淮安地区生物科选修微生物的实验室培养学习教案.pptx

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1、会计学1淮安地区生物科选修淮安地区生物科选修(xunxi)微生物的实微生物的实验室培养验室培养第一页，共60页。细菌的外形细菌的外形(wi xn)与大小与大小细菌：单细胞不分枝的原核微生物。细菌：单细胞不分枝的原核微生物。细菌细胞微小而透明，通常用适当染料细菌细胞微小而透明，通常用适当染料(rnlio)染色后显微镜观察染色后显微镜观察图1-1 常见的三种(sn zhn)细菌典型形态A.球菌 B.杆菌 C.弧菌第1页/共59页第二页，共60页。细菌细胞由外向细菌细胞由外向(wi xin)(wi xin)里依里依次有鞭毛、菌次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞壁、细胞膜

2、、细胞质，细胞质细胞质，细胞质中又有液泡、储中又有液泡、储存性颗粒、核质存性颗粒、核质等。等。细菌细菌(xjn)的构造的构造图图1-3 1-3 细菌细菌(xjn)(xjn)的结构的结构第2页/共59页第三页，共60页。*细胞壁细胞壁n n结构特点：坚韧且有弹性结构特点：坚韧且有弹性n n细胞细胞(xbo)(xbo)壁有哪些功能？壁有哪些功能？n n 固定细胞固定细胞(xbo)(xbo)外形；外形；w w 保护细胞保护细胞(xbo)(xbo)免受外力的损伤；免受外力的损伤；w w 阻拦阻拦(zln)(zln)大分子物质进人细胞；大分子物质进人细胞；使细胞具有致病性及对使细胞具有致病性及对噬菌体的

3、敏感性。伤寒杆菌细胞壁中含毒素第3页/共59页第四页，共60页。有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠(ximin)体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜（如温度、水分适宜）的时候，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.第4页/共59页第五页，共60页。菌落菌落(jnlu)：n n单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见就会形成一个肉眼可见(kjin)的，具有一的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。定形态结

4、构的子细胞群体，叫做菌落。n n菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。第5页/共59页第六页，共60页。菌落(jnlu)细菌的菌落(jnlu)特征因种而异 第6页/共59页第七页，共60页。放线菌1、结构(jigu)：单细胞原核分支状的菌丝（基内菌丝、气生菌丝）第7页/共59页第八页，共60页。链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素 微生物中发现了几千种抗生素，其中(qzhng)2/3是由放线菌产生的 应用(yngyng):第8页/共59页第九页，共60页。病毒(bngd)的结构第9页/共59页第十页，共60页。病毒(bngd)第10页/共59页第十一页，共60页。SA

5、RS病毒(bngd)、禽流感病毒(bngd)第11页/共59页第十二页，共60页。朊病毒朊病毒(bngd)（蛋白质病毒（蛋白质病毒(bngd)）第12页/共59页第十三页，共60页。2、病毒(bngd)的增殖：第13页/共59页第十四页，共60页。真菌(zhnjn)第14页/共59页第十五页，共60页。如图是酵母菌电子显微镜下的形态(xngti)结构酵母菌和霉菌(mjn)青霉第15页/共59页第十六页，共60页。生殖(shngzh)直立(zh l)菌丝 营养菌丝腐生(fshng)生活孢子生殖第16页/共59页第十七页，共60页。细菌细菌(xjn)的营养类型的营养类型 n n根据细菌所利用根据细

6、菌所利用(lyng)(lyng)的能源和碳源的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。的不同，将细菌分为两大营养类型。n n自养菌（自养菌（autotrophautotroph）n n异养菌（异养菌（heterotrophheterotroph）n n腐生菌腐生菌n n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌第17页/共59页第十八页，共60页。第18页/共59页第十九页，共60页。了解有关培养基的基础知识，进行(jnxng)无菌技术的操作，进行(jnxng)微生物的培养。一、课题(kt)目标：掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和平板划线法等基本操作技术，熟练、规范地进行无菌操作，成功(chngg

