肿瘤标志物检测的质量保证(新)ppt课件.ppt

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1、肿瘤标志物检测的质量保证分析前的质量保证（一）样本的类型需要检查试剂盒中关于产品信息的要求。对于每一个测试项目的适合的样品管，实验室有责任提供明确的建议，并确保供应商的要求被遵循。（二）样本稳定性 肿瘤标志物通常是稳定但应当尽快分离血清或血浆贮存于4（短期）、-30（长期）。更长期保存应置于-70。避免对标本的加热处理，尤其是hCG和PSA。周围温度较高对其转变时间有潜在的影响，从而影响检测的结果。（三）测试项目的选择 肿瘤标志物测试项目的申请应当根据当地一致认可的准则，例如国家或国际的肿瘤标志物应用指南。美国临床生物化学学会(NACB)肿瘤标志物临床应用指南（四）样本采集的时机对于大多数标志

2、物没有明显的证据表明它们在一天中存在明显的变化，所以在一天中的任何时候都可以采集样本。测定PSA的标本采集应当在与前列腺有关的任何操作之前进行。不应当在经期采集CA125的标本，因为此期CA125的血清浓度升高2至3倍。（五）患者的临床情况在子宫内膜异位症患者以及妊娠的前、中期CA125可能轻微升高；在良性腹水患者，CA125可显著升高。泌尿道感染和前列腺炎可能使显著升高，在抗感染治疗成功后应当再次采样以确定结果的准确性。肾衰可能导致CEA和细胞角蛋白测定结果不适当的升高。胆汁淤积可能显著升高血清CA199的浓度。（六）药物与其他治疗措施的影响5还原酶抑制剂导致PSA浓度中度升高（-50%）。

3、化疗后肿瘤标志物浓度可能短暂升高。大麻可能使血清hCG浓度短暂升高。对于某些测试方法，吸烟可能使CEA的测定值轻度升高。（七）样本污染唾液污染能够显著升高CEA、CA199和TPS的测定值。如果怀疑有污染应当重新采集标本重复测定。分析中的质量保证(一)方法的确认使用可靠的方法进行肿瘤标志物检测 在将某一方法应用于临床常规检测以前,应当经过认证,如FDA或CE的批准。（二）室内质量控制由由实验室工作人员实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和监测和控制本实验室工作的精密度控制本实验室工作的精密度

4、，提高本室常规工作中，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。否可靠、可否发出报告的一项工作。理想的肿瘤标志物室内质控样本理想的肿瘤标志物室内质控样本的条件的条件基质与待测样本一致；稳定；瓶间差小;靶值或预期结果已定；无已知的生物传染危险性；单批可大量获得；价廉肿瘤标志物质控样本浓度的选择肿瘤标志物质控样本浓度的选择 对于所有的肿瘤标志物，都应当包括阴性质控品和低浓度阳性质控品。此外，最好还包括一个高浓度的质控品。关于室内质控的一些基本概念关于室内质控的一些基本概念质控规则的表达方式常用质控规则的

5、符号及定义 Levey-Jennings质控图方法 Westgard多规则质控方法 质控规则的表达方式质控规则的表达方式通常质控规则以符号AL来表示，其中A为质控测定中超出质量控制限的测定值的个数，L为控制限。当质控测定值超出控制限L时，即可将该批测定判为失控。常用的13S质控规则，其中1为原式中的A，3s为原式中的L，表示均值3s，其确切的含义为：在质控测定值中，如果有一个测定值超出均值3s范围，即可将该批测定判为失控。常用质控规则的符号及定义常用质控规则的符号及定义符符 号号 定定 义义12S 一个质控测定值超出2s控制限。13S 一个质控测定值超出3s控制限。22S 连续两个质控测定值同

6、时超出+2s或2s控制限。R4S 同一批测定中，两个不同浓度质控物的测定值之间的 差值超出4s控制限。41S 四个连续的质控测定值同时超出+1s或1s控制限。10X 十个连续的质控测定值同时处于均值的同一侧。1 13s3s 质控规则举例质控规则举例+3s+3s+2s+2s+1s+1s-3s-3s-2s-2s-1s-1sMeanMean1 12 25 54 43 36 67 78 89 91010违背违背13s 规则规则BQC2 Page 792 22s2s 质控规则举例质控规则举例+3s+3s+2s+2s+1s+1s-3s-3s-2s-2s-1s-1sMeanMean1 12 25 54 43

7、 36 67 78 89 91010违背违背22s 规则规则BQC2 Page 80R R4s4s 质控规则举例质控规则举例+3s+3s+2s+2s+1s+1s-3s-3s-2s-2s-1s-1sMeanMean1 12 25 54 43 36 67 78 89 91010违背违背R4s 规则规则4 41s1s 质控规则举例质控规则举例+3s+3s+2s+2s+1s+1s-3s-3s-2s-2s-1s-1sMeanMean1 12 25 54 43 36 67 78 89 91010违背违背41s 规则规则1010 x x 质控规则举例质控规则举例+3s+3s+2s+2s+1s+1s-3s-3

