本标准规定了抗菌塑料的抗菌性能试验方法和对抗菌效果.doc

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1、中华人民共和国国家开展改革委员会 发布2003-10-01实施2003-09-29发布抗菌塑料抗菌性能试验方法和抗菌效果Antimicrobial plasticsTest for antimicrobial activity and efficacyJIS Z 28012000, Antimicrobial productsTest for antimicrobial activity and efficacy, NEQ & ASTM G2196,Standard Practice for Determining Resistance of Synthetic Polymeric Mater

2、ials to Fungi, NEQQB/T 25912003QB中华人民共和国轻工行业标准G31前 言本标准规定了抗菌塑料的抗菌性能试验方法和对抗菌效果的评价。本标准的抗菌性能要求和试验方法对应于日本国家工业标准JIS Z 28012000?抗菌加工制品抗菌性试验方法和抗菌效果?英文版，及美国材料与试验协会标准ASTM G 211996?合成高分子材料耐真菌性的测定?英文版。本标准与JIS Z 28012000和ASTM G211996的一致性程度为非等效。本标准的附录A和附录B为标准性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国塑料制品标准化技术委员会归口。本标准由海尔科化工程塑料国家

3、工程研究中心股份负责起草，中国科学院理化技术研究所、北京崇高纳米科技、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品平安所、上海维来新材料科技、广州擎天新材料研究开发、山东正元纳米材料工程、广东省微生物分析检测中心、美菱集团参加起草。本标准主要起草人：董晓旭、季君晖、李毕忠、颜乃泓、王友斌、陶志清、陈仪本。 本标准为首次发布。引 言抗菌塑料是一种新型的功能塑料，随着人们对生活质量要求的提高，其应用日益广泛。为保证国内抗菌塑料制品的质量，为抗菌塑料的评价提供统一的技术依据，特制定本行业标准。本标准主要提供抗菌塑料的试验方法和抗菌效果评价。对于抗菌塑料的其它重要性能，如产品的理化性能和平安性可参考其他相关

4、标准，在本标准中不作明确规定。而抗菌效果的长效性问题比拟复杂，需要进一步研究，本标准暂不涉及。抗菌塑料抗菌性能试验方法和抗菌效果1 范围本标准界定了抑菌、杀菌、抗菌和抗菌塑料的术语。本标准规定了抗菌塑料抗菌性能的术语和定义、产品分类、抗菌性能要求和试验方法。本标准适用于具有抑制/杀死细菌和或抑制/杀死霉菌作用的抗菌塑料，不适用于软质抗菌泡沫塑料和添加光触媒类抗菌剂的抗菌塑料。2 标准性引用文件以下文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。但凡注明日期的引用文件，其随后所有的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。

5、但凡不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定3 术语和定义本标准采用以下术语和定义。3.1 抑菌 抑制微生物生长繁殖的作用，叫做抑菌。3.2 杀菌 杀死微生物营养体和繁殖体的作用叫做杀菌。3.3 抗菌 抑菌和杀菌作用的总称为抗菌。3.4 抗菌塑料具有抗菌作用的塑料称为抗菌塑料。4 产品分类按抗菌性能可分为三种类型：a抗细菌型(应符合表1的要求)；b抗霉菌型(应符合表2的要求)；c抗细菌和霉菌型(应同时符合表1和表2的要求)。5 抗菌性能要求5.1 抗菌塑料的抗细菌性能抗菌塑料的抗细菌性能应符合表1的规定。表1 工程名称抗细菌率%抗细菌性

6、能试验9990注：抗细菌率见附录A符合99%的抗菌塑料可以报告有强抗细菌作用；抗细菌率符合90%的抗菌塑料可以报告有抗细菌作用。5.2 抗菌塑料的抗霉菌性能抗菌塑料的抗霉菌性能应符合表2的规定。表2 工程名称长霉等级抗霉菌性能试验0级1级注：长霉等级见附录B符合0级的抗菌塑料可以报告有强抗霉菌作用；长霉等级符合1级的抗菌塑料可以报告有抗霉菌作用。6 试验方法6.1 抗细菌性能试验 按附录A规定的方法进行试验。6.2 抗霉菌性能试验按附录B规定的方法进行试验。附 录 A标准性附录抗菌塑料抗细菌性能试验方法A.1 原那么本方法通过定量接种细菌于待检样品上，用贴膜的方法使细菌均匀接触样品，经过一定时

