实验八大分子物质的水解和糖发酵试验幻灯片.ppt

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1、实验八大分子物质的水解和糖发酵试验第1页，共13页，编辑于2022年，星期五一、目的与要求 证证证证明明明明不不不不同同同同微微微微生生生生物物物物对对对对各各各各种种种种有有有有机机机机大大大大分分分分子子子子的的的的水水水水解解解解能能能能力力力力不不不不同同同同，从从从从而说明不同微生物有着不同的酶系。而说明不同微生物有着不同的酶系。而说明不同微生物有着不同的酶系。而说明不同微生物有着不同的酶系。掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。掌握微生物大分子水解试验的原理和方法。了解糖发酵的原理及在肠道细菌鉴定中的重要作用。了解糖发酵的原理及在肠道细菌鉴定中的重要作用。了解糖发酵的原理及在肠道细

2、菌鉴定中的重要作用。了解糖发酵的原理及在肠道细菌鉴定中的重要作用。掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。学习微生物接菌技术。学习微生物接菌技术。学习微生物接菌技术。学习微生物接菌技术。第2页，共13页，编辑于2022年，星期五二、基本原理基本原理1 1、淀粉水解试验、淀粉水解试验 微微微微生生生生物物物物不不不不能能能能直直直直接接接接利利利利用用用用淀淀淀淀粉粉粉粉，必必必必须须须须靠靠靠靠自自自自身身身身产产产产生生生生的的的的胞胞胞胞外外外外淀淀淀淀粉粉粉粉酶酶酶酶将将将将大大大大分

3、分分分子子子子淀淀淀淀粉粉粉粉分分分分解解解解成成成成糊糊糊糊精精精精、双双双双糖糖糖糖和和和和单单单单糖糖糖糖才才才才能能能能进进进进入入入入细细细细胞胞胞胞内内内内，细细细细菌菌菌菌是是是是否否否否能能能能产产产产生生生生淀淀淀淀粉粉粉粉酶酶酶酶可可可可通通通通过过过过观观观观察察察察细细细细菌菌菌菌菌菌菌菌落落落落周周周周围围围围的的的的淀淀淀淀粉粉粉粉物物物物质质质质是是是是否否否否被被被被水水水水解解解解来来来来证证证证实实实实，淀淀淀淀粉粉粉粉遇遇遇遇碘碘碘碘液液液液会产生蓝色，被细菌水解淀粉的区域，用碘则呈褐色。会产生蓝色，被细菌水解淀粉的区域，用碘则呈褐色。会产生蓝色，被细菌水

4、解淀粉的区域，用碘则呈褐色。会产生蓝色，被细菌水解淀粉的区域，用碘则呈褐色。第3页，共13页，编辑于2022年，星期五二、基本原理基本原理2 2、明胶水解试验、明胶水解试验 微微生生物物不不能能直直接接利利用用明明胶胶这这蛋蛋白白质质，必必须须靠靠自自身身产产生生的的胞胞外外明明胶胶酶酶将将大大分分子子蛋蛋白白质质水水解解成成蛋蛋白白胨胨或或氨氨基基酸酸才才能能进进入入细细胞胞内内，细细菌菌能能否否产产生生明明胶胶酶酶可可通通过过明明胶胶穿穿刺刺培培养养来来证证实实，在在微微生生物物的的明明胶胶酶酶作作用用下，明胶失去凝固性，呈液化状态。下，明胶失去凝固性，呈液化状态。第4页，共13页，编辑于

5、2022年，星期五二、基本原理基本原理3 3、糖发酵试验、糖发酵试验 糖糖糖糖发发发发酵酵酵酵试试试试验验验验是是是是常常常常用用用用的的的的鉴鉴鉴鉴别别别别微微微微生生生生物物物物的的的的生生生生化化化化反反反反应应应应，在在在在肠肠肠肠道道道道细细细细菌菌菌菌的的的的鉴鉴鉴鉴定定定定中中中中尤尤尤尤为为为为重重重重要要要要。大大大大肠肠肠肠菌菌菌菌群群群群能能能能在在在在37370 0C C培培培培养养养养下下下下，利利利利用用用用乳乳乳乳糖糖糖糖产产产产酸酸酸酸、产产产产气气气气。当当当当产产产产酸酸酸酸时时时时，溴溴溴溴甲甲甲甲酚酚酚酚紫紫紫紫指指指指示示示示剂剂剂剂可可可可由由由由紫