8、s-2s-2s-1s-1sMeanMean1 12 25 54 43 36 67 78 89 91010违背违背10 x 规则规则LeveyLevey-Jennings-Jennings质控图方法质控图方法也称Shewhart质控图，是由美国的Shewhart 于1924年首先提出，并用于工业产品的质量控制。二十世纪五十年代初，Levey-Jennings将其引入临床检验的质量控制。经Henry和Segalove的改良，即为目前常用的Levey-Jennings质控图。Levey-Jennings质控图质控图Levey-Jennings质控图质控图基本的统计学含义基本的统计学含义稳定条件下，在

9、20个IQC结果中不应有多于1个结果超过2SD（95.5%可信限）限度；在1000个测定结果中超过3SD（99.7%可信限）的结果不多于3个。如以2s为失控限，假失控的概率为4.5%。如以3s为失控限，假失控的概率为0.3%。Levey-Jennings质控图方法的特点质控图方法的特点优点：简单明了缺点：以2s为失控限，假失控的概率太高，通常不能接受。以3s为失控限，假失控的概率低，但误差检出能力不强。Westgard多规则质控方法多规则质控方法Westgard多规则质控方法即是将前述的多个质控规则同时应用进行质控判断的方法。最初常用的有六个质控规则，即12S、13S、22S、R4S、41S和

10、10X，其中12S规则作为告警规则。13S和R4S规则反映的是随机误差。22S、41S和10X反映的是系统误差，系统误差超出一定的程度，也可从13S和R4S规则反映出来。Westgard多规则质控方法的特点多规则质控方法的特点在Levey-Jennings质控图方法的基础上产生，具有Levey-Jennings 质控图方法的优点，可通过相似的质控图来进行分析。假失控和假告警概率低。误差检出能力增强。室内质控方法的设计室内质控方法的设计功效函数图法功效函数图法简易质控法简易质控法OPSpecs图法图法 1.确定质量目标确定质量目标检测项目的临床应用需要怎样的质量检测项目的临床应用需要怎样的质量?

11、以总允许误差(TEa)表示总允许误差的确定 根据参考值制定的标准 根据临床观察制定的标准 根据生物学变异制定的标准 根据实验室技能状态制定的标准 室间质量评价的评价准则作为分析质量要求（例如美 国临床实验室改进修正案（CLIA88）能力验证分析 质量要求）2.2.评价分析方法评价分析方法确定每一项目的不精密度（用CV%表示）和不准确度（用Bias表示）。3.计算临界系统误差计算临界系统误差临界系统误差临界系统误差 用于描述需要用于描述需要QCQC程序检出的误差大小指标程序检出的误差大小指标 SEc=(TEa-|bias|)/cv -1.65）4.4.将将“稳定性稳定性”分为三个等级分为三个等级

12、 “良好”：测定过程具有良好的过程能力(即高的精密度)和高的过程稳定性(即很少有问题)“差”：差的过程能力和低的过程稳定性(认为方法经常出现问题)“中等”：处于两者之间。5.5.决定使用哪一个质控选择表格用作选择质控方法决定使用哪一个质控选择表格用作选择质控方法决定使用哪一个质控选择表格用作选择质控方法决定使用哪一个质控选择表格用作选择质控方法室内质控的实际操作室内质控的实际操作 1.1.设定靶值设定靶值 靶值必须在实验室内使用自己现行的测定方法 进行确定，定值质控品的标定值只能做为确定 靶值的参考。计算累积平均数。2.2.设定控制限设定控制限 控制限通常以标准差倍数表示。计算累积标准差。3.

13、3.绘制质控图及记录质控结果绘制质控图及记录质控结果4.质控方法（规则）的应用质控方法（规则）的应用将设计的质控规则应用于质控数据，判断每一分析批是在控还是失控。5.室内质控数据的管理室内质控数据的管理 每月室内质控数据统计处理保存及质控数据的周期性评价6.失控的处理失控的处理IQCIQC的局限性的局限性在免疫测定中在免疫测定中IQCIQC可能测不出的误差可能测不出的误差 测定前测定前 测定中测定中 测定后测定后 样本鉴定不对样本鉴定不对 样本吸取不对样本吸取不对 结果记录错误结果记录错误 样本贮存中变质样本贮存中变质 试剂加入不对试剂加入不对此类误差的发生率在不同的实验室有所不同，一此类误差

14、的发生率在不同的实验室有所不同，一般要求小于般要求小于0.1%0.1%，且应均衡地分布于测定前、，且应均衡地分布于测定前、测定中和测定后的不同阶段。测定中和测定后的不同阶段。（三）室间质量评价（三）室间质量评价（EQAEQA）EQAProficiency testing(PT)EQA质评样本质评样本样本特征与患者样本应尽量一致样本浓度与试验的临床应用相适应在样本发放的条件下稳定准确和稳定的靶值测试干扰的评估不存在不可避免的传染危险性EQA靶值靶值 提供参考方法值或参加实验室的修正均值或参考实验室均值或方法或归组的方法均值评价方法评价方法特定参评实验室的评分根据其与其它实验室得分之间的关系，可分

