实验四、动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察.ppt

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1、实验四实验四 动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察动物细胞线粒体的超活染色与油镜观察 一一.实验原理实验原理 活活体体染染色色是是指指对对生生活活有有机机体体的的细细胞胞或或组组织织能能着着色色但但又又无无毒毒害害的的一一种种染染色色方方法法。它它的的目目的的是是显显示示生生活活细细胞胞内内的的某某些些结结构构，而而不不影影响响细细胞胞的的生生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。线线粒粒体体是是细细胞胞进进行行呼呼吸吸作作用用的的场场所所，其其形形态态和和数数量量随随物物种种、组组织织器器官官和和生生理理状状态态的的不不同同而而发发

2、生生变变化化。詹詹纳纳斯斯绿绿B B可可专专一一性性地地对对线线粒粒体体进进行行超超活活染染色色，这这是是由由于于线线粒粒体体内内的的细细胞胞色色素素氧氧化化酶酶系系的的作作用用，使使染染料料始始终终保保持持氧氧化化状状态态(即即有有色色状状态态)，呈呈蓝蓝绿绿色色；而而线线粒粒体体周周围围的的细细胞胞质质中中，这这些染料被还原为无色的色基些染料被还原为无色的色基(即无色状态即无色状态)。二二.试剂与器械试剂与器械 1.1.器器材材 :显显微微镜镜、恒恒温温水水浴浴锅锅、解解剖剖盘盘、剪剪刀刀、镊镊子子、双双面面刀刀片片、解解剖剖盘盘载载玻玻片片、凹凹面面载载玻玻片片、盖盖玻玻片片、表表面面皿

3、皿、吸管、牙吸管、牙 签、吸水纸签、吸水纸。2.2.试剂：试剂：RingerRinger溶液溶液 、10%10%中性红溶液中性红溶液 、1%1%詹纳斯绿詹纳斯绿B B溶液溶液 三实验步骤三实验步骤（一）（一）线粒体的线粒体的超活染色超活染色1.1.取取清清洁洁载载玻玻片片放放在在3737恒恒温温水水浴浴锅锅的的金金属属板板上上，滴滴2 2滴滴1/50001/5000詹詹纳斯绿纳斯绿B B染液。染液。2.2.实实验验者者用用牙牙签签宽宽头头在在自自己己口口腔腔颊颊粘粘膜膜处处稍稍用用力力刮刮取取上上皮皮细细胞胞，将将刮刮下下的的粘粘液液状状物物放放大大载载玻玻片片的的染染液液滴滴中中，染染色色1

4、010l5min(l5min(注注意意不不可可使使染染液液干干燥燥，必必要要时时可可再再加加滴滴染染液液)，盖盖上上盖盖玻玻片片，用用吸吸水水纸纸吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。吸去四周溢出的染液，置显微镜下观察。3.3.在在低低倍倍镜镜下下，选选择择平平展展的的口口腔腔上上皮皮细细胞胞，换换高高倍倍镜镜或或油油镜镜进进行行观观察察。可可见见扁扁平平状状上上皮皮细细胞胞的的核核周周围围胞胞质质中中，分分布布着着一一些些被被染染或或蓝蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。（二）油镜的观察操作二）油镜的观察操作1.1.把镜筒向上提升约把镜筒向上提升约

5、1515cm(cm(有的是载物台向下降有的是载物台向下降1515cm)cm)，再把油再把油 镜转到工作位置。镜转到工作位置。2.2.在聚光器和盖玻片上所要观察的位置各滴一小滴香柏油或石蜡在聚光器和盖玻片上所要观察的位置各滴一小滴香柏油或石蜡 油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油油，一边从侧面观察油镜头，一边细心拧动粗调焦螺旋，使油 镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻镜头的前端与油滴接触，再慢慢下降油镜，使其前端接近盖玻 片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边拧动细调焦螺片为止，最后，一边观察视野中的图像，一边拧动细调焦螺 旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。

6、旋，使镜筒稍为上下升降看清标本。3.3.观察完毕后，提升物镜约观察完毕后，提升物镜约lcmlcm，把油镜转离光轴，及时做清洁把油镜转离光轴，及时做清洁 工作。油镜先用干的擦镜纸擦工作。油镜先用干的擦镜纸擦1 1一一2 2次，把部分油去掉，再用清次，把部分油去掉，再用清 洁剂洁剂(70%(70%乙醚乙醚+30%+30%无水乙醇无水乙醇)或二甲苯滴湿的擦镜纸擦或二甲苯滴湿的擦镜纸擦2 2次，最次，最 后用于擦镜纸擦后用于擦镜纸擦1 1次。擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油次。擦拭要小心，动作要轻，聚光器上的油 也用同样方法处理。也用同样方法处理。四四.注意事项注意事项 应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色应稍用力刮取口腔颊粘膜处上皮细胞，否则无活细胞染色不能成功不能成功。五五.实验结果实验结果 可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或可见扁平状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染或蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。蓝绿色的颗粒状或短棒状的结构，即是线粒体。六六.思考题思考题 1.1.简述使用油镜前后的注意事项。简述使用油镜前后的注意事项。2.2.描绘描述线粒体的形态结构描绘描述线粒体的形态结构。