水产品中镇静剂类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法(T-ZACA 024—2020).pdf

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1、ICS 67.120.30 B 50 T/ZACA 团体标准 T/ZACA 0242020 水产品中镇静剂类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of sedative residues in aquatic products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020-01-13 发布 2020-01-19 实施 浙江省质量合格评定协会 发 布 T/ZACA 0242020 I 目 次 前言.II 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂和材料.1 5 仪器.2 6 分析步骤.

2、2 7 结果计算和表述.4 8 精密度.5 9 准确度.5 10 灵敏度.5 附录 A（资料性附录）13 种镇静剂类化合物标准品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量.6 附录 B（资料性附录）13 种化合物多反应监测（MRM）质谱图（20 g/L）.7 T/ZACA 0242020 II 前 言 本标准依据GB/T 1.12009规定的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由浙江省质量合格评定协会提出并归口。本标准主要起草单位：绿城农科检测技术有限公司。本标准参与起草单位：浙江省农业科学院农产品质量标准研究所、浙江省水

3、产质量检测中心、湖州市农畜水产品检测中心、丽水蓝城农科检测技术有限公司。本标准主要起草人：何晓明、余鹏飞、章舒祺、杨鲁琼、洪琳、郭利攀、贝亦江、徐杰、沈东强、朱萌萌、周婷婷、卢军、陈志民、黄梅英。本标准为首次发布。T/ZACA 0242020 1 水产品中镇静剂类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了水产品中13种镇静剂类药物残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于鱼、虾、蟹、贝4类水产品中13种镇静剂类药物残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本

4、（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 SC/T 3016 水产品抽样方法 3 原理 用乙腈提取试样中的镇静剂类药物，然后用QuEChERS吸附剂净化提取液，用液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。4 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 试剂 4.1.1 乙腈（C2H3N）：色谱纯。4.1.2 甲醇（CH4O）：色谱纯。4.1.3 甲酸铵（CH5NO2）：色谱纯。4.1.4 甲酸（CH2O2）：色谱纯。4.1.5 无水硫酸钠（Na2SO4）：500 灼烧 4 h，置于干燥器内备用。4.1.6

5、 N-丙基乙二胺吸附剂（PSA）：40 m60 m 粒径范围，100 平均孔径。4.1.7 十八烷基键合硅胶吸附剂（C18）：40 m60 m 粒径范围，60 平均孔径。4.1.8 微孔滤膜：0.22 m，尼龙膜。4.2 试剂配制 4.2.1 50%甲醇-水溶液：量取 50 mL 甲醇（4.1.2）于 100 mL 容量瓶中，用水定容至刻度，混匀。4.2.2 甲酸铵溶液（2 mmol/L）：称取甲酸铵（4.1.3）0.126 g（精确至 0.001 g），置于 1000 mL容量瓶中，加少量水溶解后，用水定容至刻度，摇匀备用。T/ZACA 0242020 2 4.2.3 0.1%甲酸-2 mm

6、ol/L 甲酸铵溶液：准确吸取甲酸（4.1.4）1 mL，置于 1000 mL 容量瓶中，加甲酸铵溶液（4.2.2）定容至刻度，摇匀，过滤。4.2.4 0.1%甲酸-甲醇溶液：准确吸取甲酸（4.1.4）1 mL，置于 1000 mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀备用。4.2.5 QuEChERS 离心管：准确称取 100 mg PSA（4.1.6）、40 mg C18（4.1.7）和 500 mg 无水硫酸钠（4.1.5），储存于 15 mL 具螺旋盖聚丙烯离心管中，旋紧盖塞，置于干燥器内备用。4.3 标准品 13种标准品的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见附录A表A.

