学士学位论.pdf

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1、百度文库-让每个人平等地提升自我 1 学 士 学 位 论 文 系 别：生 命 科 学 系 学科专业：食品科学与工程 姓 名：杨 俊 琴 运 城 学 院 2009 年 5 月 百度文库-让每个人平等地提升自我 2 几种苹果中有机酸的比较 系 别：生 命 科 学 系 学科专业：食品科学与工程 姓 名：杨 俊 琴 指导教师：杨 青 珍 运 城 学 院 2009 年 5 月 百度文库-让每个人平等地提升自我 3 几种苹果中有机酸的比较 杨俊琴(运城学院 生命科学系 山西运城 044000)摘要：本试验以不同品种苹果为材料，通过运用高效液相色谱法，研究苹果中有机酸的种类及含量。结果表明：(1)选择L-1

2、KH2PO4磷酸盐缓冲液（）和体积分数 3%甲醇为流动相，流速为min-1，柱温为室温，检测波长 210nm 时，能较好的分离和测定苹果中常见的有机酸，可广泛应用于果品的质量控制。(2)五种不同品种的苹果中，有机酸总含量由高到低：烟富 6 号黄香蕉果长富 2 号烟富 3 号水晶富士。(3)在这五种不同品种的苹果中，以苹果酸和琥珀酸为主要有机酸，其中苹果酸含量最高，为 mgmL-1，占总酸含量的 25%72%。琥珀酸次之，含量在 mgmL-1，占总酸含量的 14%41%。(4)不同品种的苹果有机酸种类有较大的差别。长富 2 号、水晶富士和烟富 3 号是以琥珀酸和苹果酸为主；黄香蕉是以苹果酸为主，

3、含量为 mgmL-1；烟富 6 号是以苹果酸为主，含量为 mgmL-1。(5)这五种不同品种的苹果，从口感来说，长富 2 号的酸度较低，偏甜。黄香蕉果总酸度较大、偏酸，水晶富士、烟富 3 号酸度适中，爽口。烟富 6 号的酸度大，可口。关键字：苹果 有机酸 高效液相色谱 百度文库-让每个人平等地提升自我 4 Compare of determination of kinds and contents of Organic Acids in apple from Different Cultivars Yang Junqin(Life-science Department of Yuncheng

4、University，Yuncheng shanxi，044000)Abstract：This experiment take the different variety apple as a material,through the use of high-performance liquid chromatography(HPLC)to study the types of apples and the content of organic acids.The result indicated:(1)Choice of LKH2PO4 phosphoric acid buffer solu

5、tion and 3%methanol as mobile phase at a flow rate of ml/min and UV detection at temperature at 25 when better separation and determination of organic acids commonly found in apples,can be widely used in fruit quality control.(2)Five kind of different variety apple,organic acid content from high to

6、low:Yanfu 6 yellow banana fruit Changfu 2 Yanfu 3 Crystal Fuji (3)In this five different varieties of apples,with malic acid and succinic acid as the main organic acids,malic acid content of which the highest,mg mL-1,the total acid content of 25%72%.Succinate followed by content of mgmL-1,the total

7、acid content of 14%41%.(4)Of different organic acid content of apple varieties have a greater difference.Chang Fu 2,Crystal Fuji and Yanfu 3 are mainly oxalic acid and succinic acid;The yellow banana is by the malic acid primarily,the content is mgmL-1;Yanfu 6 is by the malic acid primarily,the cont

8、ent respectively is mgmL-1.(5)Banana yellow fruit with lower acidity,sweet side.Chang Fu 2,Fuji Crystal,Yanfu 3 are moderate.Yanfu 6 of the acidity is big.Key words：Apple organic acids HPLC 目录 百度文库-让每个人平等地提升自我 5 1 前言.1 苹果简介.1 1.1.1苹果中的有机酸.2 国内外研究进展.2 1.2.1研究有机酸测定方法的进展.2 1.2.2高效液相色谱法测定水果中有机酸含量的进展.2 主

9、要研究内容.3 研究的目的和意义.3 2 试验材料与方法.3 试验材料.3 药品、试剂.3 主要设备.4 试验方法.4 2.4.1标准溶液的配制.4 2.4.2色谱条件.4 2.4.3样品处理.4 2.4.4标准酸图谱绘制.4 2.4.5标准曲线绘制.4 2.4.6标准酸精密度试验.5 2.4.7标准酸回收率试验.5 2.4.8样品分离图谱绘制.5 3 结果与分析.5 色谱条件的选择.5 3.1.1检测波长的选择.5 3.1.2流动相的选择.5 3.1.3流动相的种类和浓度.6 3.1.4流速.6 标准酸图谱.6 标准曲线的绘制.9 方法的重现性和精密度试验.10 回收率试验.11 样品中的草