6、紫紫紫色色色色（pH6.8pH6.8）变变变变为为为为黄黄黄黄色色色色（pH5.2pH5.2）。当当当当产产产产气气气气时时时时，可可可可通通通通过倒置小倒管内的气泡来判断。过倒置小倒管内的气泡来判断。过倒置小倒管内的气泡来判断。过倒置小倒管内的气泡来判断。第5页，共13页，编辑于2022年，星期五图 糖类发酵试验 第6页，共13页，编辑于2022年，星期五三、实验器材1 1、菌种：、菌种：、菌种：、菌种：枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌、普通变形普通变形普通变形普通变形杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球杆菌、大肠杆菌、金黄色葡

7、萄球菌菌菌菌2 2 2 2、培养基：、培养基：、培养基：、培养基：淀粉培养基淀粉培养基淀粉培养基淀粉培养基 2 2 2 2块培养血块培养血块培养血块培养血/每组每组每组每组(6(6(6(6人）人）人）人）明胶半固体培养基明胶半固体培养基明胶半固体培养基明胶半固体培养基 5 5 5 5支试管支试管支试管支试管/每组每组每组每组(6(6(6(6人）人）人）人）乳糖发酵培养液乳糖发酵培养液乳糖发酵培养液乳糖发酵培养液 3 3 3 3支试管支试管支试管支试管/每组每组每组每组(6(6(6(6人）人）人）人）葡萄糖发酵培养液葡萄糖发酵培养液葡萄糖发酵培养液葡萄糖发酵培养液 3 3 3 3支试管支试管支试

8、管支试管/每组每组每组每组(6(6(6(6人）人）人）人）2 2、试剂：、试剂：、试剂：、试剂：碘液碘液碘液碘液3 3、仪器或其他用具：、仪器或其他用具：、仪器或其他用具：、仪器或其他用具：培养箱、水浴锅、接种环、接种针、酒精灯、培养箱、水浴锅、接种环、接种针、酒精灯、培养箱、水浴锅、接种环、接种针、酒精灯、培养箱、水浴锅、接种环、接种针、酒精灯、无菌培养血等。无菌培养血等。无菌培养血等。无菌培养血等。第7页，共13页，编辑于2022年，星期五四、操作步骤1 1、淀粉水解试验、淀粉水解试验溶溶溶溶化化化化三三三三角角角角瓶瓶瓶瓶内内内内的的的的淀淀淀淀粉粉粉粉培培培培养养养养基基基基 趁趁趁趁

9、热热热热倒倒倒倒入入入入二二二二块块块块无无无无菌菌菌菌培培培培养养养养皿皿皿皿各各各各内内内内约约约约15ml 15ml 冷冷冷冷凝凝凝凝后后后后点点点点植植植植法法法法接接接接入入入入大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、枯枯枯枯草草草草芽芽芽芽孢孢孢孢杆杆杆杆菌菌菌菌、金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌 贴贴贴贴好好好好标标标标签签签签 平平平平板板板板倒倒倒倒置置置置，37370 0C C培培培培养养养养2424小小小小时时时时 滴滴滴滴加加加加碘碘碘碘液液液液鉴鉴鉴鉴别别别别有有有有无无无无淀粉水解圈淀粉水解圈淀粉水解圈淀粉水解圈2 2、明胶水解试验、明胶水解试验取

10、取取取五五五五支支支支明明明明胶胶胶胶试试试试管管管管培培培培养养养养基基基基 用用用用接接接接种种种种针针针针分分分分别别别别穿穿穿穿刺刺刺刺接接接接入入入入大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、枯枯枯枯草草草草芽芽芽芽孢孢孢孢杆杆杆杆菌菌菌菌、金金金金黄黄黄黄色色色色葡葡葡葡萄萄萄萄球球球球菌菌菌菌、普普普普通通通通变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌，另另另另一一一一支支支支不不不不接接接接菌菌菌菌为为为为空空空空白白白白对对对对照照照照管管管管贴好标签贴好标签贴好标签贴好标签 202020200 0 0 0C C C C培养培养培养培养3 3 3 3-5d5d5d5d 观察明胶液化情况观察明胶