7、间的培养后，测得样品中的活菌数，并计算出样品的抗细菌率。本方法适用于抗菌塑料的抗细菌性能试验。A.2 条件A.2.1 主要设备A.2.1.1 恒温培养箱371、冷藏箱05、超净工作台、生物光学显微镜、压力蒸汽灭菌器、电热枯燥箱。A.2.1.2 灭菌平皿、灭菌试管、灭菌移液管、接种环、酒精灯。A.2.2 主要材料A.2.2.1 覆盖膜 聚乙烯薄膜，标准尺寸为(402)mm(402)mm、厚度为(0.050.10)mm。如试验样品外型尺寸较小，可按其面积减小该覆盖膜尺寸，且保证样品覆盖膜部位所铺的菌浓度不变。用70%乙醇溶液浸泡1min，再用无菌水冲洗，自然枯燥。A.2.2.2 样品A.2.2.2

8、.1 阴性对照样品编号A，是直径90mm或100mm的灭菌平皿的内平板。A.2.2.2.2 空白对照样品 编号B,是未添加抗菌成分的塑料，标准尺寸为(502)mm(502)mm、厚度不大于5mm。可用与抗菌塑料样基材相同的树脂、相同的加工工艺制成；也可直接从普通塑料制品与抗菌塑料检测样基材相同中裁剪，并尽可能选择外表平整的局部。假设尺寸小于50mm50mm，应不小于20mm20mm，否那么需将其重新加工制成标准尺寸。A.2.2.2.3 抗菌塑料样品编号C，是添加抗菌成分的塑料，推荐采用标准尺寸为(502)mm(502)mm、厚度不大于5mm。假设尺寸小于50mm50mm，应不小于20mm20m

9、m，且覆盖膜面积也相应减小，否那么将其重新加工制成标准尺寸。以上中的所有样品在试验前应进行消毒，建议用消毒剂70%乙醇溶液擦拭样品外表，1min后用无菌水冲洗，自然枯燥。如不适于用消毒剂处理的样品，可直接用无菌水冲洗。A.2.3 培养基和试剂 营养肉汤NB牛肉膏5.0g蛋白胨 10.0g氯化钠5.0g制法：取上述成分参加1000ml蒸馏水中，加热溶解后，用0.1mol/L NaOH溶液调节pH值使灭菌后为7.07.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内，121灭菌30min。A.2.3.2 营养琼脂培养基NA1000ml A.2.3.1营养肉汤NB中参加15g琼脂，加热熔化，用0.1 mol/L NaO

10、H溶液调节pH值使灭菌后为7.07.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内，121灭菌30min。A.2.3.3 试剂A.2.3.3.1 消毒剂70乙醇溶液。A.2.3.3.2 洗脱液含0.80% NaCl的生理盐水。为便于洗脱可参加少量无菌外表活性剂如吐温80。用0.1 mol/L NaOH溶液或0.1 mol/L HCl溶液调节pH值使灭菌后为7.07.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内，121灭菌30min。A.2.3.3.3 培养液营养肉汤NB/ 生理盐水溶液。建议用于大肠杆菌的浓度为1/500，金黄色葡萄球菌的浓度为1/100。为便于细菌分散可参加少量无菌外表活性剂如吐温80制成。用0.1 mol/

11、L NaOH溶液或0.1 mol/L HCl溶液调节pH值使灭菌后为7.07.2，分装后置压力蒸汽灭菌器内，121灭菌30min。 检验菌种a） 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) ATCC 6538b） 大肠埃希氏菌Escherichia coliATCC 25922根据产品的使用要求，可选用其它菌种作为检验菌种，但菌种应由国家级菌种保藏管理中心提供。A.3 操作步骤A.3.1 菌种保藏将菌种接种于营养琼脂培养基NA斜面上，在371下培养24h后，在05下保藏不得超过1个月，作为斜面保藏菌。 菌种活化将斜面保藏菌转接到平板营养琼脂培养基上，在371下培养24h，每天