10、酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸分离图谱.11 苹果样品分析.14 苹果的品质鉴评.15 4 讨论.15 结论.16 致谢.17 参考文献.18 百度文库-让每个人平等地提升自我 1 1 前言 苹果简介 苹果是蔷薇科(Rosaceae)苹果属(malus)植物的果实，苹果属本属共有 35 个种。苹果树是栽培最广泛的果树。苹果树，落叶乔木。树高可达 15 米，栽培条件下一般只有 46 米。它单叶互生，椭圆至卵圆形，叶缘有锯齿，花白微红。树干灰褐色，老皮有不规则的纵裂或片状剥落，小枝光滑。喜光，喜微酸性到中性土壤。最适于土层深厚、富含有机质、心土为通气排水良好的沙质土壤。繁殖栽培用嫁接繁殖。苹果树是喜低

11、温干燥的温带果树，要求冬无严寒，夏无酷暑。苹果属原产于两半球温带。世界苹果年产量约为万公吨。果实圆形，味甜，是普通的水果。苹果富含碳水化合物和维生素 A、C，所含纤维量多，亦为身体所必需。苹果是梨果的一种，虽然成熟苹果的大小、形状、颜色和酸度因品种和环境条件的不同而差异很大，但通常圆形，直径 50100 毫米，带红色或黄色。苹果品种数以千计，分为酒用品种、烹调品种、尾食品种 3 大类。3 类品种的颜色、大小、香味、光滑度脆性、风味等特点均有差别。不少品种含糖较高，中等酸度，丹宁含量很低。苹果除生食外，烹食方法也很多，常用作点心馅，苹果馅烤饼可能是最早的美国式甜尾食。炸苹果常与香肠、猪排等菜肴同

12、食，尤其在欧洲是如此。晚夏成熟的品种一般不宜贮藏。晚秋成熟的品种精心保管可贮藏达一年之久。在温度略高于苹果的冰点的条件下可将其保存较长时间，亦可将苹果置于惰性气体或成分受控制的空气中贮藏。苹果是一种营养价值很高的水果。苹果中的胶质和微量元素铬能保持血糖的稳定，还能有效地降低胆固醇；在空气污染的环境中，多吃苹果可改善呼吸系统和肺功能，保护肺部免受污染和烟尘的影响；苹果中含的多酚及黄酮类天然化学抗氧化物质，可以减少肺癌的危险，预防铅中毒；苹果特有的香味可以缓解压力过大造成的不良情绪，还有提神醒脑的功效；苹果中富含粗纤维，可促进肠胃蠕动，协助人体顺利排出废物，减少有害物质对皮肤的危害；苹果中含有大量

13、的镁、硫、铁、铜、碘、锰、锌等微量元素，可使皮肤细腻、润滑、红润有光泽。总之，吃苹果既能减肥，又能帮助消化，老人吃了会很好的。苹果含有多种维生素、矿物质、糖类、脂肪等，构成大脑所必须的营养成分。苹果中的纤维，对儿童的生长发育有益，能促进生长和发育。苹果中的锌对儿童的记忆有益，能增强儿童的记忆力。但苹果中的酸能腐蚀牙齿，吃完苹果后最好漱漱口。一般人群均可食用。慢性胃炎、消化不良、气滞不通者，便秘、慢性腹泻、神经性结肠炎，高血压、高血脂和肥胖患者，癌症患者、贫血和维生素缺乏者尤其适合；准妈妈每天吃个苹果可以减轻孕期反应；但肾炎和糖尿病患者不宜多吃。苹果味甘、酸，性凉，归脾、肺经；具有生津、润肺，除

14、烦解暑，开胃、醒酒，止泻的功效；主治中气不足，消化不良，气壅不通，轻度腹泻，便秘，烦热口渴，饮酒过度，高血压等。由于糖类、有机酸的含量是苹果中主要颜色和风味的营养物质，直接影响果品的风味、口感及色泽，是果品成熟度、储藏性以及加工性的重要依据，其种类和含量与果品品质有密切关系，因此，不同品种苹果的有机酸需要一定的比较，以期各种苹果获得不同适当的利用价值。百度文库-让每个人平等地提升自我 2 1.1.1 苹果中的有机酸 苹果中的有机酸主要有草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸等。酸味1是影响果实风味的重要标志，由于果实中含有游离酸或酸式盐，因而具有酸味。其含量不仅因果实种类和品种不同而异，而且在同一品种中

