第18章全自动DNA测序仪和蛋白质自动测序仪习题.doc

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1、十八章全自动 DNA 测序仪和蛋白质自动测序首页习题习题参考答案习 题名词解释选择题简答题一、名词解释1. 荧光标记引物法2. 荧光标记终止底物法3. 多色荧光标记引物法4. 多色荧光标记终止底物法5Edman 降解法6. Sanger 双脱氧链末端终止法7. 平板电泳型DNA 测序仪8. 毛细管电泳型DNA 测序仪9. 缩微生物处理器二、选择题【A 型题】 在五个选项中选出一个最符合题意的答案最正确答案。1. DNA 的一级构造是指 ； ADNA 空间构象B核苷酸序列 C碱基序列 D氨基酸序列EDNA 双螺旋构造2. 以下有关测序反响体系反响原理的表达中，错误的选项是 A参加的核苷酸单体为2

2、 -脱氧核苷三磷酸B低温退火时，引物与模板形成双链区10C沿着 35- 的方向形成链DDNA 聚合酶结合到DNA 双链区上启动DNA 的合成E形成的生链与模板完全互补配对3. 双脱氧链末端终止法测序反响与一般体外合成DNA 反响的主要区分是 ADNA 聚合酶不同BdNTP 的种类不同CdNTP 的浓度不同D引物不同E双脱氧链末端终止法测序反响体系中还需参加ddNTP4. 以下荧光标记方法中，可以将A、C、G、T 四个测序反响在同一管中完成而不影响测序结果的是 A. 单色荧光标记引物法 B单色荧光标记终止底物法C多色荧光标记引物法 D多色荧光标记终止底物法E多色荧光标记法5. 以下哪一荧光标记法

3、，必需将 A、T、C、G 四个测序反响分管进展，但可以合并在一个泳道内电泳 A. 单色荧光标记引物法 B单色荧光标记终止底物法C多色荧光标记引物法 D多色荧光标记终止底物法E多色荧光标记法6. 毛细管电泳型测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的缘由是由于 A. 电极弯曲 B电泳缓冲液蒸发使液面降低C毛细管未浸入缓冲液中 D毛细管内有气泡 E测序样本未注入毛细管中7. 毛细管电泳型测序仪电泳时产生电弧，主要缘由是 A. 电泳缓冲液漏出B. 电泳缓冲液配有误 C电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积D测序样本纯化不完全，含有盐性成份 E加热板温度过高8. 全自动DNA 测序仪的主要应用范围，不包括 A

4、人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断 B法医的亲子鉴定和个体识别 C生物工程药物的筛选D动植物杂交育种E蛋白质的鉴定9. 蛋白质测序仪的根本工作原理，主要是利用 A. Edman 降解法B双脱氧链末端终止法C化学降解法 D氧化复原法 E水解法10. 蛋白质测序仪主要检测 A核苷酸序列 B核糖核酸序列 C碱基序列 D氨基酸序列 E脱氧核糖核酸序列11. 以下有关双脱氧链末端终止法测序原理的表达中，不正确的选项是 A. 其根本原理是利用DNA 的体外合成过程B. 反响体系中需参加dNTP 和 ddNTPC. ddNTP 可以形成磷酸二酯键而掺入到DNA 链中D. dNTP 掺入后可导致合成链在不同的

5、位置终止E生成的反响产物是一系列长度不同的多核苷酸片段12. 以下有关多色荧光标记终止底物法的表达中，不正确的选项是 A. 需将 4 种 ddNTP 分别用 4 种不同的荧光染料标记B. 标记和终止过程在同一时间完成CA、T、C、G 四种反响可以在同一管中完成D可在一个泳道内完成电泳测序 E荧光染料标记过程和延长反响终止分别发生在同一DNA 片段的两端13. 以下有关荧光标记DNA 的检测原理的表达中，不正确的选项是 A. 用于测序的产物绝大多数应为单链BDNA 片段上的荧光基团可吸取激光束供给的能量而放射出特征波长的荧光C两极间的电势差推动DNA 片段从正极向负级泳动并到达相互分别D不同颜色