7、ng)地培养微生物。无菌技术的操作。二、课题重点和难点：三、技能目标：第19页/共59页第二十页，共60页。一、基础知识：（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成的，专供微生物生长(shngzhng)繁殖使用的混合营养液。（1）按物理(wl)状态来分：培养基可分为固体培养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等。（2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别培养基。（3）按成分来分，可分为天然培养基和合成培养基。1.培养基的类型(lixng)和用途第20页/共59页第二十一页，共60页。2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录(fl)内容)3.不管哪种培养基

8、，一般都含有水、碳源、和氮源、无机盐、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,例如:生长因子(即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶(m dn)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。第21页/共59页第二十二页，共60页。选择选择(xunz)培养培养基基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物加入青霉素等抗生素的培养基:分离导入了目的基因的受体细胞加入氨基(nj)喋呤、次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培养基:分离杂交瘤细胞第22页/共

9、59页第二十三页，共60页。根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点(qudin)：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。合成(hchng)培养基:第23页/共59页第二十四页，共60页。天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。优点：营养成分丰富(fngf)，培养效果好缺点：来源受限;成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生支原体污染;天然(tinrn)培养基：第24页/共59页第二十五页，共60页。血清中含有：多

10、种蛋白(dnbi)质（白蛋白(dnbi)、球蛋白(dnbi)、铁蛋白(dnbi)等）多种金属离子；激素；促贴附物质，如纤粘蛋白(dnbi)、冷析球蛋白(dnbi)、胶原等。各种生长因子转移蛋白(dnbi)不明成分 人工合成培养基只能维持细胞(xbo)生存，要想使细胞(xbo)生长和繁殖，还需补充一定量的天然培养基（如血清）。第25页/共59页第二十六页，共60页。液体(yt)培养基：表面(biomin)生长均匀(jnyn)混浊生长沉淀生长第26页/共59页第二十七页，共60页。固体(gt)培养基：菌落，菌苔第27页/共59页第二十八页，共60页。半固体(gt)培养基：无动力(dngl)有动力(

11、dngl)(弥散)(是否(sh fu)运动)第28页/共59页第二十九页，共60页。4.培养基的用途(yngt)液体培养基：增菌固体(gt)培养基：纯化，增菌半固体(gt)培养基：动力检测，保种第29页/共59页第三十页，共60页。（二）无菌技术(jsh)1.无菌技术(jsh)的概念 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要学到的倒平板、平板划线操作，还是平板稀释涂布法，其操作中的每一步都需要做到“无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练(shlin)、规范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生物。第30页/共59页第三十一页，共60页。（）消毒定义：利用化学或物理(wl

12、)方法，杀死大部份致病微生物的过程。区分为高程度消毒（High-level Disinfection）、中程度消毒（Intermediate-level Disinfection）、低程度消毒（Low-level Disinfection）三种方式。2.消毒与灭菌(mi jn)的概念及两者的区别 第31页/共59页第三十二页，共60页。（2）灭菌(mi jn)的定义：以化学剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖(fnzh)体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。第32页/共59页第三十三页，共60页。1、煮沸消毒法:100煮沸

13、5-6min2、巴氏消毒法：70-75 下煮30min或 80 下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤(p f)消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒(1)消毒(xio d)的方法：3.常用的消毒与灭菌(mi jn)的方法第33页/共59页第三十四页，共60页。1、灼烧灭菌(mi jn)2、干热灭菌(mi jn)：160-170 下加热1-2h。3、高压蒸气灭菌(mi jn)：100kPa、121 下维持15-30min.(2)灭菌(mi jn)的方法：第34页/共59页第三十五页，共60页。最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物(shngw)，包括最耐热的

14、某些微生物(shngw)的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物(shngw)不能通过。而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物(shngw)的污染而设计的。第35页/共59页第三十六页，共60页。分类分类定义定义方法方法灭菌法灭菌法杀灭一切微生物杀灭一切微生物物理法：热力、辐射、微物理法：热力、辐射、微波、等离子体波、等离子体化学法：醛类、烷化剂化学法：醛类、烷化