15、，不同成熟期，同一果实而部位不同，含量亦有所不同，近果皮的果肉酸量较大，而中部及近核处的果肉中酸的含量较小。果实中的主要有机酸是柠檬酸、苹果酸、酒石酸这三种酸，通称为果酸。此外，还含有少量的草酸、琥珀酸、乳酸，以及更少量的挥发性醋酸等。这些挥发酸的酯性是确定果实特有香气的重要芳香物质。在加工过程中，制品的含酸量，对抑制微生物活动，蔗糖的转化，果胶凝胶强度，维生素C 的保持，果汁的褐变都有很大的影响。有机酸能够促进消化腺的活动，有助于食物的吸收，增强人的食欲，帮助消化，也可以使食物中水溶性 B 族维生素和维生素 C 的化学性质稳定，不易因受热或强光照射而被破坏，能够提高人体吸收钾的能力，促进食物

16、中铜、锌和钙的溶解，以利于身体的吸收和利用，增强抗病能力。它还能稳定细胞液中的 pH 值，并在果实自身代谢中参与了光合作用、呼吸作用，以及合成酚类、氨基酸、酯类和芳香物质的代谢过程。国内外研究进展 苹果是世界上栽培面积最广、产量最多的果树之一。主产国有中国、美国、法国、意大利等。糖酸是影响果实内在品质的重要因素，所以，国内外学者对多种果树如柑橘、苹果、桃子、杏、李等果实主要的糖酸组分有较细致的研究，主要有机酸基本都是柠檬酸或者苹果酸。1.2.1 研究有机酸测定方法的进展 目前所报道的测定有机酸含量的方法中，化学滴定法：一般只用于测定食品中的总酸度，用强碱标准液直接滴定，用酚酞作指示剂，当滴定至

17、终点时，根据所消耗的标准液的浓度和体积，计算出样品中总酸含量。比色法：利用不同的酸碱指示剂来显示 pH。薄层色谱法：酮酸与 2，4-二硝基苯肼反应生成腙，用有机溶剂提取，将碳酸钠溶液加入提取液中，通过转溶酸性腙去除中性物质。恢复成酸性再用有机溶剂提取，并用薄层色谱法分离酮酸腙。气相色谱法虽然可测定单个的有机酸含量，但却需要预分离或衍生化等烦琐的处理。液相色谱法简便、迅速、灵敏度高，在食品分析领域得到了广泛的应用。1.2.2 高效液相色谱法测定水果中有机酸含量的进展 高效液相色谱（HPLC）分析2又称高压液相色谱分析法，其分离原理是利用试样中各组分在两相间有不同的分配系数，当两相作相对运动时，组

18、分在两相间进行多次反复的分配（吸附或溶解），使试样混合物达到分离。分离的实质是溶质分子与溶剂（又称流动相）以及固定相分子间的相互作用，这种作用力的大小，决定色谱分离过程的保留行为。其优点是高选择性、高速度、高灵敏度、重复性好。于 70 年代迅速发展起来的分离分析技术，在化工、环保、临床、医药、农业等领域中广泛地应用。成为现代分析技术的重要手段。高海燕3等（2004）利用高效液相色谱，在白梨品种果汁中检测的有机酸有苹果酸、柠檬酸、琥珀酸、酒石酸、莽草酸、奎宁酸、乳酸和富马酸，其中苹果酸含量最高，为103103mg/L；柠檬酸次之,含量为103103 mg/L；次要有机酸为奎宁酸和琥珀酸；酒石酸、

19、莽草酸、乳酸和富马酸的含量则相对较低；胡志群4等(2005)对荔枝果肉中的糖、酸、和维生素 C 进行了测定。个荔枝品种假种皮中的主要有机酸都是苹果酸和酒石酸，并未发现琥珀酸。苹果酸的含量分别为酒石酸含量的倍（妃子笑）和倍（糯米糍）。且荔枝百度文库-让每个人平等地提升自我 3 果实的糖酸比较高，存在品种差异；陈美霞5（2006）通过对 10 个品种的杏果实进行测定，显示杏中苹果酸和柠檬酸在品种间差异显著，并可将杏品种分为柠檬酸型和苹果酸型；李小平6等(2008)利用反相高效液相色谱法,在苹果品种,葡萄品种果汁中检测的有机酸有草酸（10%，6%）、苹果酸（25%，32%）、抗坏血酸（%，15%）、

