实验5 叶绿素a与叶绿素b含量的测定(精品).ppt

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1、实验六实验六 叶绿素含量的测定叶绿素含量的测定 一、实验目的一、实验目的1 1、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液、熟悉在未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素中测定叶绿素a a、b b和类胡萝卜素的和类胡萝卜素的方法及计算；方法及计算；2 2、测定叶绿素含量、测定叶绿素含量a a与叶绿素与叶绿素b b含量的含量的意义。意义。二、实验原理二、实验原理 n叶叶绿绿素素提提取取液液中中同同时时含含有有叶叶绿绿素素a a、叶叶绿绿素素b b和和类类胡胡萝萝卜卜素素，三三者者的的吸吸收收光光谱谱虽虽有有不不同同，但但又又存存在在着着明明显显的的重重叠叠，在在不不分分离离他他们们的的情情况况下下同同时时测测定

2、定叶叶绿绿素素a a、叶叶绿绿素素b b、类类胡胡萝萝卜卜素素的的浓浓度度，可可分分别别测测定定在在663663nmnm、645645nmnm、470 470 nm nm（分分别别是是叶叶绿绿素素a a、叶叶绿绿素素b b、类类胡胡萝萝卜卜素素在在红红光光区区的的吸吸收收峰峰）的的光光吸吸收收，然然后后根根据据Lambert-BeerLambert-Beer定定律律，计计算算出出提提取取液液中中叶叶绿绿素素a a、叶叶绿绿素素b b、和和类类胡萝卜素的浓度。胡萝卜素的浓度。Ca=12.21ACa=12.21A663663-2.81A-2.81A645645（1 1）CbCb=20.13A=20

3、.13A645645-5.03A-5.03A663663（2 2）CT=Ca+Cb=8.05ACT=Ca+Cb=8.05A663663+20.29A+20.29A645645 （3 3）Cx.cCx.c=(1000D=(1000D470470-3.27Ca-104Cb)/229 -3.27Ca-104Cb)/229 （4 4）CaCa叶绿素叶绿素a a的浓度（单位为的浓度（单位为mg/Lmg/L）CbCb叶绿素叶绿素b b浓度（单位为浓度（单位为mg/Lmg/L）CTCT叶绿素的总浓度（单位为叶绿素的总浓度（单位为mg/Lmg/L）Cx.cCx.c类胡萝卜素浓度（单位为类胡萝卜素浓度（单位为m

4、g/Lmg/L）82.0482.04和和9.279.27叶绿素叶绿素a a和叶绿素和叶绿素b b在在663663nmnm下的比吸收系数下的比吸收系数16.7516.75和和45.6045.60叶绿素叶绿素a a和叶绿素和叶绿素b b在在645645nmnm下的比吸收系数下的比吸收系数三、实验器料三、实验器料1 1、材料：、材料：n菠菜或其它绿色植物叶片菠菜或其它绿色植物叶片2 2、试剂：、试剂：n 80%80%丙丙酮酮或或96%96%乙乙醇醇；石石英英砂砂；CaCOCaCO3 3；3 3、仪仪器器：分分光光光光度度计计（分分光光光光度度计计的的使用）使用）、高速离心机、高速离心机四、实验步骤四

5、、实验步骤 1 1、提取叶绿素、提取叶绿素 选取有代表性的植物叶片，称取选取有代表性的植物叶片，称取0.0.2g2g剪碎后置剪碎后置于研钵中，加入于研钵中，加入5 5ml 80%ml 80%丙酮，少许丙酮，少许CaCOCaCO3 3和石英和石英砂。充分研磨（组织变白），再加砂。充分研磨（组织变白），再加10ml80%10ml80%丙丙酮，静止酮，静止3-53-5分钟，冲洗研钵后转至离心管，定分钟，冲洗研钵后转至离心管，定容至容至15ml,300015ml,3000转、转、1515分钟，取上清液用分钟，取上清液用80%80%丙酮丙酮定容至定容至25ml25ml。2.2.测定测定ODOD值：值：取

6、上清液取上清液1ml1ml，加，加80%80%丙酮丙酮4ml4ml，以以80%80%丙酮丙酮作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿作空白对照，用分光光度计分别测定叶绿素提取液在素提取液在645645nmnm、663663nmnm、470 nm470 nm下的吸光度。下的吸光度。3.3.计算：计算：把测出的吸光值带入把测出的吸光值带入(1)(2)(3)(4)(1)(2)(3)(4)式计算叶式计算叶绿素绿素a a、b b、a+ba+b和类胡萝卜素的浓度。和类胡萝卜素的浓度。根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：根据下式求出植物组织中叶绿素的含量：叶绿素的含量（叶绿素的含量（mg/g)=mg/g)=c cvn/mvn/mCC叶绿素的浓度（叶绿素的浓度（mg/L)mg/L)；vv提取液体积提取液体积(ml)(ml)；nn稀释倍数；稀释倍数；mm样品鲜重（样品鲜重（g)g)作业作业：比比较较阳阳生生植植物物和和阴阴生生植植物物的的叶叶绿绿素素有有何何不不同？同？下周实验：下周实验：植株磷素的测定植株磷素的测定(钼蓝法钼蓝法)