7、1，纯度均95%。4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液：分别准确称取标准品（4.3）100.0 mg（精确至 0.0001 g），用甲醇溶解并定容至 100 mL，此溶液浓度均为 1 mg/mL。4 避光密封保存，有效期 6 个月。4.4.2 混合标准中间溶液：取 1 mL 13 种镇静剂类药物标准储备溶液（4.4.1）用甲醇定容至 100 mL，配制成 10 g/mL 的混合标准中间溶液，4 避光密封保存，有效期 1 个月。4.4.3 空白基质溶液：称取空白试样，按照 6.2 规定的样品预处理方法操作制备。4.4.4 基质混合标准溶液：用空白基质溶液（4.4.3）将混合标准中间溶液

8、（4.4.2）稀释成适合浓度的基质混合标准溶液，现配现用。5 仪器 5.1 液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量 0.1 mg 和 0.01 g。5.3 离心机：转速不低于 8000 r/min。5.4 涡旋振荡器。5.5 超声波清洗器。5.6 氮吹浓缩仪。5.7 均质机。6 分析步骤 6.1 试样制备 按 SC/T 3016 的规定执行。6.2 试样前处理 6.2.1 提取 取试样，常温自然解冻后，称取 5.0 g 试样（精确至 0.01g）于 50 mL 离心管中，准确加入 20 mL 乙腈（4.1.1），5 g 无水硫酸钠（4.1.5），涡旋混匀 1

9、min 后，超声提取 10 min，8000 r/min 离心 5 min，上清液转至另一 50 mL 离心管中；残渣中再准确加入 20 mL 乙腈重复提取一次，合并两次上清液。T/ZACA 0242020 3 6.2.2 净化 准确量取提取液 4 mL置于QuEChERS离心管（4.2.5）中，剧烈振荡1 min，8000 r/min离心5 min，移取全部上清液于10 mL试管中，于40 下氮吹至近干，加入1 mL 50%甲醇-水溶液（4.2.1）溶解残渣，过0.22 m微孔滤膜（4.1.8），供液相色谱-串联质谱联用仪分析。6.3 测定 6.3.1 液相色谱分离条件 液相色谱分离条件如下

10、：a)色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3，2.1100mm（i.d.），1.8 m，或性能相当者。b)流动相：A：0.1%甲酸-2 mmol/L 甲酸铵溶液（4.2.3），B：0.1%甲酸-甲醇溶液（4.2.4）。c)柱温：35。d)流速：0.35 mL/min。e)进样量：3 L。f)梯度洗脱程序见表格 1。表1 梯度洗脱程序 时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0.0 70 30 0.5 70 30 1.5 35 65 3.0 15 85 5.5 15 85 7.0 70 30 6.3.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾离子源（ESI）。b)扫描方式：

11、正离子扫描。c)离子源温度：400。d)干燥气：10.0 L/min。e)雾化气：3.0 L/min。f)毛细管电压：4000V。g)加热气流量：10.0 L/min h)检测方式：多反应监测（MRM）。i)定性离子对和定量离子对等详细仪器条件见表格 2。T/ZACA 0242020 4 表2 13 种镇静剂的质谱参数 名称 定量离子对（m/z）定性离子对（m/z）Q1/V 碰撞能量/eV Q3/V 地西泮 285.1/222.1 285.1/257.1-10,-20-27,-21-25,-19 氯丙嗪 319.1/86.1 319.1/58.1-11,-11-22,-37-16,-22 安眠

12、酮 251.0/132.0 251.0/91.1-11,-11-23,-20-26,-16 艾司唑仑 295.1/267.0 295.1/192.0-14,-14-25,-23-30,-20 硝西泮 282.1/236.0 282.1/254.0-10,-19-24,-19-26,-19 普鲁卡因 237.1/120.0 237.1/100.1-15,-14-27,-19-21,-21 氯硝西泮 316.0/240.9 316.0/213.8-15,-11-34,-38-26,-24 劳拉西泮 321.1/275.0 321.1/302.9-16,-16-22,-14-30,-22 奥沙西泮

13、287.0/241.0 287.0/162.9-10,-10-21,-37-27,-18 阿普唑仑 309.1/281.0 309.1/274.1-15,-15-26,-26-20,-20 三唑仑 343.1/308.0 343.1/314.9-12,-12-28,-25-23,-23 咪达唑仑 326.1/291.0 326.1/243.9-16,-16-27,-24-21,-27 氯氮卓 300.0/227.0 300.0/283.0-14,-10-25,-14-19,-15 6.3.3 液相色谱-质谱测定 根据试样中被测物的药物含量，选取响应值相近的基质混合标准溶液（4.4.4）同时进行