6、的荧光与不同的碱基信息相对应 E测序结果中，纵轴表示荧光波长种类和强度14. 以下有关Edman 降解法根本原理的表达中，错误的选项是 APTC多肽的生成是在弱碱性条件下 BPTC多肽的生成反响需用过量的试剂使有机反响完全 C在无水强碱的作用下，可使靠近PTC 基的氨基酸环化，形成ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽D剩余多肽链可以进展下一次以及后续的降解循环EATZ 衍生物经水溶酸处理转化为PTH 氨基酸15. 毛细管电泳型DNA 测序仪电泳时仪器显示无电流，最常见的缘由为 A. 缓冲液配制错误B毛细管内有气泡C电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端D电极弯曲而无法浸入缓

7、冲液中E加热板温度过高16. 在单纯以测定DNA 序列为目的的全自动DNA 测序仪中，广泛应用的原理是 A. Edman 降解法B双脱氧链末端终止法C化学降解法 D氧化复原法 E水解法17. 双脱氧链末端终止法测序的根本原理是利用 ART-PCR BPCRCWestern BlotDSouthern Blot E水解法18. 测序反响体系中参加的酶为 A. 限制性内切酶BRNA 聚合酶CDNA 聚合酶DDNA 水解酶E反转录酶19. 在一般的体外合成DNA 反响体系中，参加的核苷酸单体为 A. dAMP，dCMP，dGMP，dTMP BdADP，dCDP，dGDP，dTDP CdATP，dCT

8、P，dGTP，dTTP DddATP，ddCTP，ddGTP，ddTTP EddADP，ddCDP，ddGDP，ddTDP20. 双脱氧链末端终止法测序反响中除PCR 反响体系成份外，还参加了 ADNA 聚合酶BdNTP CdNDP DddNTP EddNDP21. 在 DNA 自动测序中广泛应用的示踪物是 A. 色素染料 B同位素 C电化学发光物质D酶E荧光素22. 以下有关多色荧光标记引物法标记引物的特性的表达中，正确的选项是 5A. 四种标记引物的序列一样，但 端标记的荧光染料颜色不同B. 四种标记引物的序列一样，但3 端标记的荧光染料颜色不同5C. 四种标记引物的序列不同，其 端标记的

9、荧光染料颜色也不同D. 四种标记引物的序列不同，其3 端标记的荧光染料颜色也不同E四种标记引物的序列不同，其2 端标记的荧光染料颜色也不同23. 以下有关多色荧光标记引物法的表达中，不正确的选项是 A端5需将荧光染料预先标记在测序反响所用引物的B四种引物的序列一样，但标记的荧光染料颜色不同CA、T、C、G 四个测序反响必需分管进展D上样时需分别在不同泳道内电泳E特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系24. 一般来说，DNA 测序图中，其横坐标和纵坐标的意义是 A横坐标代表荧光波长种类，纵坐标代表时间 B横坐标代表荧光波长种类和强度，纵坐标代表时间 C横坐标代表时间，纵坐标

10、代表荧光波长种类 D横坐标代表时间，纵坐标代表荧光波长种类和强度 E横坐标代表荧光波长种类，纵坐标代表荧光波长强度25. 以下有关DNA 自动测序仪自动进样器区功能的表达中，不正确的选项是 A毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成 B电极和毛细管一般均固定不动C两级间极高的电势差可促进DNA 分子在毛细管中很快泳动D电极为电泳的正性电极E样品盘有 48 孔和 96 孔两种，可一次性连续测试48 或 96 个样本26. 以下有关DNA 自动测序仪凝胶块区功能的表达中，不正确的选项是 A. 电泳时缓冲液阀关闭B电极为电泳的正性电极C在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌

11、入胶 D注射器驱动杆可给注射器供给正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中E玻璃注射器可储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时供给必要的压力27. 平板电泳型DNA 测序仪的测序长度一般为 A. 0bp900bp B400bp600bp C200bp400bp D900bp1000bp E300bp500bp28. 毛细管电泳型DNA 测序仪的测序长度一般为 A. 0bp900bp B400bp600bp C200bp400bp D900bp1000bp E300bp500bp【X 型题】每题的备选答案中有两个或者两个以上正确答案。1. 目前DNA 测序仪的工作原理，主要是利用 A. Edman