12、转接1次，不超过2周。试验时应采用连续转接2次后的新鲜细菌培养物24h内转接的。A.3.3 菌悬液制备用接种环从A.3.2培养基上取少量刮12环新鲜细菌，参加培养液中，并依次做10倍递增稀释液，选择菌液浓度为5.010.0105cfu/ml的稀释液作为试验用菌液，按GB 4789.2?食品卫生微生物学检验 菌落总数测定?的方法操作。A.3.4 样品试验试验用菌液滴加在阴性对照样品A、空白对照样品B和抗菌塑料样品C上。每个样品做5个平行。用灭菌镊子夹起灭菌覆盖膜分别覆盖在样品A、样品B和 样品C上，一定要铺平，使菌均匀接触样品，置于灭菌平皿中，在371、相对湿度RH90条件下培养24h。取出培养

13、24h的样品，分别参加20ml 洗脱液，反复洗样品A、样品B、样品C及覆盖膜最好用镊子夹起薄膜冲洗，充分摇匀后，取一定量接种于营养琼脂培养基NA中，在371下培养2448h后活菌计数，按GB 4789.2?食品卫生微生物学检验 菌落总数测定的方法?测定活菌数。以上试验重复两次。A.4 检验结果计算将A.3.4中测定的活菌数结果乘以100为样品A、样品B、样品C培养24h后的实际回收活菌数值，数值分别为A、B、C，保证试验结果要满足以下要求，否那么试验无效：同一空白对照样品B的5个平行活菌数值要符合 最高对数值最低对数值/平均活菌数值对数值0.3；样品A的实际回收活菌数值A应均不小于1.0105

14、cfu/片，且样品B的实际回收活菌数值B应均不小于1.0104cfu/片。抗细菌率计算公式为： R%=BC/ B100式中：R抗细菌率B空白对照样品平均回收菌数(cfu/片)C抗菌塑料样品平均回收菌数(cfu/片)附 录 B标准性附录抗菌塑料抗霉菌性能试验方法B.1 原那么本方法用以测定抗菌塑料在霉菌生长的条件下对霉菌的抑制作用。本方法规定将一定量的孢子悬液喷在待测样品和培养基上，通过直接观测长霉程度来评价抗菌塑料的长霉等级。B.2 条件B.2.1 主要设备B.2.1.1 恒温恒湿培养箱281和相对湿度RH90%、冷藏箱010、超净工作台、离心机、生物光学显微镜、压力蒸汽灭菌器、电热枯燥箱。B

15、.2.1.2 血球计数板、灭菌平皿、灭菌试管、灭菌移液管、灭菌离心管、灭菌锥形瓶、接种环、酒精灯。B.2.2 主要材料B.2.2.1 阴性对照样品 25mm25mm无菌滤纸。B.2.2.2 空白对照样品编号A，是未添加抗菌成分的塑料，标准尺寸为502mm502mm，厚度不大于5mm。可用与抗菌塑料样基材相同的树脂，相同的加工工艺制成；也可直接从普通塑料制品与抗菌塑料样品基材相同中剪裁，应保证外表平整。假设尺寸小于50mm50mm，应不小于40mm40mm，否那么将其重新加工制成标准尺寸。B.2.2.3 抗菌塑料样品编号B，是添加抗菌成分的抗菌塑料，标准尺寸为502mm502mm，厚度不大于5m

16、m。可用与抗菌塑料样基材相同的树脂，相同的加工工艺制成；也可直接从普通塑料制品与抗菌塑料样品基材相同中剪裁。假设尺寸小于50mm50mm，应不小于40mm40mm，否那么将其重新加工制成标准尺寸。以上和中所有样品试验前均应进行消毒，建议用消毒剂70%乙醇溶液擦拭样品外表，1min后用无菌水冲洗，自然枯燥。如不适于用消毒剂处理的样品，可直接用无菌水冲洗。B.2.3 试剂和培养基B.2.3.1 营养盐培养液硝酸钠NaNO3磷酸二氢钾KH2PO4磷酸氢二钾K2HPO4氯化钾KCl硫酸镁MgSO4 7H2O硫酸亚铁FeSO47H2O蔗糖2.0g0.7g0.3g0.5g0.5g0.01g30g制法：取上

