双向琼脂扩散试验.ppt

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1、双向琼脂扩散试验双向琼脂扩散试验一、实验目的一、实验目的掌握双向琼扩试验的原理和用途掌握双向琼扩试验操作方法观察抗原、抗体在琼脂板中形成的沉淀线一、原理一、原理血清学反应：血清学反应：凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应补体参与的反应补体参与的反应中和反应中和反应凝集反应凝集反应颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面颗粒性抗原，或吸附在颗粒性载体表面的可溶性性抗原，与相应抗体结合，在的可溶性性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在，经过一定时间，形有适当电解质存在，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块成肉眼可见的凝集团块参与凝集反应的抗原称凝集原，抗体称参与凝集反应的抗原称凝集原，抗体称为凝集素为凝

2、集素沉淀反应沉淀反应沉淀反应：将可溶性抗原与相应抗体混合，在沉淀反应：将可溶性抗原与相应抗体混合，在电解质存在条件下，经过一定时间，即可形成电解质存在条件下，经过一定时间，即可形成肉眼可见的沉淀物肉眼可见的沉淀物沉淀物只有在沉淀物只有在抗原抗体比例合适抗原抗体比例合适时才出现时才出现补体参与的反应补体参与的反应补体结合试验是根据补体能与任何抗原补体结合试验是根据补体能与任何抗原抗体复合物结合，但不能单独同抗原或抗体复合物结合，但不能单独同抗原或抗体结合的特性，用特定的补体来检测抗体结合的特性，用特定的补体来检测抗原抗体间有无特异性结合抗原抗体间有无特异性结合中和反应中和反应针对病毒的一些蛋白质

3、抗原或抗原表位的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感染性。病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或动物上进行，一般将抗体作稀释，与一定量的病毒混合，然后检测其在细胞培养、鸡胚或动物上的残余感染性。终点是以抑制细胞病变（细胞培养）或终点是以抑制细胞病变（细胞培养）或病毒复制（鸡胚或动物）的抗体最高稀病毒复制（鸡胚或动物）的抗体最高稀释度来表示。释度来表示。中和试验具有很强的特异性，是检测病中和试验具有很强的特异性，是检测病毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方法，也可用于检测病毒感染动物血清中法，也可用于检测病毒感染动物血清中的抗体。的抗体。单向琼脂扩散试验：指可溶性抗原在相

4、应抗体的琼脂介质中的扩散，可定性、定量抗原 双向琼脂扩散试验，是将抗原和相应抗体分别加入同一凝胶板内的相邻小孔中。两者相互扩散，当扩散到他们的浓度比例合适的部位相遇时，就会形成抗原抗体复合物的沉淀二、实验材料法氏囊病毒琼扩抗原法氏囊琼扩阳性血清1%琼脂玻片、打孔器、加样器、tip头等三、步骤称取称取1g琼脂粉，加至琼脂粉，加至100ml 8%高渗盐水中，配制高渗盐水中，配制1%琼脂凝胶；琼脂凝胶；稍冷至稍冷至55 却后浇板却后浇板(4ml/块块)，注意载玻片应放水平，琼脂勿倒出板外注意载玻片应放水平，琼脂勿倒出板外；待凝固后在琼脂上打梅花孔待凝固后在琼脂上打梅花孔(孔径孔径2mm,孔距孔距3m

5、m)，孔内的琼脂如未吸出，孔内的琼脂如未吸出则用注射器针头挑出则用注射器针头挑出封底：将玻片于酒精灯上烘烤背面（温度不宜过高，以不烫手为宜），使封底：将玻片于酒精灯上烘烤背面（温度不宜过高，以不烫手为宜），使琼脂与玻片紧贴；琼脂与玻片紧贴；将抗体按二倍比稀释法稀释成将抗体按二倍比稀释法稀释成1:2，1:4，1:8，1:16，1:32中间孔加抗原，周围孔加倍比稀释抗体，其中一个中间孔加抗原，周围孔加倍比稀释抗体，其中一个 孔加滴入生理盐水作为孔加滴入生理盐水作为对照对照（小心加样，不要溢出）（小心加样，不要溢出）置置37 湿盒湿盒24-48h结果观察：在抗原抗体比例合适处，出现白色沉淀，以出现明显的沉淀线结果观察：在抗原抗体比例合适处，出现白色沉淀，以出现明显的沉淀线的最高稀释度为该抗体的效价的最高稀释度为该抗体的效价四、作业实验报告（画图并解释实验结果）琼扩试验应注意哪些事项？琼扩试验有何意义？