多肽、蛋白质药物.ppt

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1、一、多肽药物及其生产工艺一、多肽药物及其生产工艺多肽类药物多肽激素多肽激素：垂体多肽激素、促皮质激素、促黑素、脂肪水解素、催产素、加压素甲状腺激素甲状腺激素：甲状旁腺激素、降钙素胰岛激素胰岛激素：胰高血糖素、胰解痉多胃肠道激素胃肠道激素：胃泌素、肠血管活性素、抑胃肽胸腺激素：胸腺激素：胸腺素、胸腺肽、胸腺血清因子含有多肽成分的其他生化药物含有多肽成分的其他生化药物骨宁、眼生素、血活素、氨肽素、蜂毒、蛇毒、胚胎素、花粉提取物、心脏激素等、多肽类药物、多肽类药物胸腺素的制备胸腺素的制备用途：原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感用途：原发性和继发性免疫缺陷病，如反复上呼吸道感染染;自身免疫性疾

2、病，如肾病、红斑狼疮、类风湿关节自身免疫性疾病，如肾病、红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力炎、重症肌无力;变态反应性疾病，如支气管哮喘；细变态反应性疾病，如支气管哮喘；细胞免疫功能减退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；胞免疫功能减退的中老年人和老年人疾病，并可抗衰老；肿瘤的辅助治疗。肿瘤的辅助治疗。黄海葵强心肽黄海葵强心肽A（APA）的制）的制备备海洋生物中有许多含有多肽或蛋白质毒海洋生物中有许多含有多肽或蛋白质毒素往往具有特殊的药物功能。如海葵毒素往往具有特殊的药物功能。如海葵毒素等的强心功能，棘皮、软体等动物的素等的强心功能，棘皮、软体等动物的抗癌肽的抗癌功能等。抗癌肽的抗癌功能等。黄海

3、葵强心肽就是其中一种。人们已黄海葵强心肽就是其中一种。人们已从黄海葵中分离出具有强心作用的黄海从黄海葵中分离出具有强心作用的黄海葵强心肽葵强心肽A、B、C。APA由由49个氨基个氨基酸组成，酸组成，Mr为为5500，属碱性多肽。，属碱性多肽。、黄海葵毒素的制备二、蛋白药物及其生产工艺二、蛋白药物及其生产工艺蛋白质药物蛋白质药物蛋白质激素：垂体蛋白质激素（生长素、催乳激素、促甲状腺激素、蛋白质激素：垂体蛋白质激素（生长素、催乳激素、促甲状腺激素、促卵泡激素）、促性腺激素（人绒毛膜促性腺激素、血清性促性腺促卵泡激素）、促性腺激素（人绒毛膜促性腺激素、血清性促性腺激素）、胰岛素及其他蛋白质激素（胰岛

4、素、胰抗脂肝素、松弛素）激素）、胰岛素及其他蛋白质激素（胰岛素、胰抗脂肝素、松弛素）血浆蛋白质：白蛋白、纤维蛋白溶酶原、血浆纤维结合蛋白、多种血浆蛋白质：白蛋白、纤维蛋白溶酶原、血浆纤维结合蛋白、多种免疫球蛋白、纤维蛋白原、抗凝血酶免疫球蛋白、纤维蛋白原、抗凝血酶III、凝血因子凝血因子VIII和和IV。蛋白质类细胞生长调节因子：干扰素蛋白质类细胞生长调节因子：干扰素(IFN)、白细胞介素白细胞介素(IL)、神神经生长因子、肝细胞生长因子、血小板生长的生长因子、肿瘤坏死经生长因子、肝细胞生长因子、血小板生长的生长因子、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、组织纤溶酶原激活因子（因子、集落刺激因子、组织纤

5、溶酶原激活因子（tPA）、）、促红细胞促红细胞生成素生成素(EPO)等等胶原蛋白：明胶、阿胶胶原蛋白：明胶、阿胶蛋白酶抑制剂：蛋白酶抑制剂：蛋白质药物白介素蛋白质药物白介素2的动物细胞制备的动物细胞制备作用：白细胞介素作用：白细胞介素2（IL2）能诱导能诱导T细胞分泌细胞分泌 干扰素，增强杀伤细胞的活性，干扰素，增强杀伤细胞的活性，在调整免疫功能上具有重要作用。临床用在调整免疫功能上具有重要作用。临床用于治疗一些免疫性疾病，如艾滋病、原发于治疗一些免疫性疾病，如艾滋病、原发性免疫缺损、老年性免疫功能不全以及癌性免疫缺损、老年性免疫功能不全以及癌症的综合治疗。对创伤修复也有一定的作症的综合治疗。

6、对创伤修复也有一定的作用。用。工艺路线工艺过程工艺过程诱生用鸡瘟病毒刺激人外周血白细胞，37培养。病毒灭活和固液分离病毒灭活和固液分离 用 6mol/L HCI调节 pH2.02.5，再用 6molL NaOH调节pH7.27.4，离心除去变性杂蛋白。硫酸按分级沉淀硫酸按分级沉淀取上述离心后的培养上清液，加饱和硫酸按至35饱和度，24h离心弃去沉淀。上清液补加固体硫酸按至 85饱和度，4静置 24h离心，收集沉淀。除盐除盐将沉淀溶于pH6.5、10mmolL PBS中（内含 2正丁醇和 0.15NaCI）。透析 24h（更换 5次透析外液）。蓝色琼脂糖层析蓝色琼脂糖层析将上述透析内液通过 Se

7、pharose 4B层析柱，用 200mlPBS去不吸附的蛋白，再用含 0.4mol/L NaCI的 PBS洗涤亲和柱，最后用含 1.0molLPBS解吸IL2活性组分。凝胶层析将解吸的凝胶层析将解吸的 IL2活性组分经 PEG（MW6000）浓缩，再上 ACA44UItrogel层析柱。柱用含 0.1PEG、2正丁醇和 pH7.6的 0.2molL甘氨酸的Tris.HCI洗脱，得 IL2。转基因白细胞介素制备重组酵母基因表达重组酵母基因表达转化小鼠细胞筛选单克隆抗体表达转化小鼠细胞筛选单克隆抗体表达重组大肠杆菌表达重组大肠杆菌表达细胞分离细胞破碎细胞分离细胞破碎 包含体包含体 溶解溶解-分离

8、分离-脱盐脱盐-浓缩浓缩白细胞介素大肠杆菌表达的纯化方法白细胞介素大肠杆菌表达的纯化方法基因重组大肠杆菌于基因重组大肠杆菌于LB培养基培养基(含氨苄青霉素含氨苄青霉素)37oC震荡培养过夜震荡培养过夜 次日按次日按1:100比例稀释继续扩增至比例稀释继续扩增至OD600=0.4左右左右加诱导剂加诱导剂IPTG,(异丙基异丙基b-d-硫代半乳糖苷硫代半乳糖苷)至终浓度至终浓度2mmol/L,在在30oC下诱导下诱导6小时小时,收集表达收集表达IL-18菌体菌体.收集菌体加细胞裂解液收集菌体加细胞裂解液,用超声波破碎菌体用超声波破碎菌体.25000g离心离心30分钟沉淀于分钟沉淀于6-8mol/L的盐酸胍或脲溶的盐酸胍或脲溶解包含体解包含体,透析或直接稀释透析或直接稀释40-50倍以创造蛋白质再倍以创造蛋白质再折叠的条件折叠的条件.然后用一般蛋白质的分离方法即可然后用一般蛋白质的分离方法即可.