释放方法学验证试验相关学习.pptx

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1、115 释放量测定方法：释放量的测定，即已释放入介质中药物的定量测定，其技术要求应符合测定药物含量的一般原则。常用的方法有UV法和HPLC法。方法学验证过程中除常规考虑外，尚应关注：主药在释放介质中的稳定性；最佳取样量，以保证测定简便，尽量减小误差；滤器的性质，考证有效成分在滤器上是否有吸附。化学药物口服缓释制剂药学研究技术指导原则（二OO七年九月）第1页/共23页溶出度测定方法的验证与含量测定相同，包括：准确度（回收率）、精密度、专属性（辅料、胶囊壳等的干扰试验）、线性和耐用性等中国药典附录XIX A药品质量标准分析方法验证指导原则第2页/共23页采用UV法测定前，一定要进行紫外扫描，以考察

2、辅料是否存在干扰。方法为：分别取对照品溶液和供试品溶液（浓度最好与对照品溶液一致或略低），进行紫外扫描。干扰试验（专属性试验）：干扰试验（专属性试验）：第3页/共23页着重观察供试品溶液图谱情况：是否存在基线被抬升的现象，以及与对照品溶液图谱重合的情况。如辅料无干扰，则供试品溶液图谱应与对照品溶液图谱基本重合或整体略低于对照品图谱；如辅料有干扰，就会出现基线或末端吸收处被抬高的现象。另一方法可采用HPLC法，将其测定结果与UV法进行比较，以判定辅料是否有干扰。第4页/共23页辅料干扰如不超过2%，可勉强接受。测定干扰2%以下可忽略不计，25%可考虑在限度上适当提高，超过5%以上测定方法不可取，

3、如是空胶囊产生的应进行囊壳的消除试验第5页/共23页当辅料干扰紫外法测定时，通常可采用以下方法：(1)双波长吸收度差值法：寻找到辅料吸收度值相等的两个波长，其中的一个波长应为主成分的最大吸收波长。以对照品溶液和供试品溶液分别在此两波长处的吸收度值差值进行计算。此法在日本应用较为普遍，在进口质量标准中也有部分品种使用，方法简便、易行，值得推广。但采用本法的前提是“辅料的吸收应呈平行 线”；如呈“斜坡形”则应折中考虑，当误差大于2%（可用回收率来衡量），仍建议采用HPLC法测定第6页/共23页(2)导数光谱法：通过对图谱进行一阶或二阶的求导处理，以去除辅料对主成分测定的干扰。由于此法受仪器的限制和

4、求导后导数值较小，给测定带来较大误差。同时，随着HPLC仪器的不断普及，目前已很少使用。(3)HPLC法：在HPLC色谱柱上可轻松将辅料与主成分分离，该法测定最为准确、可靠，只是工作量略显增加。第7页/共23页释放介质的制备：称取氯化钠9.0g，加水适量溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得。50mg规格空白辅料溶液的制备：取50mg规格处方量辅料（约相当于去甲文拉法辛28mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。100mg规格空白辅料溶液的制备：取100mg处方量辅料（约相当于去甲

5、文拉法辛56mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。50mg规格供试品溶液的制备：取50mg规格琥珀酸去甲文拉法辛缓释片样品（批号：131016）适量，精密称定，研细，取本品细粉适量（约相当于琥珀酸去甲文拉法辛28mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。100mg规格供试品溶液的制备：取100mg规格琥珀酸去甲文拉法辛缓释片样品（批号：131012）适量，精密称定，研细，

6、取本品细粉适量（约相当于琥珀酸去甲文拉法辛56mg），置50ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，滤过，精密量取续滤液2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。检测：精密量取上述溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。琥珀酸去甲文拉法辛-专属性试验第8页/共23页琥珀酸去甲文拉法辛-专属性试验结论：由图可知，释放介质及空白辅料在该色谱条件下对本品释放度检查无干扰，说明该方法专属性良好。第9页/共23页发生吸附的品种往往是主药均难溶于水微粉化，原料药粒径变小，比表面能变大，静电吸附能力增强，故与滤膜的吸附作用明显；一些小规格制剂，主药浓度低，达到饱和所需

7、的初滤液体积大大增加，干扰也较大滤膜被溶出介质溶解，产生浊度，吸收升高过滤中操作：产生气泡等一般认为吸附量在2%以下时可忽略不计，超过2%建议或在质量标准中明确注明滤膜规格或滤膜预处理方法（如煮沸1.5 h）、增加初滤液量（常规为5ml）或规定样品高速离心后取上清液测定。滤膜吸附试验：滤膜吸附试验：第10页/共23页中国药典溶出度测定法对微孔滤膜的规定为“滤孔应不大于0.8m，并使用惰性材料制成的滤器，以免吸附活性成分或干扰分析测定”。工作中常用滤膜有水系和有机系两种，滤膜孔径0.45m、0.80m。水系微孔滤膜通常为混合纤维素酯滤膜(WX)，不耐酸、碱、有机溶剂。使用前常需进行漂洗（水浸）处