12、降解法B双脱氧链末端终止法C化学降解法 D氧化复原法 E水解法2. 以下有关多色荧光标记引物法的表达中，正确的选项是 A需将荧光染料预先标记在测序反响所用引物的3 端B四种引物的序列一样，但标记的荧光染料颜色不同CA、T、C、G 四个测序反响必需分管进展D上样时需分别在不同泳道内电泳E特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系3. 以下哪些荧光标记法必需将A、T、C、G 四个测序反响分管进展 A. 单色荧光标记引物法B. 单色荧光标记终止底物法C多色荧光标记引物法 D多色荧光标记终止底物法E多色荧光标记法4. 以下有关单色荧光标记法原理的表达中，正确的选项是 A需将A、G、C

13、、T 四管反响分管进展 B上样时需在不同泳道电泳C可用于标记ddNTP，也可用于标记引物 D有可能因泳道间迁移率不同而影响测序精度E仅适用于标记ddNTP，而不能标记引物5. 平板电泳型DNA 测序仪电泳时仪器显示无电流，可能缘由有 A. 电极导线未接好或损坏 B电泳缓冲液配制不正确 C正极或负极铂金丝断裂 D正极或负极的胶面未浸入缓冲液中E倒胶时有气泡形成6. 承受荧光标记终止底物法的测序反响体系中，包含 ADNA 模板B引物CdNTP DddNTP E水解酶7. 毛细管电泳型DNA 测序仪电泳时仪器显示无电流，可能缘由有 A电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端 B毛细管内有气

14、泡C毛细管未浸入缓冲液中 D电极弯曲而无法浸入缓冲液中E加热板温度过高8. 导致毛细管电泳型DNA 测序仪电极弯曲的缘由有 A. 测序时未进展电极定标操作就直接执行电泳命令B. 自动进样器上有灰尘沉积C运行前未将样品盘归位D进展电极定标操作时X/Y 轴归位尚未完毕就运行Z 轴归位E凝胶枯燥而堵塞毛细管9. 平板电泳型DNA 测序仪电泳时仪器显示无电流，可能缘由有 A. 电泳缓冲液配制不正确 B电极导线未接好或损坏 C正极或负极铂金丝断裂 D正极或负极的胶面未浸入缓冲液中E电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端10. Sanger 双脱氧链末端终止法和Maxam-Gilbert 化学

15、降解法的共同点包括 A反响体系中均有ddNTP B都是依据在某一固定的点开头核苷酸链的延长，随机在某一个特定的碱基处终止C均产生A、T、C、G 四组不同长度的一系列核苷酸链D均在变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳进展片段的分别和检测E均可检测DNA 的一级构造11. 在 Sanger 双脱氧链末端终止法测序反响体系中，ddNTP 与dNTP 相比的异同点有 5AddNTP 在脱氧核糖的 位置上缺少一个羟基 BddNTP 在脱氧核糖的3 位置上缺少一个羟基CDNA 链在掺入dNTP 的位置终止链的延长D均可与正在延长的DNA 链的末端脱氧核糖3 -OH 发生反响EddNTP 不能同后续的dNTP 形成磷酸

16、二酯键12. 以下有关Sanger 双脱氧链末端终止法测序反响体系反响原理的表达中，正确的选项是 C沿着 A. 参加的核苷酸单体包括dNTP 和ddNTP B低温退火时，引物与模板形成双链区35- 的方向形成链DDNA 聚合酶结合到DNA 双链区上启动DNA 的合成E形成的生链与模板完全互补配对13. 以下有关DNA 自动测序仪自动进样器区功能的表达中，正确的选项是 A毛细管进入样品盘标本孔中进样依靠自动进样器的移动完成 B电极和毛细管一般均固定不动CDNA 分子在毛细管中泳动的动力来自于两级间极高的压力差D电极为电泳的正性电极E样品盘有 48 孔和 96 孔两种，可一次性连续测试48 或 9

17、6 个样本14. 以下有关DNA 自动测序仪凝胶块区功能的表达中，正确的选项是 A. 电泳时缓冲液阀翻开B电极为电泳的负性电极C在分析每一个样品前，泵自动冲掉上一次分析用过的胶，灌入胶 D注射器驱动杆可给注射器供给正压力，将注射器内的凝胶注入毛细管中 E玻璃注射器可储存凝胶高分子聚合物以及在填充毛细管时供给必要的压力15. 以下有关缩微生物处理器构造和功能特点的表达中，正确的选项是 A根本构造为 2 层玻璃薄片和 2 层聚二甲基硅氧烷薄片B其外形为圆盘状，直径仅 10 厘米C可完成纳升级标本的Sanger DNA 测序D微瓣膜的功能包括在热循环反响时封闭反响小室，为反响供给封闭的空间E毛细管电

