流式的原理及应用.pptx

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1、什么是流式细胞术什么是流式细胞术第1页/共54页什么是流式细胞术什么是流式细胞术流式细胞术（Flow Cytometry）是指利用流式细胞仪，通过检测细胞上/内特异标记的荧光信号，从而测定细胞的多种生化特性（表面受体、抗原、离子、DNA/RNA等的表达）的方法。第2页/共54页流式细胞术的特点流式细胞术的特点第3页/共54页流式细胞术的特点流式细胞术的特点分析对象：任何直径50 m的颗粒，一般为单细胞悬液第4页/共54页流式细胞术的特点流式细胞术的特点分析对象：任何直径50 m的颗粒，一般为单细胞悬液分析速度：快速，Calibur 2,000事件/秒第5页/共54页流式细胞术的特点流式细胞术的

2、特点分析对象：任何直径50 m的颗粒，一般为单细胞悬液分析速度：快速，Calibur 2,000事件/秒检测参数：多个（两个散射光，多个荧光参数）第6页/共54页流式细胞术的特点流式细胞术的特点分析对象：任何直径50 m的颗粒，一般为单细胞悬液分析速度：快速，Calibur 2,000事件/秒检测参数：多个（两个散射光，多个荧光参数）检测结果：精度高，准确性好，具有统计学意义第7页/共54页BDBD公司的分析型流式细胞仪公司的分析型流式细胞仪第8页/共54页BDBD公司的分选型流式细胞仪公司的分选型流式细胞仪第9页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第10页/共54页流式细胞仪的结构流式

3、细胞仪的结构液流系统收集细胞并使之与激光正交第11页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构液流系统收集细胞并使之与激光正交光学系统激发和收集光信号第12页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构液流系统收集细胞并使之与激光正交光学系统激发和收集光信号电子系统把光信号按比例转化成电子信号第13页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构液流系统液流系统废液桶废液桶鞘液桶鞘液桶上样针上样针流动室流动室激光正交激光正交第14页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构液流液流样本样本样本样本鞘液鞘液鞘液鞘液鞘液鞘液鞘液鞘液红激光红激光蓝激光蓝激光紫激光紫激光低流速低流速高流速高流速第15页/共

4、54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构流速：低速12 l/min中速35 l/min高速60 l/min第16页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构光学系统光学系统第17页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构长通长通接收器接收器带通带通长通长通+带通带通第18页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第19页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构LaserWavelengthMin.PowerCommonly Used Fluorochromes(nm)(mW)or Dyes Blue488 nm 13FITC,PerCP,PerCP-Cy5.5 Red 633 nm 11A

5、PC,APC-Cy7,APC-H7 Violet405 nm 30Pacific Blue,DAPI,BD Horizon V450 and V500Near UV375 nm 7Hoechst Red,Hoechst Blue,PI,DAPI Yellow-Green561 nm30PE,PE-Cy5.5,PE-Cy5,PE-Texas Red,mCherry,PE-Cy7,PIBlue-Violet445 nm20CFP,AmCyan fluorescent protein第20页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第21页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构电子系统电子系统光

6、子光子接收器接收器光信号光信号转化为转化为电信号电信号电信号电信号处理处理电脑电脑第22页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构电子系统电子系统第23页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构 高（H）=最大荧光强度 宽（W）=时间 面积（A）=总荧光强度第24页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第25页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第26页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第27页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第28页/共54页流式细胞仪的结构流式细胞仪的结构第29页/共54页流式细胞仪操作的基本流程流式细胞仪操作的基本流程第30页/共54页流式

7、细胞仪操作的基本流程流式细胞仪操作的基本流程开机和液开机和液流启动流启动质控质控样本收集样本收集数据分析数据分析样本收集样本收集数据分析数据分析清洗和清洗和关机关机第31页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第32页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第33页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备单细胞悬液的制备目的分子的标记样本过滤等待上机第34页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第35页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第36页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第37页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第38页/共

8、54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第39页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第40页/共54页流式分析样本的制备流式分析样本的制备第41页/共54页流式常见的实验流式常见的实验第42页/共54页流式常见的实验流式常见的实验荧光免疫直接染色 vs 间接染色强荧光配弱表达，强表达配弱荧光染料数量不大时可以避免使用临近通道通道间的溢漏（补偿）第43页/共54页流式常见的实验流式常见的实验荧光免疫强荧光配弱表达强表达配弱荧光第44页/共54页流式常见的实验流式常见的实验荧光免疫什么是溢光？为什么要补偿？第45页/共54页流式常见的实验流式常见的实验第46页/共54页流式常见的实验流

9、式常见的实验荧光免疫为什么要做同型对照和单阳管？第47页/共54页流式常见的实验流式常见的实验荧光免疫（实例）CD4 FITC,CD8 PE,CD3 APC 染色同型对照：PB 100L+Isotope FITC 20L+Isotope PE 20L+Isotope APC 5L 单阳管：PB 100L+CD4 FITC 20L+Isotope PE 20L+Isotope APC 5L 单阳管：PB 100L+Isotope FITC 20L+CD8 PE 20L+Isotope APC 5L 单阳管：PB 100L+Isotope FITC 20L+Isotope PE 20L+CD3 APC 5L 样品管：PB 100L+CD4 FITC 20L+CD8 PE 20L+CD3 APC 5L 第48页/共54页流式常见的实验流式常见的实验第49页/共54页流式常见的实验流式常见的实验细胞周期第50页/共54页流式常见的实验流式常见的实验细胞周期第51页/共54页流式常见的实验流式常见的实验细胞凋亡第52页/共54页流式常见的实验流式常见的实验细胞凋亡第53页/共54页感谢您的观看！第54页/共54页