11、液化情况观察明胶液化情况观察明胶液化情况第8页，共13页，编辑于2022年，星期五四、操作步骤3 3、乳糖发酵试验、乳糖发酵试验取取取取三三三三支支支支乳乳乳乳糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养基基基基 分分分分别别别别接接接接入入入入大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、普普普普通通通通变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌，另另另另一一一一支支支支不不不不接接接接菌菌菌菌为为为为空空空空白白白白对对对对照照照照管管管管 贴贴贴贴好好好好标标标标签签签签 373737370 0 0 0C C C C培培培培养养养养24242424小小小小时时时时 观观观观察察察察产产产产酸酸酸酸、产产产

12、产气气气气情况情况情况情况4 4、葡萄糖发酵试验、葡萄糖发酵试验取取取取三三三三支支支支葡葡葡葡萄萄萄萄糖糖糖糖蛋蛋蛋蛋白白白白胨胨胨胨培培培培养养养养基基基基 分分分分别别别别接接接接入入入入大大大大肠肠肠肠杆杆杆杆菌菌菌菌、普普普普通通通通变变变变形形形形杆杆杆杆菌菌菌菌，另另另另一一一一支支支支不不不不接接接接菌菌菌菌为为为为空空空空白白白白对对对对照照照照管管管管 贴贴贴贴好好好好标标标标签签签签 373737370 0 0 0C C C C培培培培养养养养24242424小小小小时时时时 观观观观察察察察产产产产酸、产气情况酸、产气情况酸、产气情况酸、产气情况操作要点：操作要点：操作

13、要点：操作要点：注意无菌操作，勿染杂菌。注意无菌操作，勿染杂菌。注意无菌操作，勿染杂菌。注意无菌操作，勿染杂菌。接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。接好菌的平板一定要倒置放入培养箱中。第9页，共13页，编辑于2022年，星期五无菌操作技术无菌操作技术第10页，共13页，编辑于2022年，星期五五、实验数据及处理结果五、实验数据及处理结果1 1 1 1、大分子物质水解试验、大分子物质水解试验、大分子物质水解试验、大分子物质水解试验 将结果填入下表。将结果填入下表。将结果填入下表。将结果填入下表。“+”表示阳性，表示阳性，表示

14、阳性，表示阳性，“-”表示阴性表示阴性表示阴性表示阴性菌菌菌菌 名名名名淀粉水解试验淀粉水解试验淀粉水解试验淀粉水解试验明胶水解试验明胶水解试验明胶水解试验明胶水解试验枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌对照对照对照对照第11页，共13页，编辑于2022年，星期五2 2、糖发酵试验、糖发酵试验 将结果填入下表。将结果填入下表。将结果填入下表。将结果填入下表。“”表示产酸产气，表示产酸产气，表示产酸产气，表示产酸产气，“+”表示产酸，表示产酸，表示产酸，表示产酸，“-”表示阴性表示

15、阴性表示阴性表示阴性糖类发酵糖类发酵糖类发酵糖类发酵大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌大肠杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌普通变形杆菌 对照对照对照对照葡萄糖发酵葡萄糖发酵葡萄糖发酵葡萄糖发酵乳糖发酵乳糖发酵乳糖发酵乳糖发酵第12页，共13页，编辑于2022年，星期五六、思考与讨论思考与讨论1 1、你怎么解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？、你怎么解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？、你怎么解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？、你怎么解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？2 2、接接接接种种种种后后后后的的的的明明明明胶胶胶胶试试试试管管管管也也也也可可可可以以以以在在在在35350C C培培培培养养养养，在在在在培培培培养养养养后后后后你你你你必必必必须做什么才能证明水解的存在？须做什么才能证明水解的存在？须做什么才能证明水解的存在？须做什么才能证明水解的存在？第13页，共13页，编辑于2022年，星期五