20、柠檬酸（20%，59%）、富马酸（含量很低）。主要研究内容 本试验首先对一种苹果平行进行几种有机酸含量的测定，然后再对不同品种苹果做类似的有机酸测定，以进行系统的比较，进而得到不同品种中有机酸含量的差异。试验中涉及到有机酸标准曲线的绘制，加标回收率的计算，有机酸测定外标法的应用等。通过本次试验进一步为苹果品质全面提高，研发深加工产品提供了理论依据和指导。研究的目的和意义 苹果是世界十大水果之一，近年来，在国际市场上品质竞争越来越激烈。我国是苹果生产大国，无论面对国内还是国际市场，苹果生产都面临着品质亟待提高的问题。随着人们生活水平的提高和果品供应的日益多样化，人们对品质的要求已不仅限于大小、色

21、泽等外观品质，风味、香气、保健功效等更高层次的品质指标越来越受人们的重视。随着贮运、加工业的发展，与贮运加相关的品质特性也开始受到关注。苹果中可溶性糖、有机酸含量是判断果实内在品质的重要组成部分，而糖酸的不同组分又是风味差别和其营养价值不同主要原因之一。本试验对不同品种苹果中有机酸的种类及含量进行研究，探索了有机酸与苹果品质，口感间的关系，以期为苹果品质的全面提高、品质育种、研发深加工产品和拓宽加工利用途径提供理论依据和指导。2 试验材料与方法 试验材料 烟富 3 号、烟富 6 号、长富 2 号均采自运城果业试验基地；黄香蕉果、水晶富士均运城华联超市购买。药品、试剂 药品 规格 生产产家 草酸

22、 分析纯 天津市瑞金特化学品有限公司 苹果酸 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 柠檬酸 分析纯 河北省保定化学试剂有限公司 琥珀酸 分析纯 北京化工厂 磷酸 分析纯 天津市化学试剂三厂 甲醇 色谱纯 天津市科密欧化学试剂有限公司 磷酸二氢钾 分析纯 天津市瑞金特化学品有限公司 百度文库-让每个人平等地提升自我 4 主要设备 设备 型号 生产产家 高效液相色谱仪 Agilent Technologies 1200series 安捷伦科技有限公司 无油隔膜真空泵 Ap01p101D 天津奥特赛恩斯仪器有限公司 离心机 TGL16G 上海安亭科学仪器有限公司 酸度计 PHS3C 金坛市荣华仪器制造有

23、限公司 恒温水浴锅 HHS 型 天津市华北实验仪器有限公司 微量进样器 50L 上海高鸽工贸有限公司 试验方法 2.4.1 标准溶液的配制 精确称取 50mg 草酸、125mg 苹果酸、250mg 柠檬酸、375mg 琥珀酸分别置于 4 个 50mL棕色容量瓶中，用超纯水稀释、定容配制成单标溶液。再称取与上述等量的酸用超纯水稀释、定容于 50mL 容量瓶中，配制成混标溶液，用m 的滤膜过滤，上机绘制各种酸标准曲线。2.4.2 色谱条件 色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-C18(10m,150mm；检测器为 G1314B VBD；紫外检测波长 210nm。流速：min；柱温为室温

24、；进样量为 20L。流动相 A（甲醇）：流动相 BL 的 KH2PO4水溶液，用磷酸调 pH 到=3：97；时间：10min。2.4.3 样品处理 将苹果去皮去核，切下果肉中央部位质量为的方形小块，用电子天平测其质量，精确到，用 5mL 超纯水研磨，80恒温水浴 15min，不时搅拌，使有机酸充分浸出，冷却后再10000 转离心 15min，残渣加入 4mL 超纯水再提取，合并上清液，定容到 10mL，用注射器抽取样液，用m 滤液过滤、C18 柱分析。每个样品重复五次。2.4.4 标准酸图谱绘制(1)单标溶液经m 滤膜过滤，按色谱条件上机进样。以有机酸的保留时间为横坐标，浓度为纵坐标。绘图。(

25、2)混标溶液图谱操作方法同(1)。2.4.5 标准曲线绘制 苹果中的草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸按表 1 所示浓度配制成相应的标准液，以色谱条件进行测定，以峰面积为横坐标，标准液浓度为纵坐标，绘制标准工作曲线。表 1 标准液浓度 百度文库-让每个人平等地提升自我 5 Table 1 Concentration of each acid 有机酸 草酸 苹果酸 柠檬酸 琥珀酸 浓度 1（mg/mL）浓度 2（mg/mL）1 浓度 3（mg/mL）1 浓度 4（mg/mL）2 2 浓度 5（mg/mL）2.4.6 标准酸精密度试验 取草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸浓度分别为 mL、mL、mL、mL 的