14、分析。基质混合标准溶液和待测液中各种药物的响应值均应在仪器响应范围内。如果含量超过标准曲线范围，应用空白基质溶液（4.4.3）稀释到合适浓度后分析。在上述仪器条件下，13 种化合物多反应监测（MRM）质谱图参见附录 B 图 B.1。6.4 空白试验 除不加试料外，均按上述操作步骤进行。7 结果计算和表述 7.1 定性标准 在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在2.5%之内；且试样中定性、定量离子的相对丰度比与浓度接近的标准溶液中对应的定性、定量离子的相对丰度比进行比较，若偏差不超过表 3 规定的范围，可判定为试样中含有对应的待测物。T/ZACA 024202

15、0 5 表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对丰度（%）50 20 至 50 10 至 20 10 允许偏差（%）20 25 30 50 7.2 定量测定 采用标准曲线法定量。由按式（1）或仪器数据处理软件计算获得：=（1）式中：试样中各待测物的含量，单位为微克每千克（g/kg）；试样中各待测物峰面积对应的浓度，单位为微克每升（g/L）；A 试样溶液中被测物的色谱峰面积；基质标准工作溶液中被测物的色谱峰面积；试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）；试样溶液所代表试样的质量，单位为克（g）。注：计算结果应扣除空白值，保留3位有效数字。8 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果

16、的绝对差值不得超过算术平均值的15%。9 准确度 本方法对水产品中13种镇静剂类药物加标浓度小于0.1 g/kg时，回收率在60120%之间；加标浓度在1001000 g/kg时，回收率在80110%之间.10 灵敏度 本方法对水产品中艾司唑仑、三唑仑检出限为0.050 g/kg，定量限为0.150 g/kg；地西泮、安眠酮、普鲁卡因、奥沙西泮检出限为0.100 g/kg，定量限为0.350 g/kg；氯丙嗪、硝西泮、氯硝西泮、劳拉西泮、阿普唑仑、咪达唑仑、氯氮卓的检出限均为0.150 g/kg，定量限均为0.500 g/kg。T/ZACA 0242020 6 A A 附 录 A（资料性附录）

17、13 种镇静剂类化合物标准品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 表A.1 13 种镇静剂类化合物标准品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 序号 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 1 地西泮 Diazepam 439-14-5 C16H13ClN2O 284.07 2 氯丙嗪 Chlorpromazine 50-53-3 C17H19ClN2S 318.86 3 安眠酮 Methaqualone 72-44-6 C16H14N2O 250.29 4 艾司唑仑 Estazolam 29975-16-4 C16H11ClN4 294.

18、06 5 硝西泮 Nitrazepam 146-22-5 C15H11N3O3 281.07 6 普鲁卡因 Procaine 59-46-1 C13H20N2O2 236.32 7 氯硝西泮 Clonazepam 1622-61-3 C15H10ClN3O3 315.04 8 劳拉西泮 Lorazepam 846-49-1 C15H10Cl2N2O2 320.01 9 奥沙西泮 Oxazepam 604-75-1 C15H11ClN2O2 286.05 10 阿普唑仑 Alprazolam 28981-97-7 C17H13ClN4 308.08 11 三唑仑 Triazolam 28911-

19、01-5 C17H12Cl2N4 342.04 12 咪达唑仑 Midazolam 59467-70-8 C18H13ClFN3 325.77 13 氯氮卓 Chlordiazepoxide 58-25-3 C16H14ClN3O 299.08 T/ZACA 0242020 7 B B 附 录 B（资料性附录）13 种化合物多反应监测（MRM）质谱图（20 g/L）阿普唑仑 氯氮卓 氯硝西泮 0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in0500001000001500002000002500003000003500001:阿 普

20、 唑 仑 309.10274.10(+)CE:-26.01:阿 普 唑 仑 309.10281.00(+)CE:-26.01:阿 普 唑 仑 309.10274.10(+)CE:-26.01:阿 普 唑 仑 309.10281.00(+)CE:-26.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in0500001000001500002000002500003000003500004000002:氯 氮 卓 300.05227.00(+)CE:-25.02:氯 氮 卓 300.05283.05(+)CE:-14.02:氯 氮 卓 300.05227.00

