产出统计

17、.1 2.2 学术关注趋势分析.2 三、主题相关科技论文产出分析.2 3.1 中文期刊论文.2 3.1.1 近十年中文期刊论文分布列表.2 3.1.2 中文期刊论文增长趋势.3 3.1.3 发文较多期刊.4 3.1.4 发文较多的机构.4 3.1.5 发文较多的人物.7 3.1.6 核心期刊分布数量比照.7 3.1.7最近相关中文期刊论文.10 3.1.8被引较多的相关期刊论文.17 3.2 学位论文.25 3.2.1 近十年学位论文年月分布列表.25 3.2.2 学位论文增长趋势.26 3.2.3 硕博学位论文数量比照.27 3.2.4 发文较多的机构.27 3.2.5 发文较多的人物.27

18、 3.2.6 最近相关学位论文.28 3.3 中文会谈论文.29 3.3.1 近十年中文会谈论文年月分布列表.29 3.3.2 中文会谈论文增长趋势.29 3.3.3 中文会谈论文主办单位分布.30 3.3.4 发文较多的机构.30.Gz85.COm 3.3.5发文较多的人物.31 3.3.6最近相关中文会谈论文.32 3.4 外文期刊论文.32 3.4.1 近十年外文期刊论文年月分布列表.32 3.4.2 外文期刊论文增长趋势.33 3.4.3 最近相关外文期刊论文.33 3.5 外文会谈论文.44 I 以上就是dna扩增技术总结的范文全部内容，讲的是关于基因、模板、反响、序列、变性、结合、

19、片段、转录等方面的内容，盼望大家能有所收获。 G更多 精选总结阅读 高强钢筋应用技术技术总结 高强钢筋应用技术技术总结是一篇好的范文，感觉写的不错，盼望对您有帮忙，这里给大家转摘到工作总结之家。 篇一：高强的意义及目前施工应用及技术 应用高强钢筋的意义及目前施工应用及技术 年初为落实国务院关于节能减排的工作部署及国民经济和社会进展第十二个五年规划纲要的要求，住房和城乡建立部、工业和信息化部联合印发了关于加快应用高强钢筋的指导意见。指导意见主要包含以下内容：一是说明了应用高强钢筋的重要性、紧迫性。二是明确了十二五期间推广应用高强钢筋的指导思想、根本原则和主要目标。三是布置了八项重点工作。四是提出

20、了八项保障措施。 一、深刻熟悉推广应用高强钢筋的重要意义 近三十多年来，经济社会快速进展，进展中我们既有刚性需求，也需面对能源、资源、环境的约束。一方面，经济总量的扩大和人口增长突显出我国战略资源严峻缺乏，2023年，我国铁矿石对外依存度达60%。同时铁矿石价格的上涨，进一步压缩了企业的利润空间，制约我国钢铁企业的安康进展。另一方面，我国长期形成的高投入、高消耗、高污染、低产出、低效率的粗放进展模式尚未根本转变，经济进展与资源铺张、环境污染并存。我国单位GDp能耗是日本的4.5倍，是美国的2.9倍，钢铁、建材行业单位产品能耗比国际先进水平高10%20%；大气中二氧化硫等主要污染物排放量居高不下

21、，二氧化碳排放总量持续上升。长此以往，资源供应难以支持、环境难以承受、进展难以持续、民生难以改善。推广应用高强钢筋是住房和城乡建立部、工业和信息化部落实国务院十二五节能减排方案的重要工作，也是促进钢铁工业和建筑业转变进展方式的重要举 措。我们必需要从调整经济构造、转变进展方式、推动科学进展的高度，熟悉此项工作的重要意义。 （一）推广应用高强钢筋促进钢铁工业转型升级 我国是钢铁生产和消费大国，2023年钢材产量8.8亿吨，居世界第一。据统计，我国每吨钢平均消耗1.6吨铁矿石，0.6吨标准煤， 4.4吨新水，排放约2吨二氧化碳、2吨污水、1.5公斤粉尘。过多的资源消耗和污染物排放使钢铁工业转型升级

22、势在必行。 我国建立工程以钢筋混凝土构造为主，钢筋消耗量很大。2023年全国城镇房屋建筑钢筋和线材用量1.3亿吨，占钢铁总产量的16%。推广应用高强钢筋是实践减量化用钢的重要途径。提高钢筋的档次、质量和稳定性，支撑建筑业转型升级，同时缓解钢铁生产的资源、能源、和环境制约，对我国钢铁工业从重产量到重品质的历史性转型具有重要意义。 （二）推广应用高强钢筋推动建筑业技术进步 推广应用高强钢筋是建筑业将钢铁行业技术进步成果转化为现实生产力的详细表达。高强钢筋是指抗拉屈服强度到达400兆帕级及以上的螺纹钢筋，具有强度高、综合性能优的特点，据测算，以HRB400钢筋替代HRB335钢筋平均可节省钢材12%