26、混合标准液，在上述色谱条件下重复进样 5 次。测方法的精密性。2.4.7 标准酸回收率试验 采用加标样回收法，取同一苹果样品 2 份，1 份作为本底，另 1 份加入一定量的 4 种标准有机酸溶液，按试验方法平行测定五次，计算回收率。2.4.8 样品分离图谱绘制 取待测样品浸提液 20L，在色谱条件下测定。3 结果与分析 色谱条件的选择 3.1.1 检测波长的选择 二元酸及多元酸中，除乙二酸中两个羧基的共轭效应使其最大吸收有较大的红移外，其他酸的吸收在 210nm 附近。同时本实验中用作流动相的磷酸盐缓冲液 210nm 附近没有吸收。因此，实验中选择 210nm 作为检测波长。3.1.2 流动相

27、的选择 有机酸在水相中大部分以离子态存在，而离子在反相色谱柱上几乎无保留，故采用抑制电离的方法，使其变为分子态的酸在柱子上保留而得到分离。KH2PO4缓冲溶液作为一种弱酸电离抑制剂在紫外区几乎无吸收，因此，用其作为测定有机酸的流动相有利于有机酸的分离而不影响检测。由于较高浓度的盐缓冲溶液对泵和柱子都有影响，而较低浓度的盐缓冲溶液又对分离有影响，故选择L 的 KH2PO4缓冲溶液作流动相的主要成分。用磷酸调节 KH2PO4缓冲溶液的 pH 值至、，分别用来测定草酸、苹果酸、柠檬酸、和琥珀酸。结果发现，当 pH 值=时，一些有机酸有明显的前沿峰，草酸分离度不高；但pH 值太低，大部分有机酸保留时间

28、延长，达不到快速分离的效果，而且低 pH 值的流动相对柱子寿命有影响。pH 值在之间效果最好，因此实验选用的流动相。同时，为了达到快速分离的效果，选择另外一种洗脱能力较强的流动相甲醇进行实验。结果发现，当甲醇浓度大于 3%（体积分数，下同）时，柠檬酸与其它酸不能分开；当甲醇浓度为%时，分离时间较长，且苹果中柠檬酸没有被分离出来。甲醇浓度为%时，这四百度文库-让每个人平等地提升自我 6 种有机酸的分离都比较合适，因此实验选择流动相中甲醇浓度为 3%。3.1.3 流动相的种类和浓度 比较了 KH2PO4和 NH4H2PO4两种不同的磷酸盐对分离效果的影响，两种磷酸盐作为流动相时有机酸时有机酸的分离

29、效果差别不大，两者都有可以作为流动相。本实验中选择KH2PO4作为流动相。流动相的 pH 有机酸为弱酸，在水溶液中会解离，为了使有机酸能够以分子的形式在色谱柱上保留，因此，可通过调节流动相的 pH 以达到抑制解离的作用。当 pH 从增加到时，草酸、苹果酸、和柠檬酸的保留时间逐渐靠近。pH 在的范围内，各种酸都能较好分离；时，其它酸和柠檬酸重叠；时其它酸和柠檬酸出峰顺序颠倒；pH 低于时会引起色谱柱键合相的损失，同时考虑到 pH 增加时，草酸和柠檬酸的保留时间有靠近的趋势，分离度逐渐降低，所以选择。3.1.4 流速 流速对分离度的影响较小，主要是影响保留时间。流速较小时，各种酸的保留时间增加使得

30、整个分析时间延长，流速增加后，各酸的保留时间缩短，同时整个分析时间大大缩短。但是当流速太大时会增加柱的压力。所以，实验中选择 min。标准酸图谱 标准酸的图谱见图 15。通过图谱分析，草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的保留时间为 23min，在此条件下，草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸单个标准或混合标准都得到很好的分离，该色谱条件可以用来测定样品中草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的含量。图 1 草酸标准图谱 Chromatogram of oxalic 由图 1 可知浓度为 1mg/mL 草酸标准品的保留时间为。色谱峰高为 175mAU。保留时间/min 0 1 2 峰高/mAU 0 25 50 75 1

31、00 125 150 175 百度文库-让每个人平等地提升自我 7 图 2 苹果酸标准图谱 Chromatogram of malic 由图 2 可知浓度为 mL 苹果酸标准品的保留时间为。色谱峰高为140 mAU。图 3 柠檬酸标准图谱 Chromatogram of citric 由图 3 可知浓度为 5mg/mL 柠檬酸标准品的保留时间为。色谱峰高为 80 mAU。保留时间/min 0 1 2 3 4 峰高/mAU 0 20 40 60 80 保留时间/min 0 1 2 3 4 峰高/mAU 0 20 40 60 80 100 120 140 百度文库-让每个人平等地提升自我 8 图