18、泳通道由上下来回迂回的U 型管道构成，总长度为 30cm三、问答题1. 简述双脱氧链末端终止法测序原理。2. 简述多色荧光标记引物法的原理。3. 简述多色荧光标记终止底物法的原理。4. 荧光标记引物法和荧光标记终止底物法有哪些不同之处？5. 多色荧光标记DNA 的检测原理是什么？6. 多色荧光标记DNA 的检测有哪些优点？7. 与同位素标记相比，荧光标记在DNA 测序中有哪些优点？8. 简要介绍介绍全自动测序仪的根本构造。9. 简要说明DNA 自动测序仪检测区根本构造及功能。10. 毛细管电泳型DNA 测序仪电泳时仪器显示无电流，常见的缘由是什么？11. 导致毛细管电泳型DNA 测序仪电极弯曲

19、的常见缘由是什么？12. 毛细管电泳型DNA 测序仪电泳时产生电弧，常见的缘由是什么？13. 简述平板电泳型DNA 测序仪的常见故障及维护。14. 简述全自动DNA 测序仪主要应用于哪些方面？15. 简述蛋白质测序仪的构造及其各部件的功能。16. 简述蛋白质测序仪的主要应用。17. 简述缩微生物处理器的检测原理及其特点。18. 简述蛋白质测序仪的工作原理。习 题 参 考 答 案一、名词解释51. 荧光标记引物法：将荧光染料预先标记在测序反响所用引物的端，称为荧光标记引物法。2. 荧光标记终止底物法：将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上，称为荧光标记终止底物法。3. 多色荧光标记引物法

20、：是DNA测序反响常用的一种荧光标记方法。将荧光染料预先标记在测序反5应所用引物的 端，当一样碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被4种荧光染料标记后，便形成了一组4 种标记引物。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关系。4. 多色荧光标记终止底物法：是DNA 测序反响常用的一种荧光标记方法。将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反响中将4 种ddNTP 分别用 4 种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP 在掺入 DNA 片段导致链延长终止的同时，也使该片段3 端标上了一种特定的荧光染料。依据荧光颜色的不同来推断所代表的不同碱基信息。5. Edman 降解法：

21、是检测蛋白质一级构造的方法。在弱碱条件下，多肽链 N 末端 NH2与 PITC 反响 ，生成 PTC多肽。在无水强酸如三氟醋酸的作用下，可使 PTC多肽形成 ATZ 衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余多肽。剩余多肽链可以进展下一次以及后续的降解循环。如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一降解，形成ATZ 衍生物。ATZ 衍生物经水溶酸处理转化为稳定的PTH 氨基酸。6. Sanger 双脱氧链末端终止法：是检测DNA 序列的一种方法。其原理是利用PCR，但反响体系中除了 dNTP 外，还有 ddNTP。ddNTP 可掺入到正在延长的 DNA 链中，但不能同后续的 dNTP 形成磷酸二酯键，从而

22、使正在延长的 DNA 链在此终止。由于存在 ddNTP 与 dNTP 的竞争，生成的反响产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。7. 平板电泳型 DNA 测序仪：为 DNA 测序仪的一种类型。平板型电泳的凝胶灌制在两块玻璃板中间，聚合后厚度一般小于 0.4mm 或更少，因此又称为超薄片层凝胶电泳。它具有样品判读序列长600bp 900bp、一块凝胶板上可同时进展多个样品测序的优点。8. 毛细管电泳型 DNA 测序仪：为 DNA 测序仪的一种类型。将凝胶高分子聚合物灌制于毛细管中内径 50mm100mm，在高压及较低浓度胶的条件下实现DNA 片段的快速分别。 9缩微生物处理器：是一种型DNA 自动测