15、剂高效消高效消毒法毒法杀灭一切致病微杀灭一切致病微生物生物紫外线、含氯剂、臭氧、紫外线、含氯剂、臭氧、复配剂等复配剂等中效消中效消毒法毒法杀灭除芽孢外的杀灭除芽孢外的致病微生物致病微生物超声波、碘类、醇类、酚超声波、碘类、醇类、酚类类低效消低效消毒法毒法杀灭细菌繁殖体、杀灭细菌繁殖体、亲脂病毒亲脂病毒单链季胺盐、双胍类、中单链季胺盐、双胍类、中草药、金属离子草药、金属离子无菌技术(jsh)第36页/共59页第三十七页，共60页。3.微生物实验室培养(piyng)的基本操作程序1、器具的灭菌2、培养(piyng)基的配制3、培养(piyng)基的灭菌4、倒平板5、微生物接种6、恒温箱中培养(pi

16、yng)7、菌种的保存第37页/共59页第三十八页，共60页。1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来(wili)微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌(mi jn)。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手 答：无菌技术(jsh)还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。第38页/共59页第三十九页，共60页。三、实验(shyn)操作 1.制备(zhbi)牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）第39页/共59页第四十页，共60页。1计算、称量2溶化

17、3调pH：pH764过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程(guchng)中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞7包扎操作步骤第40页/共59页第四十一页，共60页。8灭菌:将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培养皿用旧报纸(bozh)包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。9倒平板:待培养基冷却到50 左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.10无菌检

18、查：将灭菌的培养基放入37的温室中培养2448小时，以检查灭菌是否彻底。第41页/共59页第四十二页，共60页。倒平板(pngbn)技术第42页/共59页第四十三页，共60页。1.培养基灭菌(mi jn)后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降(xijing)到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。第43页/共59页第四十四页，共60页。3.平板冷凝(lngnng)后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程(guchng)中

19、，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：平板冷凝(lngnng)后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。第44页/共59页第四十五页，共60页。2、纯化(chn hu)大肠杆菌接种(jizhng)方法有：平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法:通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面.在数次画线后,可以分离到由

20、一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是(jish)菌落.微生物的接种技术第45页/共59页第四十六页，共60页。第46页/共59页第四十七页，共60页。第47页/共59页第四十八页，共60页。1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束(jish)时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端(m dun)，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结

21、束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。第48页/共59页第四十九页，共60页。2.在灼烧(zhu sho)接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答：以免(ymin)接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是(zn sh)从上一次划线的末端开始划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。第49页/共59页第五十页，共60页。第50页/共59页第五十一页，共60页。第51页/共59页第五十二页，共60页。涂布平

22、板的所有操作都应在火焰附近进行(jnxng)。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行(jnxng)无菌操作？应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离(jl)要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。第52页/共59页第五十三页，共60页。微生物的恒温(hngwn)培养微生物的恒温微生物的恒温(hngwn)(hngwn)培养培养第53页/共59页第五十四页，共60页。微生物的恒温微生物的恒温(hngwn)(hngwn)培养培养第54页/共59页第五十五页，共60页。菌种的保存菌种的保存(bocn)(bocn)1、临时保藏：接种到固体

23、斜面培养基，菌落(jnlu)长成后置于4冰箱保存。2、长期保存：甘油冷冻管藏法第55页/共59页第五十六页，共60页。四、课题(kt)成果评价 （一）培养基的制作是否合格 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。（二）接种操作是否符合无菌要求 如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次(zi c)练习。（三）是否进行了及时细致的观察与记录 培养12 h与24 h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显

24、不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。第56页/共59页第五十七页，共60页。本课题(kt)知识小结:第57页/共59页第五十八页，共60页。【典例解析(ji x)】例1关微生物营养物质的叙述中，正确的是A.是碳源的物质不可能同时(tngsh)是氮源 B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐 D.无机氮源也能提供能量 解析：不同的微生物，所需营养物质有较大差别，要针对微生物的具体情况分析。对于A、B选项，它的表达是不完整的。有的碳源只能是碳源，如二氧化碳；有的碳源可同时是氮源，如NH4HCO3；有的碳源同时是能源，如葡萄糖；有的碳源同时是氮源，也是能源，如蛋白胨。对于C选项，除水以外的无机物种类繁多，功能也多样(du yn)。如二氧化碳，可作为自养型微生物的碳源；NaHCO3，可作为自养型微生物的碳源和无机盐；而NaCl则只能提供无机盐。对于D选项，无机氮源提供能量的情况还是存在的，如NH3可为硝化细菌提供能量和氮源。答案：D第58页/共59页第五十九页，共60页。感谢您的观看(gunkn)。第59页/共59页第六十页，共60页。