17、述成分参加1000ml 0.05%润湿剂水溶液中，加热溶解后，用0.1mol/L NaOH溶液调节pH值使灭菌后为6.06.5，分装后置压力蒸汽灭菌器内115灭菌30min。B.2.3.2 营养盐琼脂培养基营养盐培养液中参加15g琼脂，加热熔化，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH值使灭菌后为6.06.5，分装后置压力蒸汽灭菌器内115灭菌30min。B.2.3.3 马铃薯-葡萄糖琼脂培养基PDA马铃薯用水洗净，去皮切成小块。称取200g，加1000ml蒸馏水，加热煮沸1h。然后用双层纱布挤出滤液，将滤液加蒸馏水1000ml，参加葡萄糖20g，琼脂20g，加热熔化，用0.1mol/L NaO

18、H溶液调节pH值使灭菌后为6.06.5，115灭菌30min。B.2.3.4 试剂B.2.3.4.1 消毒剂70乙醇溶液B.2.3.4.2 洗脱液土温80、N-甲基乙磺酸N-methyltaurine和二辛磺化丁二酸钠Dioctyl Sodium Sulphosuccinate，以上润湿剂任选一种，制成含0.05%润湿剂水溶液，调节pH值使灭菌后为6.06.5，115灭菌30min。B.2.4 检测菌种序号名称菌号1黑曲霉(Aspergillus niger)AS 3.4463等同ATCC 62752土曲霉(Aspergillus terreus)AS 3.39353宛氏拟青霉(Paecilo

19、myces Varioti)AS3.42534绳状青霉(Penicillium funicolosum)AS3.38755出芽短梗霉(Aureobasium Pullulans)AS3.39846球毛壳Chaetoomium globsumAS3.4254或ATCC6205根据产品的使用要求，可选用其它菌种作为检测菌种，但菌种应由国家级菌种保藏管理中心提供。B.3 操作步骤B.3.1 菌种保藏将菌种分别接种在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基PDA斜面上，在2830下培养714d后，在510下保藏不得超过4个月，作为保藏菌。B.3.2 菌种活化将保藏菌接种在PDA斜面培养基试管中，培养714d，使生成大

20、量孢子。未制备孢子悬液时，不得拔去棉塞。每翻开1支只供制备1次悬液，每次制备孢子悬液必须使用新培养的霉菌孢子。B.3.3 孢子悬液制备在培养714d内的PDA斜面培养基中参加少量无菌蒸馏水，用灭菌接种针轻轻刮取外表的新鲜霉菌孢子，将孢子悬液置于250ml锥形瓶内，然后注入40ml洗脱液。 锥形瓶中参加直径5mm的玻璃珠1015粒与孢子混合，密封后置水浴振荡器中不断振荡使成团的孢子散开，然后用单层纱布棉过滤以除去菌丝。将其装入灭菌离心管中，用离心机别离沉淀孢子，去上清液。再参加40ml洗脱液，重复离心操作3次。用营养盐培养液稀释孢子悬液，用血球计数板计数，制成浓度为11062105spores/

21、ml的霉菌孢子悬液。6种霉菌均用以上方法制成孢子悬液，将6种孢子悬液混合在一起，充分振荡使其均匀分散。混合孢子悬液应在当天使用，假设不在当天使用应在37保存，4日内使用。B.3.4 平板培养基制备无菌平皿中注入营养盐琼脂培养基，厚度36mm，凝固后待用48h内使用。B.3.5 霉菌活性控制阴性对照样品无菌滤纸铺在平板培养基上，用装有新制备的混合孢子悬液的喷雾器喷孢子悬液，使其充分均匀地喷在培养基和滤纸上。在温度28，相对湿度90%RH以上的条件下培养7d，滤纸条上应明显有菌生长，否那么应重新制备孢子悬液。B.3.6 样品试验同时空白对照样品A、抗菌塑料样品B也分别铺在平板培养基上，喷孢子悬液，使其充分均匀地喷在培养基和样品上。每个样品做5个平行。以上样品在温度28，相对湿度90%RH以上的条件下培养28d，假设样品长霉面积不小于10%，可提前结束实验。以上试验重复两次。B.4 检验结果取出样品需立即进行观察，空白对照样品A长霉面积应不小于10%，否那么不能作为该试验的空白对照样品。样品长霉等级：0级 不长，即显微镜放大50倍下观察未见生长；1级 痕迹生长，即肉眼可见生长，但生长覆盖面积小于10%；2级 生长覆盖面积不小于10%。