光合作用色素含量测定(精品).ppt

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1、叶绿素含量测定叶绿素含量测定 实验目的：掌握实验目的：掌握未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a，b含量的方法及其计算。试验原理：试验原理：混合液中两种组分存在时，可通过测定吸光度，根据LambertBeer定律计算二者含量。叶绿素a的最大吸收峰在663 nm，叶绿素b最大吸收峰在645 nm。根据LambertBeer定律，两种组分的混合液，二组分的浓度C与光密度OD之间的关系如下：OD663CaKa663CbKb663 OD645=CaKa645+CbKb645 从文献中查得Ka663为82.04，Kb663为9.27；Ka645为16.75，Kb645为45.60.通过代数推算，得Ca1

2、2.7OD6632.69OD645Cb22.9OD6454.68OD663CTCaCb8.02OD66320.21OD645式中单位为mg L1。Ccx（1000D470-3.27Ca-104Cb）/229 =4.37*D470+2.11*D663-9.1*D646器材与试剂：器材与试剂：实验仪器：高级型分光光度计，离心机，台式天平，见到，研钵，漏斗，移液管。实验试剂：丙酮，碳酸钙。实验材料：植物叶片。实验步骤：实验步骤：1、色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取0.3 g放入研钵中加80%丙酮2 mL，加适量石英砂及少许碳酸钙，研磨成匀浆，再加80丙酮2 mL，将匀浆转入离心管，并用适量80丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80丙酮定容至8 mL。2、测定光密度：取上述色素提取液1 mL，加80丙酮4 mL稀释后转入比色杯中，以80丙酮为对照，分别测定663 nm、645 nm处的光密度值。3、按公式计算叶绿素a，b及总叶绿素含量。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素含量。