32、4 琥珀酸标准图谱 Chromatogram of succinic acid 由图 4 可知浓度为 mL 琥珀酸标准品的保留时间为。色谱峰高为200 mAU。图 5 草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸混合酸标准图谱 Chromatogram of oxalic acid,malic acid,citric acid and succinic acid 注：A：草酸；B：苹果酸；C：柠檬酸；D：琥珀酸 由图 5 可知草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸浓度分别为 mL、mL、mL、mL 的混合标准液中草酸的保留时间为，色谱峰高为4000 mAU；苹果酸的保留时间，色谱峰高为7000 mAU；柠檬酸的保留时间

33、为，色谱峰高为 300 mAU；琥珀酸的保留时间为，色谱峰高为200 mAU。保留时间/min 0 1 2 3 4 峰高/mAU 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 A B C D 保留时间/min 0 1 2 3 0 25 50 75 100 125 150 175 200 峰高/mAU 百度文库-让每个人平等地提升自我 9 标准曲线的绘制 苹果中的草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸按表 1 所示的浓度配制成相应的标准液，以上述色谱条件进行测定，以峰面积为横坐标，标准液浓度为纵坐标，绘制标准工作曲线，得出回归方程，相关系数及线性范围。草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀

34、酸标准工作曲线见图69。对梯度浓度标准液测定，色谱峰面积与浓度之间线性关系良好，通过色谱峰面积可以准确的计算出样品中草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸浓度。Stardard curve of oxalic acid 由图 6 可知草酸标准品的回归方程为 y=1E-04x+；相关系数（R）为；线性范围为400g/L。Stardard curve of malic acid 由图 7 可知苹果酸标准品的回归方程为 y=-；相关系数（R）为；线性范围为1000 图 6 草酸标准工作曲线 y=1E-04x+R 2 =0 0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 面积 浓度 图 7 苹果

35、酸标准工作曲线 y=-R 2 =0 1 2 0 200 400 600 800 1000 面积 浓度 百度文库-让每个人平等地提升自我 10 g/L。Stardard curve of citric acid 由图 8 可知柠檬酸标准品的回归方程为 y=+；相关系数（R）为；线性范围为1000 g/L。Stardard curve of succinic acid 由图 9 可知草酸标准品的回归方程为 y=+；相关系数（R）为；线性范围为400g/L。方法的重现性和精密度试验 取草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸浓度分别为 mL、mL、mL、mL 的混合标准液，在上述色谱条件下重复进样 5 次。图

36、8 柠檬酸标准工作曲线 y=+R 2 =0 1 2 3 0 500 1000 1500 2000 面积 浓度 图 9 琥珀酸标准工作曲线 y=+R 2 =0 1 2 3 4 5 0 1000 2000 3000 4000 面积 浓度 百度文库-让每个人平等地提升自我 11 表 3 精密度试验结果 Table 3 Peak area of oxalic acid,malic acid,citric acid and succinic acid standard solution repeat determination 重复次数 峰面积 草酸 苹果酸 柠檬酸 琥珀酸 1 2 3 4 5 平均值

37、标准差 相对标准差/%由表 3 可知标准液重复测定峰面积的相对标准差较低，具有良好的重现性和精密度。回收率试验 采用加标样回收法，取同一苹果样品 2 份，1 份作为本底，另 1 份加入一定量的 4 种标准有机酸溶液，按试验方法平行测定五次，计算回收率（回收率为：用添加标样样品的测出量减去样品测出量，再除以加入的标样量）表 4 回收率试验 Table 4 Determined recovories of oxalic acid,malic acid,citric acid and succinic acid standard solution repeat determination 有机酸 本

38、底值/mgmL-1 添加量/mgmL-1 测定值/mgmL-1 回收率/%草酸 苹果酸 柠檬酸 琥珀酸 由表 4 可知，4 种有机酸的平均回收率分别为%、%、%、%，说明该方法具有较高的回收率。样品中的草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸分离图谱 取待测样品浸提液，在与测定草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸标准液相同的色谱条件下测定，结果见图(10)，样品中的草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸得到很好的分离。百度文库-让每个人平等地提升自我 12 图 10 长富 2 号 Chang Fu 2 注：1：草酸；2：苹果酸；3：柠檬酸；4：琥珀酸 由图 10 可知样品长富 2 号中各种有机酸含量是不均等的。它们色谱峰由

39、高至低的顺序依次是：草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸。草酸的色谱峰最高，在 800 mAU 以上，面积较大。而苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的色谱峰均在 200 mAU 以下，面积也较小。图 11 黄香蕉果 Yellow banana fruit 注：1：草酸；2：苹果酸；3：柠檬酸；4：琥珀酸 由图 11 可知样品黄香蕉果中各种有机酸含量是不均等的。它们色谱峰由高至低的顺序依次是：草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸。草酸的色谱峰最高，在 200250 mAU 之间，保留时间/min 0 1 2 3 4 5 6 峰高/mAU 0 50 100 150 200 250 300 350 1 2 3 4 保留时间/m