8、理，防止滤膜使用时未压紧有气泡入内，同时水浸也为了使膜充分溶胀，现有针式混合纤维素酯过滤器，可直接使用。有机系微孔过滤膜有尼龙（N6、N66）滤膜、聚偏氟乙烯（PVDF）滤膜、聚四氟乙烯（PTFE）滤膜等，也有针式过滤器，上述滤膜具有显亲水性，使用前不需预先湿润，几乎能与全部溶出介质相容，无纤维脱落等优点，但由于价格昂贵使用单位较少。第11页/共23页判定吸附与否的方法可采用：(1)取溶出液过滤，舍去不同体积的初滤液后测定，观察响应值的变化，了解被测药物与滤膜的吸附情况。(2)取样后，一部分不过滤，直接采用高速离心，取上清液测定。另一部分采用过滤法，取所得的续滤液测定，考察两者间测定数据的差异

9、。(3)取对照品溶液，经滤膜过滤后，与原溶液进行比较，观察测定前后数据的变化第12页/共23页供试品溶液的制备：取琥珀酸去甲文拉法辛对照品适量（约相当于去甲文拉法辛对照品28mg），精密称定，置25ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置20ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，即得。检测：精密量取滤过前后供试品溶液20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图琥珀酸去甲文拉法辛-滤膜吸附试验结论：由以上结果可知，直径为25mm孔径为0.45m的不同材质的滤膜对不同浓度的琥珀酸去甲文拉法辛吸附量均小于2.0%，基本无吸附。第13页/共23页中国药典 附录XIX A至少5份供试

10、品以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否呈线性，再用最二小乘法进行线性回归数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图线性关系试验：第14页/共23页 50mg规格释放度检查线性关系试验对照品贮备液的制备：取琥珀酸去甲文拉法辛对照品约21.3mg（约相当于去甲文拉法辛对照品14mg），精密称定，置25ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。线性关系供试品溶液的制备：精密量取对照品贮备液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分别置10ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，摇匀，分别编号为1、2、3、4、5作为线性关系供试品溶液。测定：精密量取上述线性关系供试

11、品溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，并将溶液浓度和峰面积进行线性回归，琥珀酸去甲文拉法辛-线性关系试验结论：由以上试验结果可知，50mg规格去甲文拉法辛溶液在060.45mg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。第15页/共23页 100mg规格释放度检查线性关系试验对照品贮备液的制备：取琥珀酸去甲文拉法辛对照品约42.6mg（约相当于去甲文拉法辛对照品28mg），精密称定，置25ml量瓶中，加释放介质溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。线性关系供试品溶液的制备：精密量取对照品贮备液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml分别置10ml量瓶中，用释放介质稀释至刻度，

12、摇匀，分别编号为1、2、3、4、5作为线性关系供试品溶液。测定：精密量取上述线性关系供试品溶液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，并将溶液浓度和峰面积进行线性回归琥珀酸去甲文拉法辛-线性关系试验结论：由以上试验结果可知，100mg规格去甲文拉法辛溶液在0115.92mg/ml范围内浓度与峰面积呈良好的线性不同规格可以用一个线性关系实验：浓度范围内就可以（？）第16页/共23页中国药典 附录XIX A规定的测试条件下同一均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。1、重复性2、中间精密度3、重现性数据要求：报告标准偏差、相对 标准偏差和可信限精密度试验：第17页/共23页分别取两规格

13、取线性关系试验项下，编号为1、5的线性关系供试品溶液，精密量取20l，分别注入液相色谱仪，每个浓度的线性供试品溶液均连续进样6次，分别记录色谱图琥珀酸去甲文拉法辛-释放度检查精密度试验规格50mg100mg相对浓度20%100%20%100%浓度（g/ml）12.0960.4523.18115.92峰面积150198024720581029652489964225039232487923103108449098193502400249084010308734906643450191824869471030555492064955004202488077103118749104746501940

14、248524310307104911125平均峰面积202097248518110306774909725RSD(%)0.220.270.050.14结论：由上述试验结果知，两个规格20%、100%浓度对照品溶液分别连续进样6次，主峰峰面积的相对标准偏差均小于2.0%，表明本法精密度良好。第18页/共23页主成分在溶出介质中的稳定性也是一个不容忽视的问题。如溶液稳定性不佳，应在质量标准中明确注明“取样后立即测定”。溶液稳定性试验：第19页/共23页由于本品在质量研究过程中除需要研究在标准规定介质（0.9%氯化钠溶液）中的释放度外，还需要研究在其他介质（0.1mol/L盐酸溶液、pH4.5醋酸盐

15、缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液）中的释放行为，所以我们考察了琥珀酸去甲文拉法在上述各种介质中的溶液稳定性。溶液稳定性考察溶液制备：取本品细粉适量，精密称定，置100ml量瓶中，加各释放介质适量，超生使溶解，放冷，用释放介质稀释至刻度，摇匀，作为溶液稳定性考察溶液。取溶液稳定性考察溶液在室温下放置，分别于0、4、8、12、24、36小时时滤过，精密量取上述续滤液各20l，分别注入液相色谱仪，记录色谱图考察原料在各介质下的稳定性琥珀酸去甲文拉法辛-溶液稳定性试验第20页/共23页琥珀酸去甲文拉法辛-溶液稳定性试验结论：稳定性考察溶液在室温下放置36小时，去甲文拉法辛峰面积的RSD均小于2.0%，表明琥珀酸去甲文拉法辛在上述各种介质中稳定性良好。第21页/共23页谢 谢！第22页/共23页2023/3/27感谢您的观看！第23页/共23页