23、序装置。其根本构造为3 层玻璃薄片和一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间严密粘合形成圆盘状，直径仅 10 厘米。在这些薄片之间有各种反响小室、毛细管电泳通道和微瓣膜，可完成纳升级标本的Sanger DNA 测序。二、选择题【A 型题】1 B2 C3 E4 D5 C6 B7C8E9A10D11D12E13C14C15C16B17B18C19C20D21E22A23D24D25D26A27A 28E【X 型题】1BC2BCE3ABC4ABCD5ABCD6ABCD7ABCD8ACD9ABCD10BCDE11BDE12ABDE13ABE14ACDE15BCDE三、问答题1. 简述双脱氧链末端终止法测序原理。

24、答：双脱氧链末端终止法测序原理是利用 DNA 的体外合成过程。反响体系中的核苷酸单体除了 4种 dNTP 外，还有 ddNTP。反响过程中 ddNTP 虽然可以与正在延长的DNA 链的末端形成磷酸二酯键而掺入到 DNA 链中，但它们本身没有3 -OH，不能同后续的dNTP 形成磷酸二酯键，从而使正在延长的DNA 链在此终止。据此原理分别设计四个反响，每一反响中存在一样的 DNA 模板、引物、四种 dNTP 和一种ddNTP(如ddATP)，则合成的 DNA 链在可能掺入正常 dNTP 的位置都有可能掺入 ddNTP 而导致合成链在不同的位置终止。由于存在 ddNTP 与 dNTP 的竞争，生成

25、的反响产物是一系列长度不同的多核苷酸片段。通过 对长度不等的生链进展分别后，就可依据片段大小直接读出生DNA 链的序列。2. 简述多色荧光标记引物法的原理。答：荧光标记引物法是指将荧光染料预先标记在测序反响所用引物的 5端。当一样碱基排列的寡核苷酸链作为骨架分别被 4 种荧光染料标记后，便形成了一组4 种标记引物。这四种引物的序列相5同，但 端标记的荧光染料颜色不同。在测序反响中，模板、反响底物、DNA 聚合酶及标记引物等按A、T、C、G 编号被置于 4 支微量离心管中，A、T、C、G 四个测序反响分管进展，上样时合并在一个泳道内电泳。特定颜色荧光标记的引物则与特定的双脱氧核苷酸底物保持对应关

26、系。3. 简述多色荧光标记终止底物法的原理。答：荧光标记终止底物法是指将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。反响中将 4种 ddNTP 分别用 4 种不同的荧光染料标记，带有荧光基团的ddNTP 在掺入DNA 片段导致链延长终止的同时，也使该片段3 端标上了一种特定的荧光染料。经电泳后将各个荧光谱带分开，依据荧光颜色的不同来推断所代表的不同碱基信息。4. 荧光标记引物法和荧光标记终止底物法有哪些不同之处？5答：荧光标记引物法是将荧光染料预先标记在测序反响所用引物的端。荧光标记终止底物法是将荧光染料标记在作为终止底物的双脱氧单核苷酸上。两种掺入方式的区分在于，前者的荧光染料标记过程和延

27、长反响终止分别发生在同一DNA 片段的两端，且标记发生在引物与模板的退火过程中，而终止是发生在片段延长过程中，两者在时间上有肯定间隔。而后者使标记和终止过程合二为一，两者在同一时间完成。在具体操作中，前者要求 A、C、G、T 四个反响分别进展，而后者的四种反响可以在同一管中完成。5. 多色荧光标记DNA 的检测原理是什么？答：在承受多色荧光标记 DNA 的自动测序系统中，两极间极高的电势差推动各个荧光DNA 片段在凝胶高分子聚合物中从负极向正级泳动并到达相互分别，且依次通过检测窗口。激光器发出的光束激发荧光 DNA 片段，荧光发色基团放射出特征波长的荧光。这种代表不同碱基信息的不同颜色荧光经过

28、光栅分光后再投射到CCD 摄像机上同步成像。收集的荧光信号再传输给计算机加以处理。整个电泳过程完毕时在检测区某一点上采集的全部荧光信号就转化为一个以时间为横轴坐标，荧光波长种类和强度为纵轴的信号数据的集合。6. 多色荧光标记DNA 的检测有哪些优点？答：由于承受多色荧光标记技术，一个样本的四个测序反响产物可以同时在一个泳道内电泳，避 免单一标记时四个泳道测序因泳道间迁移率不同对准确度的影响，提高了测序精度。另外，一个样品所 有反响产物只需进样一次，所以一次试验便可以处理较之手工方法更多的样品。在一样样品数的状况下， 加样的工作量也大大削减。7. 与同位素标记相比，荧光标记在DNA 测序中有哪些