40、in 0 1 2 3 4 5 6 峰高/mAU 0 200 400 600 800 1 2 3 4 百度文库-让每个人平等地提升自我 13 面积较大。苹果酸的色谱峰在 150200 mAU 之间，面积也较大。柠檬酸、琥珀酸的色谱峰均在 50 mAU 以下，面积较小。图 12 水晶富士 Crystal Fuji 注：1：草酸；2：苹果酸；3：柠檬酸；4：琥珀酸 由图 12 可知样品水晶中各种有机酸含量是不均等的。它们色谱峰由高至低的顺序依次是：草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸。草酸的色谱峰最高，在 400 mAU 以上，面积较大。而苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的色谱峰均在 100 mAU 以下，面积较小。

41、其中琥珀酸的色谱峰几乎不可见，面积很小。图 13 烟富 3 号 Yanfu 3 注：1：草酸；2：苹果酸；3：柠檬酸；4：琥珀酸 由图 13 可知样品烟富 3 号中各种有机酸含量是不均等的。它们色谱峰由高至低的顺序依次是：草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸。草酸的色谱峰最高，在 400 mAU 以上，面积保留时间/min 0 1 2 3 4 5 6 7 峰高/mAU 0 100 200 300 400 1 2 3 4 保留时间/min 0 1 2 3 4 5 6 0 50 100 150 200 250 300 350 400 1 2 3 4 峰高/mAU 百度文库-让每个人平等地提升自我 14 也

42、较大。柠檬酸、琥珀酸的色谱峰均在 100 mAU 以下，面积较小。图 14 烟富 6 号 Yanfu 6 注：1：草酸；2：苹果酸；3：柠檬酸；4：琥珀酸 由图 14 可知样品烟富 6 号中各种有机酸含量是不均等的。它们色谱峰由高至低的顺序依次是：草酸、苹果酸、柠檬酸和琥珀酸。草酸的色谱峰最高，在 400 mAU 以上，面积较大。苹果酸的色谱峰在 200300 mAU 之间，面积也较大。柠檬酸、琥珀酸的色谱峰几乎不可见，面积比较小。苹果样品分析 按照上述色谱条件，将不同品种的苹果样品溶液进样L 时进行色谱分析，测定所含草酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的色谱峰峰面积，代入工作曲线计算出其含量。结果见

43、表5。表 5 不同样品有机酸含量测定结果 Table 5 The contents of organic acid in apple from cultivars 品种 草酸/mgmL-1 苹果酸/mgmL-1 柠檬酸/mgmL-1 琥珀酸/mgmL-1 总酸 SUM 长富 2 号 黄香蕉 水晶富士 烟富 3 号 烟富 6 号 由表 5 可知，长富 2 号有机酸含量由高到低的顺序依次是：琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、草酸。其中琥珀酸含量最高（mg mL-1），苹果酸次之（mg mL-1），草酸含量最低（mg mL-1）；黄香蕉的有机酸含量由高到低的顺序依次是：苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、草酸。其中苹果酸

44、含量较高 mgmL-1)，草酸 mgmL-1）含量最低；水晶富士和烟富 3 号的有机酸含量由高到低都是：琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、草酸。其中，它们的苹果酸含量都是较高的(分别为 mgmL-1和 mgmL-1)，苹果酸和柠檬酸含量接近；烟富 6 号有机酸含量由高到低的顺保留时间/min 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 峰高/mAU 0 100 200 300 400 1 2 3 4 百度文库-让每个人平等地提升自我 15 序依次是：苹果酸、琥珀酸、柠檬酸、草酸。其中苹果酸含量最高 mgmL-1)，草酸酸含量最低 mgmL-1)。在这五种不同品种的苹果中，以苹果酸和琥珀酸为主要有机酸，其中苹

45、果酸含量最高，为 mg mL-1，占总酸含量的 25%72%。琥珀酸次之，含量在 mg mL-1，占总酸含量的 14%41%。苹果的品质鉴评 分别对五种苹果进行外观、肉质、含汁量、口感等鉴定。表 6 品质鉴评 品种 特性 长富 2 号 个大，圆形或长圆形，果面红色光滑呈片状，底色黄绿，色泽鲜艳，无锈，蜡质厚，果肉黄白色，细嫩，松脆，汁多，酸甜可口，香味浓郁，耐贮藏，货价期长 黄香蕉 外皮黄或发青，果肉发黄，口感沙瓤，软，味甜，水晶富士 果大整齐，色泽鲜艳，果面光滑,果肉脆嫩，水分大，舒适香甜，爽口，烟富 3 号 果实大为圆至近长圆形、端正，色泽浓红艳丽，果肉淡黄色，致密脆甜，烟富 6 号 果实