23、14%；HRB500钢筋取代HRB400钢筋可再节省钢材5%7%。在高层或大跨度建筑中应用高强钢筋，效果更加明显，可节约钢筋用量30%，2023年全国高强钢筋用量比例约35%，根据当前我国工程建立规模，假如高强钢筋用量比例到达65%，每年大约可再节省钢材1000万吨。高强钢 筋作为节材节能环保产品，在建筑工程中推广应用，既能有效削减钢材使用量，到达节能减排的目的，又能削减物流运输、建筑钢筋加工和钢筋连接工作量。对促进钢铁和建筑两大行业科技进步，产业构造优化升级，淘汰落后生产力，实施可持续进展具有重要意义。 二、推广应用高强钢筋的主要目标： 加速淘汰HRB335级螺纹钢筋，优先使用HRB400级

24、螺纹钢筋，积极推广HRB500级螺纹钢筋。 详细的路线图为，2023年底，在建筑工程中以HRB400以上级高强螺纹钢筋淘汰HRB335级螺纹钢筋。2023年底，高强钢筋的产量占螺纹钢筋总产量的80%，在建筑工程中高强钢筋使用量到达建筑用钢筋总量的比例从目前的35%提高到65%以上。对大型高层建筑和大跨度公共建筑，优先采纳HRB500级螺纹钢筋，逐年提高HRB500级钢筋的生产和应用比例。开展HRB600级钢筋的应用技术研发。对于地震多发地区，重点应用高强屈比、匀称伸长率高的高强抗震钢筋。 三、推广应用高强钢筋会产生巨大的经济及环境效益 根据2023年建筑用钢筋使用量计算，假如高强钢筋使用量比例

25、到达建筑用钢筋总量的65%时，在2023年节材的根底上，每年大约再削减钢材消耗1000万吨左右，增加钢铁工业经济效益近150亿元，每年削减铁矿石消耗1600万吨左右，削减能源消耗600万吨标准煤左右，削减二氧化碳排放2023万吨左右。占国家年均节能目标的2%。据有关专家测算，建筑工程中应用高强钢筋代替HRB335级钢筋每平方米能削减建筑本钱25元35元。同时，在建筑设计中应用高强钢 筋可削减混凝土构造尺寸，提高建筑使用面积，施工中可削减钢筋加工与连接工作量，便利混凝土浇铸，有利与保证混凝土施工质量。这项工作意义深远，既有经济效益又有良好的社会和环境效益。 四、目前我国高强钢筋应用状况及相关技术

26、 1995年，原建立部和原冶金工业部开头推广应用新型钢筋。经过十多年的努力，取得了肯定成效，但由于经济进展及工程技术应用普及程度不均衡等缘由，我国高强钢筋应用的整体比例仍旧偏低，地区差异较大，东部地区应用好与西部地区，大城市应用好与中小城市。按现行标准标准，在混凝土构造中，高强钢筋使用量理论上可以到达钢筋总量的70%左右。我国HRB400级以上钢筋应用仅占钢筋总量的35%，HRB500级钢筋仅占钢筋总量的5%左右。而兴旺国家钢筋多以HRB400、HRB500级为主，甚至HRB600级，其用量一般占到钢筋总量的70%80%。这说明我国有推广应用高强钢筋巨大潜力。 目前我国大城市及东部地区的建筑工

27、程中已较广泛应用HRB400级钢筋，典型工程如长江三峡水利枢纽工程、北京奥运工程、上海世博工程、苏通长江大路大桥工程等。HRB500级钢筋应用于河南郑州华林都市家园、河北建立效劳中心、京津城际铁路、京沪高铁、港珠澳大桥、昆明新机场航站楼等多项工程。河北钢铁集团承钢有限公司生产的HRB500级钢筋应用在京津城际铁路、京沪高铁、港珠澳大桥等国家重点工程。中国建筑科学讨论所建筑机械化讨论分院的钢筋剥肋滚压直螺纹连接技术应用在昆明新机场航站楼等工程。北京市建筑工程讨论有限责任公司的GK钢筋等强锥螺纹成套技术设备出 口香港应用于东南亚地区。 我们有理由信任，通过新标准、新标准的实施，届时，我国高强钢筋肯定能为建筑业转升级及进展作奉献。 篇二：推动高强钢筋的应用探析 龙源期刊网.cn 推动高强钢筋的应用探析 ：程泷 来源：建材进展导向2023年第01期 摘 要：建筑行业是我国重要的支柱产业之一，自改革开放以来取得了举世瞩目的成就，但当下的建筑工程构造仍多为钢筋混凝土，这无疑消耗了大量的钢筋。而高强钢筋可以节约钢筋用量，利于节省资源，值得推广应用，但实施过程障碍重重。对此，本文结合高强钢筋应用现状，就其推动策略进展了探析，盼望对构建节省型社会有所助益。