29、优点？答：电泳后对不同长度 DNA 生链进展分析时，需要有可以检测的示踪信号。早期承受同位素法标记生链，因其具有放射性危害、背景高等缺点而很快被荧光染料标记法所取代。荧光染料的荧光和散射背景较弱，提高了信噪比；它们的激发光谱较接近而放射光谱均位于可见光范围，且不同染料的放射光谱相互分开，易于监测，故在DNA 自动测序中得到广泛应用。8. 简要介绍介绍全自动测序仪的根本构造。答：全自动DNA 测序仪主要由主机、微型计算机和各种应用软件等组成。主机主要包括电泳系统、激光器和荧光检测系统等。大致可分为以下几个构造功能区：(1)自动进样器区：装载有样品盘、电极负极、电极缓冲液瓶、洗涤液蒸馏水瓶和废液管

30、。(2)凝胶块区：括注射器驱动杆、样品盘按钮、注射器固定平台、电极正极、缓冲液阀、玻璃注射器、毛细管固定螺母和废液阀等部件。(3)检测区 检测区内有激光检测器窗口及窗盖、加热板、毛细管、热敏胶带。9. 简要说明DNA 自动测序仪检测区根本构造及功能。答：DNA 自动测序仪检测区根本构造包括：激光检测器窗口及窗盖：激光检测器窗口正对毛细管检测窗口，从仪器内部的氩离子激光器发 出的激光可通过激光检测器窗口照到毛细管检测窗口上。电泳过程中，当荧光标记DNA 链上的荧光基团通过毛细管窗口时，受到激光的激发而产生特征性的荧光光谱，荧光经分光光栅分光后投射到CCD 摄像机上同步成像。窗盖起固定毛细管的作用

31、，同时可防止激光外泄；加热板：电泳过程中起加热毛细管的作用，一般维持在50；毛细管：为填充有凝胶高分子聚合物的玻璃管，直径为 50 m，电泳时样品在毛细管内从负极向正极泳动；热敏胶带：将毛细管固定在加热板上。10. 毛细管电泳型DNA 测序仪电泳时仪器显示无电流，常见的缘由是什么？答：最常见的缘由是由于电泳缓冲液蒸发使液面降低，而未能接触到毛细管的两端或一端。其 它可能缘由包括电极弯曲而无法浸入缓冲液中、毛细管未浸入缓冲液中、毛细管内有气泡等。因此，遇到此类问题时，应首先检查电极缓冲液，然后再检查电极和毛细管。11. 导致毛细管电泳型DNA 测序仪电极弯曲的常见缘由是什么？答：主要缘由是安装、

32、调整或清洗电极后未进展电极定标操作就直接执行电泳命令，电极不能准 确插入各管中而被样品盘打弯。其它如运行前未将样品盘归位、或虽然执行了归位操作，但X/Y 轴归位尚未完毕就运行Z 轴归位等状况下，也简洁将电极打弯。12. 毛细管电泳型DNA 测序仪电泳时产生电弧，常见的缘由是什么？答：主要缘由是电极、加热板或自动进样器上有灰尘沉积，此时应马上停机，并清洗电极、加热板或自动进样器。13. 简述平板电泳型DNA 测序仪的常见故障及维护。答：(1)电泳时仪器显示无电流 可能缘由包括：电泳缓冲液配制不正确；电极导线未接好或损坏；正极或负极铂金丝断裂；正极或负极的胶面未浸入缓冲液中。(2) 传热板粘住胶板

33、 主要缘由为上方的缓冲液室漏液。此时应将上方的缓冲液倒掉，并卸下缓冲液室，松开胶板固定夹，将传热板顺着胶板向上滑动，直至与胶板分开。清洗传热板，同时检查缓冲液 室漏液的缘由，并实行相应措施，防止漏液。(3) 其它 倒胶前应依据操作要求认真清洗玻璃板，用未清洗干净的胶板倒胶时易产生气泡、或者产生较高的荧光背景；配制凝胶时应留意胶的浓度、TEMED 含量、尿素浓度等，并留意防止其它物质尤其是荧光物质的污染；倒胶时需留意不能有气泡，用固定夹固定胶板时，四周的力度应均匀全都；将待测样品参加各孔前，应使用缓冲液冲洗各孔，把尿素冲去，以免影响电泳效果。14. 全自动DNA 测序仪主要应用于哪些方面？全自动