21、(+)CE:-25.02:氯 氮 卓 300.05283.05(+)CE:-14.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in0500010000150002000025000300003500040000450003:氯 硝 西 泮 316.00213.80(+)CE:-38.03:氯 硝 西 泮 316.00240.90(+)CE:-34.03:氯 硝 西 泮 316.00213.80(+)CE:-38.03:氯 硝 西 泮 316.00240.90(+)CE:-34.04.619 4.391 4.145 T/ZACA 0

22、242020 8 地西泮 艾司唑仑4.266 三唑仑4.333 劳拉西泮 0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in01000020000300004000050000600007000080000900001000001100001200004:地 西 泮 285.10222.10(+)CE:-27.04:地 西 泮 285.10257.10(+)CE:-21.04:地 西 泮 285.10222.10(+)CE:-27.04:地 西 泮 285.10257.10(+)CE:-21.00.51.01.52.02.53.03.

23、54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in0500001000001500002000002500003000003500004000005:艾 司 唑 仑 295.10192.00(+)CE:-23.05:艾 司 唑 仑 295.10267.00(+)CE:-25.05:艾 司 唑 仑 295.10192.00(+)CE:-23.05:艾 司 唑 仑 295.10267.00(+)CE:-25.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in025000050000075000010000001250

24、00011:三 唑 仑 343.10308.00(+)CE:-25.011:三 唑 仑 343.10314.90(+)CE:-28.011:三 唑 仑 343.10308.00(+)CE:-25.011:三 唑 仑 343.10314.90(+)CE:-28.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in02500050000750001000001250001500001750002000007:劳 拉 西 泮 321.10275.00(+)CE:-22.07:劳 拉 西 泮 321.10302.90(+)CE:-14.07:

25、劳 拉 西 泮 321.10275.00(+)CE:-22.07:劳 拉 西 泮 321.10302.90(+)CE:-14.04.799 4.340 4.266 4.333 T/ZACA 0242020 9 咪达唑仑 硝西泮4.195 奥沙西泮 安眠酮 0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in0500001000001500002000002500003000003500004000004500008:咪 达 唑 仑 326.10243.90(+)CE:-24.08:咪 达 唑 仑 326.10291.00(+)CE:-2

26、7.08:咪 达 唑 仑 326.10243.90(+)CE:-24.08:咪 达 唑 仑 326.10291.00(+)CE:-27.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in02500050000750001000001250001500001750002000002250009:硝 西 泮 282.10236.00(+)CE:-24.09:硝 西 泮 282.10254.00(+)CE:-19.09:硝 西 泮 282.10236.00(+)CE:-24.09:硝 西 泮 282.10254.00(+)CE:-19.0

27、0.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in025000500007500010000012500015000017500020000010:奥 沙 西 泮 287.00162.90(+)CE:-37.010:奥 沙 西 泮 287.00241.00(+)CE:-21.010:奥 沙 西 泮 287.00162.90(+)CE:-37.010:奥 沙 西 泮 287.00241.00(+)CE:-21.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in05000010

28、000015000020000025000030000035000040000013:安 眠 酮 251.0091.10(+)CE:-20.013:安 眠 酮 251.00132.00(+)CE:-23.013:安 眠 酮 251.0091.10(+)CE:-20.013:安 眠 酮 251.00132.00(+)CE:-23.04.724 4.344 4.379 4.195 T/ZACA 0242020 10 普鲁卡因 氯丙嗪 图B.1 13 种化合物多反应监测（MRM）质谱图（20 g/L）1.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.5m in0100000

29、20000030000040000050000060000070000080000015:普 鲁 卡 因 237.10100.10(+)CE:-19.015:普 鲁 卡 因 237.10120.00(+)CE:-27.015:普 鲁 卡 因 237.10100.10(+)CE:-19.015:普 鲁 卡 因 237.10120.00(+)CE:-27.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.5m in05000010000015000020000025000030000035000040000045000050000055000012:氯 丙 嗪 319.1058.10(+)CE:-37.012:氯 丙 嗪 319.1086.10(+)CE:-22.012:氯 丙 嗪 319.1058.10(+)CE:-37.012:氯 丙 嗪 319.1086.10(+)CE:-22.0_ 4.059 4.344