15、为绝对评分和相对评分两种模式。绝对评分就是根据已定的靶值对参评实验室测定的每份质评样本计分，然后再计算该次质评的总分，以得分的高低评价参评实验室的水平。相对评分则是将参评实验室质评得分与所有参评实验室的平均分进行比较，观察其得分在全部参评实验室中所处的位置。EQA对测定技术的评价对测定技术的评价使用适当的统计学方法全面地对方法、试剂和单个参评实验室测定技术进行评价指明严重误差适当时评价测定的其它方面（如测定干扰）。EQA的局限性的局限性参评实验室没有同等的对待EQA样本和患者样本可能会妨碍给出不同结果的改良方法的发展在不同的EQA程序中，对实验室的评价可能不同参加参加EQAEQA应当注意的问题

16、应当注意的问题对于接收到的室间质评样本，要作好详细的记录；注意所报告结果的单位符合要求；报告要清楚、简洁；在测定EQA样本时，要以与常规样本完全相同的方式测定；对本实验室的测定方法、试剂及仪器要作详细、准确的说明，以进行正确的分组；对回报的室间质评结果进行评价。（四）引起肿瘤标志检测错误结果的潜在因素 高浓度hook效应：通常情况下，肿瘤标志物的浓度范围会有好几个数量级的差别，因此有可能需要确认高浓度的样本产生的hook效应，以避免低值结果的错误报告。这对于首次进行肿瘤标志物检测的病人犹为重要。（可以通过使用高结合力的固相抗体、分析两个稀释度的样本、或通过后续的分析步骤包括清洗步骤来减少hoo

17、k效应。）样本间的携带污染：检测高浓度的样本会产生样本间携带的潜在问题，因此有必要对此进行随时检查。方法：在高浓度的样本后加上一个正常患者的样本。嗜异性或人抗鼠抗体（HAMA）的干扰：IgG抗体可以和测定中使用的抗体进行反应。通常情况下，由于进行影像检查和治疗而使病人接触鼠单克隆抗体，由此而产生的人抗鼠抗体会使肿瘤标志物的检测出现错误结果。方法：使用商品化的阻断剂对样本进行前处理。在反应基质中加入非免疫的鼠血清。用聚乙二醇沉淀免疫球蛋白。用另一种方法进行检测。对样本进行系列稀释，了解其稀释线性。交叉反应：制造商应当提供关于其方法学特异性的清楚的信息。使用者应当了解这些信息。分析后的质量控制通过

18、询问医生获取病人的临床信息有必要鼓励临床医生提供带有说明的简短的临床信息（如手术后、化疗后等），这有助于确认偶然误差（如可能出现的仪器上加错标本等）。另外，当改变TM 检测方法和试剂时,必须通知临床,避免对结果的误判。实验室还应印发宣传资料介绍TM标本采集的注意事项,并提出TM 检测的合适频率供临床参考。这些措施对提高检测质量,用好TM非常有用。参考值范围的有效性通常来自相应的健康人群的参考值范围与初始治疗前的肿瘤病人有很好的相关性。此后，病人自己的“基线”值对于肿瘤标志物的测定结果具有更重要的参考意义。如果建立了患者自身的基线值，测定结果增高，甚至在参考范围内的增高都是有临床意义的，但须进行

19、进一步的工作。了解显著变化或临床相关变化的组成因素应包括生物学变异和分析数据的变异。一般病人的结果在排除检测方法引起的误差 后，上升或下降25都有临床价值。对于测定结果升高的标本必须复查，以防测定 误差。改变方法时应进行方法确认有助于确认由于改变方法而引起的肿瘤标志物检测结果的差异。（可能需要对以前检测过的样本再用新的方法进行检测来确认结果的差异。或是要求重新采集样本建立基线值。）了解肿瘤标志物的半寿期TM的半寿期是指肿瘤组织被完全切除后血液循环中TM浓度下降到50%的时间。有助于选择TM的监测时间和解释TM浓度变化与临床疗效和肿瘤复发的关系。若复查间隔时间太短,将误认为肿瘤未被完全切除；间隔时间太长,将无法区分是肿瘤复发还是疗效欠佳。一般应在治疗结束后5个半寿期采血为好,这时原有的TM约97%已被清除。28天CEA28天CA15357天CA1255天CA19948天CA72437天PSA23天fPSA1218小时HCG1236小时NSE 1天SCC1天CYFRA211天主要TM的生物半衰期结果报告中应当提供的信息肿瘤标志物检测结果的累积报告。实验室所使用的检测方法，尤其是当检测方法发生了改变，影响结果的变化趋势，从而使结果的解释变得困难。实验室应当建议肿瘤标志物检测的适当的频率，并提示何时需要重复测定以确认检测的结果。实验室与临床医生的交流。