34、 DNA 测序仪主要应用在人类基因组测序；人类遗传病、传染病和癌症的基因诊断；法医的亲子鉴定和个体识别；生物工程药物的筛选；动植物杂交育种等方面。15. 简述蛋白质测序仪的构造及其功能。答：蛋白质测序仪包括测序反响系统、分析系统和数椐处理系统。(1) 测序反响系统具有 4 个微管。其主要部件为反响器。由于反响条件要求肯定的温度、时间、液体流量等，所以系统计算机具备调整把握这些因素。蛋白质或多肽在这里被水解为单个氨基酸残基。(2) 氨基酸分析系统是由高效液相色谱毛细管层析柱组成。层析要求相当严格，液体安排速度、温度、电流电压都能影响层析结果。所以仪器配有稳压、稳流、自动安排流速装置。氨基酸通过这

35、一系统 会留下自己的特征吸取峰。(3) 测序软件是依据氨基酸的层析峰来推断为何种氨基酸。计算机系统供给测序需要的运行参数。时间，温度，电压和其他的循环状况，并可实现跳动步骤，暂停步骤。此外还有蛋白质或多肽的纯化处理配件及整个测序必备的试剂和溶液。16. 简述蛋白质测序仪的主要应用。答：蛋白质测序仪获得的蛋白质序列信息主要应用在以下三个方面。(1) 蛋白质的鉴定：在凝胶电泳中消灭的未知条带可以利用蛋白质测序仪来测定其序列，为探究蛋白质的功能供给线索。(2) 分子克隆探针的设计:是蛋白质序列信息的根本用途之一。用蛋白质序列信息设计 PCR 引物和寡核苷酸探针。可以利用这些探针进展cDNA 文库或基

36、因组文库的筛选。(3) 抗原的人工多肽合成：由合成多肽免疫产生的抗体常用来证明和纯化觉察的蛋白质。此外，合成的多肽类似物能够提醒蛋白质重要构造特征和提示蛋白质的功能特性。17. 简述缩微生物处理器的检测原理及其特点。答：缩微生物处理器根本构造为 3 层玻璃薄片和一层聚二甲基硅氧烷薄片，各层间严密粘合形成圆盘状，直径仅 10 厘米。在这些薄片之间有各种反响小室、毛细管电泳通道和微瓣膜。检测时仅需将极微量的 DNA 模板、反响试剂和引物参加相应孔中，系统自动完成热循环反响、扩增产物的纯化、DNA 片段的分别及检测。缩微生物处理器可代替价格昂贵的DNA 测序仪进展DNA 的自动测序，并具有热循环反响

37、、DNA 片段的纯化和浓缩等功能，而且仅需极微量的标本和试剂，最大限度地节约了本钱和人力，其消灭是DNA 测序史上的又一重大进步。18. 试表达蛋白质测序仪的工作原理。答：蛋白质测序仪的原理为Edman降解法。在弱碱条件下，多肽链N末端NH2与异硫氰酸苯酯PITC 反响，生成PTC多肽。这一反响在4548进展约15min并用过量的试剂使有机反响完全。在无水强 酸如三氟醋酸的作用下，可使PTC多肽形成噻唑啉酮苯胺ATZ衍生物和一个失去末端氨基酸的剩余 多肽。剩余多肽链可以进展下一次以及后续的降解循环。如此不断循环，可依次使多肽链的氨基酸逐一 降解，形成ATZ衍生物。ATZ衍生物经水溶酸处理转化为稳定的乙内酰苯硫脲氨基酸PTH氨基酸。上述 降解循环的偶联和环化发生在测序仪的反响器筒中，转化则在转化器进展。转化后的PTH氨基酸经 自动进样器注入高效液相色谱进展在线检测。依据PTH氨基酸的洗涤滞流时间确定每一种氨基酸。