12操作步骤.ppt

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1、基因工程简介基 因操作的基本步骤示意图三、基因操作的基本步骤三、基因操作的基本步骤提取目的基因目的基因与运载体结合将目的基因导入受体细胞目的基因的检测和表达从从供体细胞的供体细胞的DNA中直接中直接分离基因方法：鸟枪法分离基因方法：鸟枪法（1）鸟枪法的过程：）鸟枪法的过程：（一）提取目的基因的途径（一）提取目的基因的途径逆转录法逆转录法根据已知氨基酸根据已知氨基酸序列合成序列合成DNA人工合成基因（真核细胞）人工合成基因（真核细胞）目的基因的目的基因的mRNA单链单链DNA逆转录逆转录双链双链DNA（目的基因）目的基因）合成合成供体细胞中供体细胞中DNA许多许多DNA片段片段限制酶限制酶结合结

2、合运载体运载体导入导入受体细胞受体细胞目的基因目的基因分离分离DNA复制复制（2）逆转录法的过程：）逆转录法的过程：氨基酸序列氨基酸序列推测推测mRNA核苷酸序列核苷酸序列推测推测基因的核苷酸序列基因的核苷酸序列化学合成化学合成目的基因目的基因.提取目的基因的方法提取目的基因的方法直接分离基因直接分离基因鸟枪法鸟枪法（散弹射击法）（散弹射击法）优优点点：操操作作简简便便缺缺点点：工工作作量量大大 具具有有一一定定的的盲盲目目性性mRNADNA逆转录逆转录蛋白质mRNADNA推测推测人工合成法三、基因操作的基本步骤三、基因操作的基本步骤优点：优点：缺点：缺点：专一性强，还可以合成自然界中专一性强

3、，还可以合成自然界中不存在的基因，因此有着广泛的不存在的基因，因此有着广泛的应用前景。应用前景。操作过程麻烦，技术条件要求较高操作过程麻烦，技术条件要求较高G A A T T CG A A T T CC T T A A GC T T A A GC T T A AC T T A AGGA A T T CA A T T CGG观观察察与与思思考考3、目的基因与运载体结合A C GA C GT TG C AG C AT T抗菌素抗性基因抗菌素抗性基因A C GA C GT TG C AG C AT T目的基因目的基因A C GA C GT TG C AG C AT T标记基因标记基因观观察察与与思思

4、考考1 1、切割质粒与获得目的基因切割、切割质粒与获得目的基因切割DNADNA分子是否分子是否 一定要用同一种限制性内切酶？为什么？一定要用同一种限制性内切酶？为什么？答：是。要保证有相同的黏性未端。答：是。要保证有相同的黏性未端。2 2、该过程除使用限制性内切酶外，还使用什么酶？、该过程除使用限制性内切酶外，还使用什么酶？答：答：DNADNA连接酶连接酶。启启动动子子终终止止子子（二）目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）二）目的基因与运载体结合（以质粒为运载体）质粒质粒DNA分子分子同一种限制酶处理同一种限制酶处理 一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端 两个切口两个切口获得目的基因获得

5、目的基因DNA连接酶连接酶重组重组DNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）三种情况：目的基因与目的基因结合三种情况：目的基因与目的基因结合 质粒与质粒结合质粒与质粒结合 目的基因与质粒结合目的基因与质粒结合目的基因与运载体结合的结果可能有几种情况？目的基因与运载体结合的结果可能有几种情况？（3）将目的基因导入受体细胞）将目的基因导入受体细胞植物细胞：农杆菌转化法（双子叶植物和裸子植物细胞：农杆菌转化法（双子叶植物和裸子植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通植物）、基因枪法（单子叶植物）、花粉管通道法道法动物细胞：显微注射法（受精卵）动物细胞：显微注射法（受精卵）微生物细胞：微生物细胞：Ca2+

6、处理法处理法导入方法：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径导入方法：借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径导入过程：运载体为质粒，受体细胞为细菌导入过程：运载体为质粒，受体细胞为细菌受体细胞：细菌受体细胞：细菌细胞壁的通透性增大细胞壁的通透性增大重组质粒进入受体细胞重组质粒进入受体细胞目的基因随受体细胞的繁殖而复制目的基因随受体细胞的繁殖而复制氯化钙氯化钙4 4、目的基因的检测和表达、目的基因的检测和表达分子水平分子水平的检测的检测个体水平个体水平的检测的检测:检测转基因生物的检测转基因生物的 DNA上是否导入目的基因上是否导入目的基因DNA分子杂交（分子杂交（DNA-DNA）检测目的基因是否转录出了检测目的基因是否转录出了mRNADNA分子杂交分子杂交(DNA-RNA)检测目的基因是否翻译成蛋白质检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原抗原-抗体杂交抗体杂交抗虫鉴定、抗病鉴定抗虫鉴定、抗病鉴定转录转录翻译翻译基因工程优点：目的明确，周期短，打破基因工程优点：目的明确，周期短，打破物种生殖隔离界限（克服远缘杂交不亲和）。物种生殖隔离界限（克服远缘杂交不亲和）。