46、圆至长圆形，易着色，色泽浓红，果面光洁，果皮较厚，果肉淡黄色，肉质致密硬暗，汁多味甜，品质上等。结合表 5、表 6 可知长富 2 号的酸度 mgmL-1）较小，琥珀酸较多，呈甜味；黄香蕉的总酸度 mgmL-1)较大，偏酸，苹果酸含量高 mgmL-1)，(味道柔和,具有较高的缓冲指数，具特殊香味)。水晶富士和烟富 3 号的酸度都不大,属酸甜适口型。烟富 6 号的酸度较大,苹果酸和琥珀酸含量较多。果皮较厚,肉质致密硬暗。酸甜可口,汁多,品质上等。4 讨论 据 Timothy 17报道，流动相中不含磷酸盐时，各种有机酸的分离效果不好，添加磷酸盐（如KH2PO4）有利于提高分离效果。但是由于高浓度过盐

47、会对泵和柱子的寿命产生不良影响，本实验在参考文献的基础上，选用 L 的 KH2PO4作为流动相，并用磷酸调节 pH 值到，有很好的分离度。有机酸为弱酸,在水溶液中会解离，为了使有机酸能够以分子的形式在色谱柱上保留，因此，可通过调节流动相的 PH 以达到抑制解离的作用。当 pH 从增加到时，各酸的保留时间会逐渐靠近。pH 在的范围内,各种酸都能较好分离。pH时,各种酸会重叠,甚至颠倒。pH黄香蕉果长富 2 号烟富 3号水晶富士。可见，烟富 6 号的酸度最大，而水晶富士的酸度最小。(3)不同品种的苹果有机酸种类有较大的差别。其中，长富 2 号、水晶富士和烟富 3 号是以琥珀酸和苹果酸为主；黄香蕉是

48、以苹果酸为主，含量为 mgmL-1；烟富 6 号是以苹果酸为主，含量为 mgmL-1。(4)在这五种不同品种的苹果中，以苹果酸和琥珀酸为主要有机酸，其中苹果酸含量最高，为 mgmL-1，占总酸含量的 25%72%。琥珀酸次之，含量在 mgmL-1，占总酸含量的 14%41%。(5)从感官品质看，长富 2 号的酸度较低，偏甜。黄香蕉果总酸度较大、偏酸，水晶富士、烟富 3 号酸度适中，爽口。烟富 6 号的酸度大，可口。百度文库-让每个人平等地提升自我 17 致谢 感谢我的指导老师杨青珍，杨老师以其严谨求实的治学态度、高度的敬业精神、兢兢业业、孜孜不倦以求的工作作风和大胆尝试的进取精神对我产生重要影

49、响。她渊博的知识、开阔的视野和敏锐的思维给了我深深的启迪。她严谨细致、一丝不苟的作风一直是我工作、学习中的榜样；她循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无限的启迪。尤其给我以极大的空间，能充分地思考，认真地实验，给予我无限的启迪。感谢孙元琳副教授，吴海霞老师，苗莉芸老师等在论文设计与试验过程中提出了许多宝贵的意见，并给予了许多具体的建议和帮助。感谢景主任、杨海英老师、霍老师、吴月英老师、王芮东老师等对我的教育培养，他们和蔼、宽容的态度，帮助我能够很快的融入我们这个新的实验室。他们细心指导我的学习与研究；在此，我要向诸位老师深深地鞠上一躬。同时也为我提供了良好的实验条件。感谢许多同学尤其是王磊的协

50、助与支持，还有实验室的同学们给了我极大的帮助，他们教会了我严谨的实验精神和很多实验方法。感谢我的爸爸妈妈、养育之恩，无以回报，你们永远健康快乐是我最大的心愿。在论文即将完成之际，我的心情无法平静，从开始进入课题到论文的顺利完成，有多少可敬的师长，同学，朋友给了我无言的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意！杨俊琴 2009-5-15 百度文库-让每个人平等地提升自我 18 参考文献 1 舒肇蘇.农家果品加工技术M.广东:广东人民出版社,2000.2 南京大学无机及分析化学编写组.无机及分析化学M.北京:高等教育出版社,2003.3 高海燕,王善广,胡小松.利用反高效液相色谱法测定梨汁中有机酸的种类和含