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1、 药物血浆半衰期测定药物血浆半衰期测定【目的目的】学习药物血浆半衰期测定方法。学习药物血浆半衰期测定方法。【药品药品】10%水杨酸钠,水杨酸钠,10三氯醋三氯醋酸酸4ml,0.5肝素生理盐水,肝素生理盐水,10%三三氯化铁氯化铁【动物动物】家兔家兔【原理原理】血中药物浓度随时间推移呈血中药物浓度随时间推移呈规律性(规律性(一级一级动力学消除)下降。动力学消除)下降。【方法、步骤方法、步骤】1取取3支支离心管离心管标记标记1、2、3,加入,加入10三氯醋酸三氯醋酸4ml;取取9支支试管试管标记:标记:A1,A2,A3 B1,B2,B3 C1,C2,C3备用。备用。2取家兔一只,称重,麻醉(取家兔
2、一只,称重,麻醉(20乌拉坦乌拉坦5 ml/kg,2/3 iv,1/3 ip)向心端向心端头头端端动脉动脉夹夹3分离颈总动脉,头端用线结扎,分离颈总动脉,头端用线结扎,心端用动脉夹夹闭。心端用动脉夹夹闭。向心端向心端离离心心端端动脉动脉夹夹4动脉插管,备取血用。动脉插管,备取血用。5肝素化:肝素化:0.5肝素生肝素生理盐水理盐水2 ml/只,只,IV。6取血取血:开启动脉夹取血约开启动脉夹取血约11.5 ml,放入放入A1号试管,再从号试管,再从A1号试管准确号试管准确吸取吸取1 ml移入移入1号离心管,充分摇匀,号离心管,充分摇匀,以沉淀血浆蛋白。以沉淀血浆蛋白。7给药:给药:10%水杨酸钠
3、水杨酸钠2 ml/kg,IV。每次移入离心管的每次移入离心管的血量务必准确血量务必准确开启动脉夹取血时,不开启动脉夹取血时,不要将动脉夹抽离动脉要将动脉夹抽离动脉8 取血取血:在给药后在给药后20分钟和分钟和40分钟时,分钟时,开启动脉夹取血约开启动脉夹取血约11.5 ml20分钟分钟A2准确取准确取1 ml2号离心管号离心管40分钟分钟A3 准确取准确取1 ml3号离心管。号离心管。每次取血前应先将每次取血前应先将动脉插管内残余血动脉插管内残余血放掉!放掉!移入离心管的血移入离心管的血液摇匀或搅拌均液摇匀或搅拌均匀,以充分沉淀匀,以充分沉淀血浆蛋白血浆蛋白 9离心:离心:3000 rpm,3
4、分钟。分钟。漫漫倾倒上清液入漫漫倾倒上清液入对应对应编号的编号的B1、B2、B3号试管中。号试管中。从从B组管精确吸取上清液组管精确吸取上清液3 ml C组管组管 A1B1 C1 A2B2 C2 A3B3C310显色:各管加入显色:各管加入10%三氯化铁三氯化铁(FeCl3)0.5 ml,显色。显色。比色杯必须配套,擦干净比色杯必须配套,擦干净;721分光光分光光度计调零点时至少三次后再测;清洗度计调零点时至少三次后再测;清洗比色杯后用卫生纸比色杯后用卫生纸单向单向擦拭透光面,擦拭透光面,11比色、测光密度值:以比色、测光密度值:以C1号管为对号管为对照管,用照管,用721分光光度计在分光光度计在520 nm波波长下读取长下读取C2、C3号管的光密度值。号管的光密度值。12计算:计算:OD1和和OD2分别为分别为2、3号管的光密度值。号管的光密度值。公式推导公式推导时间时间时间时间零级零级一级一级零级零级一级一级对对数数浓浓度度浓浓度度血血11.5ml三氯醋酸三氯醋酸4ml离离心心(3000rpm.3min)倾入倾入吸取上清液3ml三氯化氯化铁铁0.5mlA1号号试管试管B1号号试管试管C1号号试管试管1号号离心管离心管操作流程图操作流程图标标记记管管称称重重麻麻醉醉分分离离动动脉脉肝肝素素化化动动脉脉插插管管取取血血1给给药药离离心心取取血血2、3显显色色比比色色